चूहों में हेटेरोटोपिक हार्ट और कार्डियक मांसपेशी सेल प्रत्यारोपण के लिए एक इम्यूनोलॉजिकल मॉडल
Summary
हम चूहों में विषमता पेट हृदय प्रत्यारोपण के एक मॉडल का वर्णन करते हैं, जिसका अर्थ वर्तमान रणनीतियों में संशोधन होता है, जो एक सरलीकृत शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण का कारण बनते हैं। इसके अतिरिक्त, हम महत्वपूर्ण हृदय मांसपेशियों की कोशिकाओं के कान में इंजेक्शन द्वारा एक उपन्यास अस्वीकृति मॉडल का वर्णन करते हैं, जिससे चूहों में इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण को और अधिक प्रत्यारोपण की अनुमति होती है।
Abstract
चूहों में हेटेरोटोपिक हृदय प्रत्यारोपण 50 से अधिक वर्षों से विविध प्रतिरक्षा अध्ययनों के लिए आमतौर पर उपयोग किया जाने वाला मॉडल रहा है। 1964 में पहले विवरण के बाद से कई संशोधनों की सूचना दी गई है। चूहों में विषमचिकित्सा हृदय प्रत्यारोपण करने के 30 वर्षों के बाद, हमने एक सरलीकृत शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण विकसित किया है, जिसे आगे सर्जिकल प्रशिक्षण या पृष्ठभूमि के बिना आसानी से सिखाया और प्रदर्शन किया जा सकता है।
आरोही महाधमनी और फेफड़े की धमनी और बेहतर और अवर गुलाल और फेफड़े की नसों के लिगेशन के विच्छेदन के बाद, दाता दिल काटा जाता है और बाद में हेपरिन के साथ पूरक बर्फ-ठंडे खारा समाधान के साथ छिद्रित होता है। प्राप्तकर्ता पेट के जहाजों को क्लैंप िंग और चीरा लगाने के बाद, दाता आरोही महाधमनी और फेफड़े की धमनी को निरंतर चल रहे टांके का उपयोग करके क्रमशः प्राप्तकर्ता पेट महाधमनी और अवर वेना कावा के लिए एनास्टोमोस किया जाता है।
विभिन्न दाता-प्राप्तकर्ता संयोजनों के आधार पर, यह मॉडल एलोग्राफ्ट की तीव्र या पुरानी अस्वीकृति के विश्लेषण की अनुमति देता है। इस मॉडल के इम्यूनोलॉजिकल महत्व को महत्वपूर्ण हृदय की मांसपेशियों की कोशिकाओं के कान में इंजेक्शन के एक उपन्यास दृष्टिकोण और गर्भाशय ग्रीवा लिम्फेटिक ऊतक को निकालने के बाद के विश्लेषण से और बढ़ाया जाता है।
Introduction
हेटेरोटोपिक हार्ट प्रत्यारोपण प्रत्यारोपण सहिष्णुता, तीव्र और पुरानी एलोबेड़ा अस्वीकृति, इस्केमिया-रिपेरेफ्यूजन चोट, मशीन परेक या कार्डियक रिमॉडलिंग के बारे में विभिन्न जांचों के लिए अक्सर उपयोग किया जाने वाला प्रयोगात्मक मॉडल है। अन्य फायदों के अलावा, भ्रष्टाचार समारोह को टटोलने से गैर-आक्रामक रूप से निगरानी की जा सकती है और भ्रष्टाचार की विफलता से गुर्दे या यकृत जैसे अन्य अंगों के विपरीत प्राप्तकर्ता की महत्वपूर्ण हानि नहीं होती है।
१९६४ में, एबॉट एट अल शुरू में चूहों में विषमता पेट हृदय प्रत्यारोपण का वर्णन1। बाद में, 1966 में, अनास्तोमूसा के लिए एंड-टू-साइड तकनीक को टोमिता एट अल2द्वारा वर्णित किया गया था। वर्तमान में इस्तेमाल किए गए मॉडल की नींव ओनो और लिंडसे ने 19693में बताई थी। पिछले दशकों के दौरान, संयुक्त विषमता हृदय-फेफड़ों के प्रत्यारोपण,4,5,56सहित विभिन्न प्रकार के अनलोड, आंशिक रूप से लोड या लोडेड बाएं वेंट्रिकुलर हार्ट ग्राफ्ट बनाने के लिए कई संशोधन प्रकाशित किए गए हैं। इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण के लिए एक गैर मात्रा भरी हुई हृदय भ्रष्टाचार प्रत्यारोपण सबसे अधिक किया जाता है। इस मामले में, रक्त प्रवाह प्रतिगामी रूप से दाता आरोही महाधमनी और बाद में कोरोनरी धमनियों में प्रवेश करता है। वेनस ड्रेनेज कोरोनरी सिनस के साथ सही एट्रियम और वेंट्रिकल(चित्रा 1ए-बी)में होता है। इसलिए, बाएं वेंट्रिकल को रक्त प्रवाह से बाहर रखा गया है, इसके अलावा थेसियन नसों से रक्त की मामूली मात्रा के अलावा। यह बाएं वेंट्रिकुलर असिस्ट डिवाइस थेरेपी7के दौरान रोगविज्ञानी तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी मॉडल भी बनाता है।
चूहों, खरगोशों, सूअरों सहित विभिन्न प्रजातियों में हेटेरोटोपिक हृदय प्रत्यारोपण किया गया है और यहां तक कि मनुष्यों में एक विश्वविद्यालय या द्विप्रतिकार सहायता उपकरणकेरूप में उपयोग किया गया है8,99,10,,11। चूहा अभी भी प्रत्यारोपण मॉडल के लिए एक लोकप्रिय प्रयोगात्मक जानवर का प्रतिनिधित्व करता है, खासकर के बाद से विभिन्न चूहा तनाव संयोजनों के लिए भ्रष्टाचार अस्तित्व समय अतीत में अच्छी तरह से परिभाषित किया गया है और इम्यूनोलॉजिकल रिएजेंटों की एक बड़ी संख्या12,,13सुलभ हैं । चूहों के विपरीत, चूहे बड़ी सर्जरी कर रहे हैं और इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण के लिए लिम्फेटिक ऊतक तक पहुंच अधिक व्यवहार्य12। इसके अलावा, हाल के वर्षों में चूहों में वाणिज्यिक क्लोनिंग प्रौद्योगिकियों की शुरूआत सबसे अधिक संभावना प्रायोगिक चूहा मॉडल14में आवर्ती रुचि के लिए नेतृत्व करेंगे ।
सामान्य तौर पर, गर्भाशय ग्रीवा या पेट एनास्टोमोसिस प्रदर्शन करके प्राप्तकर्ता जहाजों से हेटेरोटोपिक हार्ट ग्राफ्ट संलग्न किया जा सकता है। हालांकि, कुछ अध्ययनों से पता चलता है कि एक ऊर्ध्वाधर एनास्तोमोसिस मैनुअल टटोलना या ट्रांसफेमोरल इकोकार्डियोग्राफी के लिए बेहतर पहुंच के कारण बेहतर निगरानी की सुविधा प्रदान करता है और इस प्रकार भ्रष्टाचार की विफलता15,,16का अधिक सटीक पता लगाने की अनुमति देता है।
यह दिखाया गया है कि एनास्टोमोसिस तकनीक17दोनों के बीच ऑपरेशन समय, जटिलता दर, परिणाम और भ्रष्टाचार के अस्तित्व के समय के बारे में कोई अंतर नहीं है। जाहिर है, पर्याप्त संख्या में ड्रेनिंग लिम्फ नोड्स की उपलब्धता को सर्वाइकल एनास्टोमोसिस के लाभ के रूप में उल्लेख किया जाना चाहिए; हालांकि, लंबे समय तक प्रशिक्षण अवधि की आवश्यकता होती है। इसके विपरीत, पेट एनास्तोमोसिस इम्यूनोलॉजिकल जांच के लिए कम जटिल और समान रूप से मूल्यवान है, खासकर जब एलोजेनिक हृदय मांसपेशियों की कोशिकाओं और बाद में सर्वाइकल लिम्फेडेनेक्टॉमी के इन-इयर इंजेक्शन की एक उपन्यास विधि से परिणामों के साथ संयुक्त होता है। दोनों मॉडलों का एक संयोजन हस्तक्षेप के बाद इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण का एक व्यापक स्पेक्ट्रम प्रदान करता है।
निम्नलिखित प्रोटोकॉल इस्केमिया समय को कम करने के लिए सर्जन के जोड़े में संचालन को संदर्भित करता है। हालांकि, सभी प्रयोग एक ही व्यक्ति द्वारा किए जा सकते हैं। दिल के वृक्षारोपण और प्रत्यारोपण के लिए उपकरणों और सामग्रियों की स्थापना चित्रा 2ए-बीमें प्रदर्शित की जाती है।
Protocol
Representative Results
Discussion
चूहों में हेटेरोटोपिक कार्डियक प्रत्यारोपण की पहले वर्णित विधि मुख्य रूप से 19693में ओनो और लिंडसे के विवरण पर आधारित है। तब से, विभिन्न प्रजातियों में कई संशोधन शुरू किए गए हैं जिससे इस मॉडल की ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम ब्रिटा ट्रैटविग, कोरिना लोबर्ट और इंग्रिड मेडर को उनकी प्रतिबद्धता के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं।
Materials
| Anesthesia device (including isoflurane vaporizer) | Summit Anesthesia Solutions | No Catalog Number available | |
| Cannula (27 G) | BD Microlance | 302200 | |
| Carprofen | Pfizer | Rimadyl 50 mg/mL | |
| Cellstar Tubes (15 mL) | GreinerBioOne | 188271 | |
| Cell strainer (40 µm) | BD Falcon | 2271680 | |
| Collagenase Type CLSII | Biochrome | C2-22 | |
| Compresses 5×5 cm | Fuhrmann | 31501 | |
| Compresses 7.5×7.5 cm | Fuhrmann | 31505 | |
| Cotton swabs | Heinz Herenz Medizinalbedarf | 1032128 | |
| Dexpathenol (5 %) | Bayer | "Bepanthen" | |
| DPBS BioWhittaker | Lonza | 17-512F | |
| Forceps | B. Braun | Aesculap BD557R | |
| Forceps | B. Braun | Aesculap BD313R | |
| Forceps | B. Braun | Aesculap BD35 | |
| Heating mat | Gaymar Industries | "T/Pump" | |
| Hemostatic gauze | Ethicon | Tabotamp | |
| Heparin-Natrium 25 000 I.E. | Ratiopharm | No Catalog Number available | |
| Isofluran CP | CP-Pharma | No Catalog Number available | |
| Large-pored sieve (stainless steel) | Forschungswerkstätten Hannover Medical School | No Catalog Number available | |
| Lidocaine | Astra Zeneca | 2 % Xylocain | |
| Metamizol-Natrium | Ratiopharma | Novaminsulfon 500 mg/mL | |
| Micro forceps | B. Braun | Aesculap BD3361 | |
| Micro needle holder | Codman, Johnson & Johnson Medical | Codmann 80-2003 | |
| Micro needle holder | B. Braun | Aesculap BD336R | |
| Micro needle holder | B. Braun | Aesculap FD241R | |
| Micro scissors | B. Braun | Aesculap FD101R | |
| Micro scissors | B. Braun | Aesculap FM471R | |
| Needle holder | B. Braun | Aesculap BM221R | |
| Penicillin/Streptomycin/Glutamine (100x) | PAA | P11-010 | |
| Peripheral venous catheter (18 G) | B. Braun | 4268334B | |
| Peripheral venous catheter (22 G) | B. Braun | 4268091B | |
| Probe pointed scissors | B. Braun | Aesculap BC030R | |
| Retractors | Forschungswerkstätten Hannover Medical School | No Catalog Number available | |
| RPMI culture medium | Lonza | BE12-702F | |
| Saline solution (NaCl 0.9 %) | Baxter | No Catalog Number available | |
| Scissors | B. Braun | Aesculap BC414 | |
| Surgical microscope | Carl-Zeiss | OPMI-MDM | |
| Sutures (anastomoses) | Catgut | Mariderm 8-0 monofil | |
| Sutures (ligature) | Resorba | Silk 5-0 polyfil | |
| Sutures (skin, fascia) | Ethicon | Mersilene 3-0 | |
| Syringe (1 mL) | B. Braun | 9166017V | |
| Syringe (10 mL) | B. Braun | 4606108V | |
| Syringe (20 mL) | B. Braun | 4606205V | |
| Vascular clamp | B. Braun | Aesculap FB708R |
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