Nous décrivons une injection intracisternale qui emploie une aiguille pliée à la pointe qui peut être stabilisée au crâne, éliminant ainsi le risque de dommages au parenchyme sous-jacent. L’approche peut être utilisée pour la cartographie du destin génétique et les manipulations des cellules leptoméningeales et pour le suivi du mouvement des fluides phériques.
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Article de méthode
Induction de modification des cellules leptomeningeales par injection intracisterale
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le protocole décrit ici comment injecter des solutions en toute sécurité et manuellement par le biais de la cisterna magna tout en éliminant le risque de dommages au parenchyme sous-jacent. Les protocoles précédemment publiés recommandent d’utiliser des aiguilles droites qui devraient être abaissées à un maximum de 1-2 mm de la surface durale. La chute soudaine de résistance une fois que la membrane durale a été perforée rend difficile le maintien de l’aiguille dans une position stable. Notre méthode, au lieu, emploie une aiguille pliée à la pointe qui peut être stabilisée contre l’os occipital du crâne, empêchant ainsi la seringue de pénétrer dans le tissu après perforation de la membrane durale. La procédure est simple, reproductible, et ne cause pas d’inconfort durable chez les animaux opérés. Nous décrivons la stratégie d’injection intracisternale dans le contexte de la cartographie génétique du destin des cellules leptomeningeal vasculaires. La même technique peut, en outre, être utilisée pour répondre à un large éventail de questions de recherche, telles que l’examen du rôle des leptomeninges dans le neurodéveloppement et la propagation de la méningite bactérienne, par ablation génétique des gènes impliqués dans ces phénomènes. En outre, la procédure peut être combinée avec un système d’infusion automatisé pour une livraison constante et utilisé pour le suivi du mouvement du liquide phébrospin par injection de molécules étiquetées fluorescentes.
Introduction
Les cellules leptoméningéales sont une population fibroblaste-like de cellules organisées dans une fine couche superposant le cerveau et exprimant des gènes impliqués dans le collagène crosslinking (par exemple, Dcn et Lum), et dans l’établissement d’une barrière cerveau-méningeal (par exemple, Cldn11)1,2. Les cellules leptomeningeal sont impliquées dans un large éventail de fonctions physiologiques, du contrôle strict sur le drainage de fluide céphalochental3 à la conduite des progéniteurs neuraux dans le cerveau en développement4....
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Protocole
Les interventions chirurgicales présentées par la présente ont été approuvées par Stockholms Norra Djurf’rsetiska Nâmnd et réalisées en accord avec les spécifications fournies par l’institut de recherche (Institut Karolinska, Suède).
REMARQUE: L’injection intracisternale peut être adaptée avec souplesse à de multiples fins de recherche. Nous présentons ci-dessous une procédure développée pour étiqueter efficacement les cellules leptomeningeales pour la cartographie du destin basée sur l’injection d’endoxifène dans une lignée de souris transgénique portant R26R-tdTomato12 et CreER, ce dernier sous le ....
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Résultats
L’injection intracisternale d’endoxifène chez des souris transgéniques exprimant CreER sous le promoteur Cx3013 et un reporter fluorescent inductible permet une recombinaison spécifique des cellules leptoméningéales sans étiqueter la surface voisine Cx30-exprimant surface et astrocytes parenchymal dans le cortex (Figure 1). Afin d’accéder à la cisterna magna, l’animal anesthésié est positionné avec son corps et sa tête à un angle d’env.......
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Discussion
Le protocole décrit ici présente une procédure simple et reproductible pour étiqueter les cellules leptomeningeales pour la cartographie du destin. Nous utilisons l’injection intracisternale d’endoxifen, un métabolite actif de Tamoxifen, pour induire l’expression du journaliste fluorescent de tdTomato dans Cx30-CreER ; R26R-tdTomato souris12,13.
Par rapport à d’autres protocoles utilisés pour accéder au liquide phébrospinal par le cist.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.
Remerciements
Cette étude a été soutenue par des subventions du Conseil suédois de la recherche, de la Société suédoise du cancer, de la Fondation suédoise pour la recherche stratégique, de Knut och Alice Wallenbergs Stiftelse et du Programme stratégique de recherche en cellules souches et en médecine régénérative à l’Institut Karolinska (StratRegen).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Unité d’anesthésie | Univentor 410 | 8323102 | Complet du vaporisateur, de la chambre et du tube qui se connecte à la chambre et au support de tête de souris |
| Anesthésie (Isoflurane) | Baxter Medical AB | 000890 | |
| Betadine | Sigma-Aldrich | PVP1 | |
| Carprofène | Orion Pharma AB | 014920 | Nom commercial Rymadil |
| Colle cyanoacrylate | Carl Roth | 0258.1 | Utiliser des sutures en soie 5-0, en alternative |
| Medbond Colle tissulaire | Stoelting | 50479 | |
| DMSO | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| Endoxifène | Sigma-Aldrich | E8284 | |
| Éthanol 70 % | Histolab | 01370 | |
| Seringue Hamilton (aiguille biseautée 30 G) | Hamilton | 80300 | |
| Lidocaine | Aspen Nordic | 520455 | |
| Support de tête de souris | Narishige International | SGM-4 | Avec embout buccal pour anesthésiques par inhalation. Alternativement, utilisez un cadre stéréotaxique |
| Ciseaux | Outils de science fine | 15009-08 | |
| Rasoir | Aesculap | GT420 | |
| Lances d’absorption stériles | Outils de science fine | 18105-01 | Les cotons-tiges stériles sont également une bonne option |
| Séparateur chirurgical | World Instrument 501897 | ||
| Pince à épiler | Dumont | 11251-35 | |
| Viscotears | Bausch& Lomb Nordic AB | 541760 |
Références
- Vanlandewijck, M., et al. A molecular atlas of cell types and zonation in the brain vasculature. Nature. 554 (7693), 475-480 (2018).
- Whish, S., et al. The inner CSF-brain barrier: developmentally controlled access to t....
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Réimpressions et autorisations
