Здесь мы представляем два простых в последующей пошаговые протоколы для парадигмы предпочтения места с использованием оптогенетики у мышей. Используя эти две различные установки, предпочтения и поведение избегания могут быть надежно оценены в одном аппарате с высокой пространственной и временной избирательностью, и в простой манере.
Понимание того, как активация нейронов приводит к специфическим поведенческим выходу, имеет основополагающее значение для современной неврологии. Сочетание оптогенетики у грызунов с поведенческим тестированием в проверенных парадигмах позволяет измерять поведенческие последствия при стимуляции различных нейронов в режиме реального времени с высокой пространственной и временной избирательностью, и, таким образом, установление причинно-следственных связей между активацией нейронов и поведением. Здесь мы описываем пошаговый протокол для парадигмы предпочтений местоположения в реальном времени (RT-PP), модифицированную версию теста предпочтения кондиционированных мест (CPP). RT-PP выполняется в трех-отсекном аппарате и может быть использован для ответа, если оптогенетическая стимуляция конкретной нейронной популяции является полезным или отрицательным. Мы также описываем альтернативный вариант протокола RT-PP, так называемый протокол предпочтения нейтрального отсека (NCP), который может быть использован для подтверждения неприятия. Эти два подхода основаны на расширении классической методологии, основанной на поведенческой фармакологии и недавней реализации оптогенетики в области неврологии. Помимо измерения предпочтений места в режиме реального времени, эти установки могут также дать информацию об условном поведении. Мы предоставляем простые в последующей пошаговые протоколы наряду с примерами наших собственных данных и обсуждаем важные аспекты, которые следует учитывать при применении такого рода экспериментов.
Внедрение оптогенетики, современный нейробиологический экспериментальный инструмент, в котором свет используется для контроля нейронной активности, в последние годы привело к крупным достижениям в понимании того, как конкретные нейронные популяции влияют на поведение1,2,3. Выдающаяся пространственная и височная избирательность оптогенетики позволяет установить причинно-следственные связи между возбуждением или ингибированием клеточных групп, представляющих интерес, и поведенческим выходом2,3. Пространственная селективность в оптогенетике обычно обеспечивается через систему Cre-Lox, в которой активность рекомбины Cre приводит к рекомбинации любых последовательностей ДНК, присутствующих между участками Локса, так называемых флексированных аллелей (в окружении локс-сайтов)4. Цель с использованием системы Cre-Lox в оптогенетике заключается в достижении экспрессии аллелей, кодирующих оптогенетические опсины в специфических нейронах, представляющих интерес, оставляя окружающие нейроны лишенными экспрессии. Опсины являются светочувствительными белками, которые при светостимуляции конкретной длины волны позволяют ионный поток, который влияет на нервную возбудимость или влияет на клеточные функции, модулируя вниз по течению эффектор пути. Новые варианты опсинов, которые отличаются по действию (возбуждающие, ингибирующие, модуляторные), механизм, активация световой длиной волны и кинетическими свойствами5 постоянно разрабатываются для удовлетворения потребностей конкретных экспериментальных подходов. Что касается возбудимости, с помощью деполяризации или гиперполяризационизации opsin диктует активность нейронов (возбуждение или ингибирование, соответственно) на свет-стимуляции на определенной длине волны доставлены в мозг3.
Селективная активность промоутера направляет выражение рекомбиназы Cre к понам интереса. Путем снабжать floxed аллель opsin интереса, Cre-опосредованный recombination обеспечит что opsin селективно выражено в невенарах которые co-выразить Cre recombinase3,6. Это использование двойной трансгении для прямого пространственной избирательности оказалось очень эффективным в оптогенетике. Таким образом, в то время как свет-стимуляция для активации опсины широко поставляется через внутримозгово имплантированных оптических волокон, подключенных к источнику света (LED или лазер)3, только нейроны, выражающие как Cre recombinase и floxed opsin аллель будет реагировать на эту стимуляцию. Система Cre-Lox у грызунов может быть достигнута по-разному, используя только трансгении (как Cre recombinase и floxed opsin конструкции кодируются в трансгенных животных), только вирусные инъекции (ДНК конструкции для Рек рекомбиназа и флоксированный опсин оба поставляются через вирусный перевозчик), или сочетание двух (например, Крем рекомбиназы кодируется трансгенного животного, которое вводится с вирусом, несущим floxed opsin конструкции)5. Конструкция ДНК флокса opsin обычно клонируется в кадре с геном репортера, чтобы обеспечить визуализацию рекомбинации Cre-опосредоченной в секциях тканей. В то время как оптогенетика также может быть выполнена у крыс, представленные протоколы были созданы для мышей. Для простоты, мышей, несущих как Рек рекомбиназы и флоксированный опсин будет называться “оптогенетика мышей”. В протоколах, описанных ниже, оптогенетика мышей были созданы смешанные трансгенные (Cre рекомбиназы под контролем двух различных промоутеров) и вирусных (с использованием адено-ассоциированного вируса, AAV, чтобы доставить флоксированный опсин ДНК конструкции – в нашем случае ChR2/H134R) подход. Получение и поддержание трансгенных линий мыши является неотъемлемой частью методологии. Cre-драйвер и флоксированный опсин трансгенных мышей могут быть произведены для каждой цели, или приобрели, если коммерчески доступны, как и целый ряд вирусов, несущих последовательности ДНК кодирования Cre recombinase и floxed opsins в различных формах.
Оптогенетика в сочетании с поведенческим тестированием оказалась ценным инструментом для изучения роли различных областей мозга, или дискретных нейронных популяций, в частности типов поведения. В контексте поведения, связанного с вознаграждением, оптогенетика позволила проверить предыдущие выводы в области поведенческой фармакологии и экспериментальной психологии, а также позволила новый уровень пространственно-временно релевантного рассечения в том, как некоторые нейроны влияют на поведение. Одним из методов, который был использован в нескольких исследованиях для оценки поведения, связанного с вознаграждением, является модифицированная версия классического метода, известного как Условные предпочтения места (CPP). Классическая CPP была использована для оценки награждения или aversive свойства наркотиков злоупотребления через их способность вызывать Павловские ассоциации с сигналами окружающей среды7,8. С точки зрения Павлова, препарат является безусловным стимулом, поскольку он может вызвать подход или вывод, если он является полезным или неблагоприятным, соответственно. Непрерывное спаривание препарата с различными нейтральными стимулами, которые сами по себе не вызывают никакой реакции, может привести к приближению или выводу только при предъявлении ранее нейтральных, но после спаривания, так называемых условных стимулов9. Анализ CPP обычно выполняется в аппарате, содержащем два отсека одного размера, но где каждый отсек определяется различными характеристиками, такими как текстура пола, настенные узоры и освещение (нейтральные стимулы). Два отсека соединены либо коридором, либо отверстием между отсеками. Во время кондиционирования, субъект, как правило, небольшой грызун, получает пассивные инъекции препарата в то время как ограничивается одним из двух основных отсеков и сольственный при ограничении в другом отсеке. Награждение эффекты препарата впоследствии оцениваются в свободной от наркотиков сессии, когда субъект имеет право свободно исследовать весь аппарат. Количество времени, затрачиваемого в ранее снадобье-парной отсек (условный ответ) считается отражением Павловских механизмов обучения, опосредованных между полезными эффектами препарата и сигналами отсека, связанных с его администрированием(условные стимулы). Если животное проводит больше времени в отсеке для спаривания наркотиков, препарат индуцировал условные предпочтения место, что означает, что он имеет полезные последствия для поведения. С другой стороны, если препарат воспринимается как аверсивный, животное будет избегать наркотиков парной отсек и проводить больше времени в солевой паре отсека, указывая условное место отвращение (CPA)8,9,10,11.
Так как оптогенетика может быть реализована для контроля нейронной активности в “реальном времени”, использование поведенческой парадигмы, аналогичной, но отличается от установки CPP позволяет измерять предпочтения места при прямой активации нейронов. Оптогенетика-управляемый анализ предпочтений места поэтому часто refer to как в реальном времени парадигма анализа предпочтений места (RT-PP). В парадигме RT-PP оптогенетическая стимуляция различных нейронов через систему Cre-Lox заменяет системную доставку препарата, выполняемого в классическом CPP, так что парадигма RT-PP вместо этого измеряет, если оптогенетически индуцированная нейронная стимуляция воспринимается как награждение или aversive. Текущее описание будет сосредоточено на оптогенетики мышей, но и оптогенетики крысы могут быть протестированы с помощью аналогичных протоколов.
Вместо того, чтобы кондиционирования в одном отсеке в то время, как в классической парадигме CPP, оптогенетика мыши в парадигме RT-PP разрешено свободно перемещаться во всем аппарате и поведение записывается на протяжении всего сеанса. Вход в один из отсеков сопряжен с внутричерепной светостимуляцией. При соответствующих параметрах стимуляции света, нейроны, которые выражают возбуждающее опсин, тем самым будут активированы. Если светостимуляция воспринимается как полезная, мышь оптогенетики останется в светло-парном отсеке, в то время как если свет-стимуляция воспринимается как аверзивная, мышь выйдет из отсека, чтобы избежать стимуляции. Этот тип анализа позволяет оценить условное обучение: субъект может вызвать светостимуляцию и, следовательно, активацию нейронов, введя в отсек, и остановить стимуляцию, выйдя из отсека, подобно рычагу нажатия во время инструментальной задачи. Кроме того, механизмы ассоциативного обучения могут быть оценены во время последующих сессий, где время, проведенное в каждом отсеке измеряется в отсутствие стимуляции. Таким образом, исследователь может разъединяться между немедленно полезным и воздействием на стимуляцию нейронов, представляющих интерес, и ассоциативной формирования памяти, связанные с ним12.
В текущем исследовании мы описываем два протокола пошаговой настройки для оптогенетики инициативе место предпочтения поведения свободно движущихся мышей. Первый протокол описывает RT-PP в трехкомпонентном аппарате и был изложен на основе протоколов, недавно представленных Root и коллегами 13 и другими авторами12,14,15,16,17,18. Эксперимент состоит из двух этапов, включающих несколько ежедневных сеансов (показано на рисунке 1A). Каждая сессия предназначена для различных целей и параметры стимуляции соединения с отсеком меняются соответствующим образом. Первая сессия,«Претест»,используется для оценки первоначального предпочтения субъекта к одному из отсеков. При подключении к патч шнур, субъект имеет право свободно исследовать аппарат в отсутствие стимуляции в течение 15 минут. Если начальное предпочтение одному отсеку составляет более 80%, мышь исключается из анализа, так как начальная боковая предвзятость может исказить анализ. После“Претеста”начинаетсяфаза 1. Первая часть состоит из двух последовательных, ежедневных, 30 минут сессий “RT-PP“. Во времяфазы 1“, оптогенетика мышь подключена к источнику лазера через патч шнур и помещены в арене, чтобы свободно исследовать его. Мышь получает внутричерепную лазерную стимуляцию при входе в один из основных отсеков. Пилотные эксперименты могут быть выполнены, чтобы определить, какой отсек будет назначен в качестве лазерного пара, а как неспаренный. Если будет показано, что стимуляция вознаграждает, лазер будет соединен с наименее предпочтительным отсеком во время«Претеста»и с наиболее предпочтительным, если стимуляция является неприятной. Таким образом, представленный протокол RT-PP следует предвзятой конструкции в том смысле, что лазерная стимуляция не случайным образом назначается любому из двух основных отсеков (непредвзятый дизайн), но выбран, чтобы избежать каких-либо первоначальных предпочтений мыши. Вход в другой основной отсек или нейтральный отсек, соединяющий два основных отсека, не приводит к стимуляции внутричерепного света и, таким образом, не имеет световой пары. Эти сеансы позволяют в режиме реального времени оценивать полезные или аверсивные свойства стимуляции конкретных нейронных популяций. В последний день1-го этапапроводится 15-минутная сессия без стимуляции. Эта сессия служит для решения условных ответов(“CR“), которые являются результатом ассоциативного обучения между стимуляцией и окружающей средой, где она была получена. По крайней мере, через три дня после «Фазы 1», происходит«Фаза разворота»,которая следует той же структуре, что и «Фаза 1», но ранее непарный основной отсек теперь в паре со световой стимуляцией. Как и в случае с фазой1, за двумя сеансами стимуляции следует сессияCR. «Вспять»используется для подтверждения того, что поведение мыши зависит от оптогенетической стимуляции и не связано со случайными параметрами. Каждая сессия эксперимента RT-PP должна быть отдельно запрограммирована в рамках программного обеспечения для отслеживания. Текущий протокол описывает такие настройки в рамках конкретного программного обеспечения, но любое другое программное обеспечение отслеживания, способное отправлять сигналы модуляции транзистора-транзистора (TTL) в источник света.
Второй протокол описывает новую настройку, названную парадигмой нейтрального содействия (NCP). Этот модифицированный протокол RT-PP использует небольшой размер и прозрачность соединительного коридора, которого мышь естественным образом избегает из-за ее узкого и прозрачного состава. Путем сопряжения обоих основных отсеков со светостимуляцией и только оставляя коридор свободным от светостимуляции, установка NCP может быть использована для проверки того, заставит ли оптогеническая стимуляция мыши проводить больше времени в коридоре, чтобы избежать получения оптогенетической стимуляции. Сравнивая время, проведенное в двух светлых отсеках, с временем, проведенным в коридоре, можно провести проверку неприятия, вызванное оптогенетически. Эксперимент NCP состоит из двух последовательных ежедневных сессий, где оптогенетика мышей получают стимуляцию (30 мин каждый) для измерения предпочтений в режиме реального времени, и один сеанс без лазера (15 мин) для оценки условных ответов аналогично тем, которые в RT-PP Протокол.
Протоколы RT-PP и NCP, представленные ниже, были недавно проверены в нашей лаборатории в исследовании того, как различные типы нейронов, расположенных в брюшной тегментальной области (VTA), участвуют в различных аспектах поведения, связанного с вознаграждением12. Здесь, чтобы иллюстрировать реализацию протоколов РТ-ПП и NCP, допамина транспортер (DAT)-Cre19 и везикулярный глутамат транспортер 2 (VGLUT2)-Cre20 трансгенных мышей были стеротактически введены с AAV проведения флоксированный каналrhodopsin2 (ChR2) ДНК, построенный в VTA Поведенческие реакции, полученные при анализе этих мышей с использованием предоставленных протоколов RT-PP и NCP, показывают, как активация дофаминергических и глутаматергических нейронов в ВТА приводит к различным поведенческим реакциям (Рисунок 1).
Пошаговые протоколы для парадигм RT-PP и NCP предоставляются с информацией, начиная от генотипирования трансгенных мышей, стереотаксических вирусных инъекций и размещения волоконно-оптических, до программирования отслеживания программного обеспечения для лазерного контроля и поведенческих Оценки. Кроме того, обсуждаются предложения по изменению протокола с точки зрения параметров стимуляции и экспериментальных аспектов, которые могут повлиять на научный результат. Хотя протоколы описаны в контексте VTA, они могут быть применены к любой области мозга или нейронной популяции, при условии, соответствующие инструменты оптогенетики, такие как соответствующие Cre-драйвер и флоксированные опсины, доступны.
В текущем исследовании мы представляем два пошаговых протокола о том, как выполнять различные типы анализа предпочтений местом с использованием оптогенетики у мышей. Протоколы были использованы для оценки награждения или аверсивных поведенческих фенотипов нейронов VTA(Рисунок 1 и Рисунок 6)12, но могут быть использованы для изучения поведенческой роли нейронов в других областях мозга, а также.
Несколько недавних исследований описали RT-PP парадигмы в двух-купе23,24 и трех-отсеков аппаратов13,14,15,16,17,18. В текущих протоколах описываются подробные настройки протоколов RT-PP и NCP в трехкомпонентном аппарате, напоминающем те, которые традиционно используются в экспериментах CPP для оценки поведенческих эффектов при администрировании наркотиков, связанных со злоупотреблением. В то время как результаты представлены только здесь как процент времени, проведенного мышью в каждом отсеке, программное обеспечение отслеживания позволяет анализировать несколько других поведенческих параметров, таких как переходы в зоны, скорость, время, проведенное неподвижно и многое другое. Анализ различных параметров может быть важен для интерпретации данных.
Текущие протоколы RT-PP являются гибкими и могут быть изменены для проверки, имеют ли различные типы моделей стимуляции полезные эффекты. Параметры лазерного управления можно легко изменить либо через скрипт доски микроконтроллера, либо внутри программного обеспечения для отслеживания, демонстрируя универсальность установки. Мы предлагаем 20 Гц частоты стимуляции, которая находится в пределах диапазона, а иногда и ниже, частот, применяемых в предыдущих исследованиях с использованием того же варианта опсина (ChR2/H134R) для изучения дофаминергических и глутамергических нейронов и их терминалов13,14,16,17,18,23,24,25,26. Недавние исследования показали, что более высокие частоты стимуляции могут иметь противоположное влияние на поведение, чем более низкие, и что эти эффекты опосредованы через блок деполяризации, вызванные более высокими частотами28. Аналогичным образом, различия в поведенческих выход были показаны при стимулировании глутамерных и ГАМК нейронов в боковой преоптической области15. Эти исследования изучили нейроны различных областей, чем VTA и наибольшие эффекты наблюдались на высоких частотах не-глутаматергических нейронов15,28. Наш выбор на 20 Гц основан на предыдущих исследованиях глутамергических и дофаминергических нейронов VTA, демонстрирующих, что при различных частотах стимуляции, связанных с вознаграждением поведенческих выход не значительно изменен24,26.
Дополнительным параметром, который может быть скорректирован и который может повлиять на экспериментальный результат, является сила источника света. Более высокая мощность лазера может увеличить размер светостимулируемой области, что может быть полезным в некоторых видах экспериментов, но с недостатком повышения температуры5. Действительно, недавнее исследование показало, что лазерно-индуцированное повышение температуры может изменить физиологию мозга и повлиять на поведенческие измерения29. Эти наблюдения подчеркивают важность включения opsin-негативного контроля в экспериментальном дизайне. В текущем протоколе, мы использовали 10 мВт лазерной мощности, которая аналогична и ранее было показано, чтобы быть эффективным в стимулировании дофаминергических и глутаматергических нейронов в VTA16,24,26. При организации экспериментов важно обращать внимание на размер области, в которой расположены интересные клетки, а также на свойства волоконно-оптического и патч-провода (числовая диафрагма, диаметр ядра). Эти параметры необходимы для учета при выполнении расчетов, связанных с лазерной мощностью. Для получения подробной информации можно использовать калькулятор, разработанный лабораторией Карла Дейссерота(http://web.stanford.edu/group/dlab/cgi-bin/graph/chart.php).
Гистологическая проверка рекомбинации Cre-Lox является еще одним критическим аспектом при применении оптогенетических экспериментов. Проверка эффективности рекомбинации всегда должна проходить в пилотной когорте до начала любых поведенческих экспериментов в большой группе животных. Это важно не только по этическим соображениям, но и по оптимизированной экспериментальной продукции. Каждая вирусная конструкция может показать переменную специфичность для различных типов нейронов и в различных регионах5, параметр, который может повлиять на эксперименты в непредсказуемых и даже вводящих в заблуждение способов. Например, мы ранее подтвердили рекомбинацию вирусов AAV5 в VTA мышей DAT-Cre и обнаружили, что односторонних инъекций было достаточно для того, чтобы нацелить большую часть интересуемых областей. Когда мы затем изучали пространственно ограниченных субпопуляций в рамках VTA, таких, как один характеризуется NeuroD6 выражение, мы заметили, что двусторонние вирусные инъекции были более эффективными для целевой большее число нейронов дает более выраженные поведенческие эффекты на оптогенетической свет-стимуляции12. Кроме того, время от операции до начала поведенческих экспериментов должно быть рассмотрено тщательно. Две недели достаточно времени для конструкции ДНК ChR2, чтобы быть выражены в клеточных телах, как мы показываем здесь, но больше времени ожидания (8 недель) может потребоваться, если следователь тестирует эффект стимуляции в проекционных областях13,14,15,17.
Стоит отметить, что объем вводимых вирусов (в нашем случае 300 нл) может быть подходящим при изучении нейронов в ВТА, но объем и титр должны быть скорректированы в зависимости от эффективности трансдукции и размера исследуемой структуры. Кроме того, для двусторонних структур, расположенных на расстоянии от посредствероальной оси, может потребоваться проведение двусторонних инъекций, а также для двусторонней имплантации волоконно-оптических веществ для обеспечения активации/ингибирования в обоих полушариях.
Наконец, всегда необходимо провести посмертный гистологический анализ, чтобы подтвердить и подтвердить эффективность рекомбинации Cre-Lox и проверить правильное место имплантации оптического волокна в нужном месте. Неожиданные, чрезмерно ограниченные или чрезмерные Cre-Lox рекомбинации может произойти из-за неизвестного распределения нейронов, выражающих Cre за пределами предполагаемой области, или из-за различий в вирус серотип, плохое обращение с вирусом, засорение шприц для доставки вируса или других проблем, связанных с хирургическим вмешательством. Проверка удовлетворительной рекомбинации Cre-Lox и правильной волоконно-оптической имплантации должна быть проведена для подтверждения любых статистических результатов поведенческих оценок для того, чтобы сделать безопасные выводы.
С точки зрения данных, представленных здесь в качестве примеров того, как две поведенческие парадигмы могут быть использованы, значительное предпочтение свето-парной стороне, полученной оптогенетической стимуляции дофаминергических нейронов в VTA путем анализа DAT-Cre мышей в RT-PP парадигмы, как ожидается, на основе предыдущих выводов23,25,27,27 в то время как избегание этой стороны показали ВТ-2. VGLUT2 нейронов VTA и их прогнозы были показаны, чтобы быть вовлечены в награду и отвращение16,17,24,30,31, и поэтому мы провели анализ NCP для оценки явного поведения избегания наблюдается в текущей установки RT-PP более подробно. Используя узкий, прозрачный коридор в качестве единственного нелегкого парного отсека для подтверждения аверсивных свойств стимуляции глутаметатергических нейронов VTA, очевидно, что в данном конкретном трехкомпонентном установке оптогенетическая активация этих нейронов вызывает аверсивную реакцию. Эти эксперименты, которые были показаны здесь, чтобы иллюстрировать ситуации, которые могут извлечь выгоду из использования как RT-PP и NCP протоколов, были частью недавно опубликованного исследования, и полный набор данных, а также обсуждения в отношении этих выводов можно найти в этой публикации12.
В дополнение к NCP, альтернативные способы подтверждения отвращения включают сильное освещение области в открытой области поля при сопряжении остальной части арены для лазерной активации, или выполнять активную задачу избежания, в которой мышь должна выполнить определенную модель поведения, чтобы прекратить лазерную стимуляцию15.
Подводя итог, описанные протоколы предоставляют важную информацию о том, как успешно выполнять анализ RT-PP и NCP наиболее эффективным способом, чтобы разгадать роль активации нейронов в вознаграждении и отвращение. В зависимости от научной гипотезы, с помощью этих протоколов можно проанализировать ряд параметров, и каждый протокол также может быть объединен с другими проверенными парадигмами для оптимизированного поведенческого анализа, реализующего оптогенетику для решения конкретного мозга областей и нейронов, представляющих интерес.
The authors have nothing to disclose.
Наши источники финансирования с благодарностью признаются: Университет Уппсалы, Ветенскапсрет (Шведский исследовательский совет), Хьёрнфонден, Паркинсонфонд, Исследовательские фонды Бертила Хёллстена, ОЭ и Эдла Иоханссон, Зоологиск Форскнинг и Элен. В Уппсалском университете содержались животные, а в поведенческом центре Университета Уппсалы проводились эксперименты.
AAV-Cre dependent virus | UNC Vector Core | – | a great variety of viruses to suit any project's needs |
Agarose | VWR Life Science | 443666A | |
Buffer for PCR | KAPA BIOSYSTEMS | KB1003 | 10x, contains 1.5mM MgCl2 at 1x |
Bupivacaine (Marcain) | Aspen | N01BB01 | local anesthetic, 5 mg/ml solution, requires prescription |
Carprofen (Norocarp) | N-Vet | 27636 | anti-inflammatory, analgesic; 50 mg/ml solution, requires prescription |
dNTP set | Thermo Fisher Scientific | R0181 | 100mM, have to be dilluted to 10mM and mixed |
DNA ladder | Thermo Fisher Scientific | SM0243 | 100 bp, 50 μg Gene Ruler |
DNA loading dye | Thermo Fisher Scientific | R0611 | 6x, dilute to 1x before using |
Ear puncher | AgnThos | AT7000 | ear puncher to take tissue samples for PCR or to mark animals |
Fiberoptic patchcords | Doric Lenses | MFP_200/240/900-0.22_1m_FC-ZF1.25 | |
Implantable fiberoptics | Doric Lenses | MFC_200/245-0.37_5mm_ZF1.25_FLT | the properties of the fibers might change depending on the experiment |
Infusion pump for virus injections | AgnThos | Legato 130 | contains remote pump to secure the syringe directly on the stereotexi frame |
Isoflurane (Forane) | Baxter | N01AB06 | Volatile anesthetic, requires prescription |
Jewelry screws | AgnThos | MCS1x2 | |
Laser source | Marwell Laser Systems | CNI MBL-III-473-100mW | |
Microcontroller board | Arduino | "Uno" board | can be ordered from several companies |
Microdrill | AgnThos | 1474 | could be ordered with or without stereotaxic holder |
Needle (34G) | World Precision Instruments | NF36BV | |
Nucleic Acid gel stain – GelRed | Biotium | 41003-T | |
PCR tubes | Axygen | PCR-0208-CP-C | |
Power meter | Thorlabs | PM100D | |
Place Preference Apparatus | Panlab | 76-0278 | |
Rotary joint | Doric Lenses | FRJ_1x1_FC-FC | |
Sleeves | Doric Lenses | SLEEVE_ZR_1-25 | mating sleeve to connect the patchcord with the implanted optic fiber |
Stabilization cement | Ivoclar Vivadent | Tetric EvoFlow | |
Syringe (10ul) | World Precision Instruments | NanoFil | |
Taq polymerase | KAPA BIOSYSTEMS | KE1000 | 500U |
TAE buffer | Omega BIO-TEK | SKU:AC10089 | 50x concentration, has to be dilluted before use |
Thermal cycler | BIO-RAD S1000 | 1852148 | necessary to perfrom PCR reactions |
Tissue glue | AgnThos | Vetbond | |
Tracking software | Noldus | Ethovision XT | |
TTL box | Noldus | Noldus USB-IO box | |
UV transilluminator | Azure Biosystems | c200 model |