Summary

मुरीन हार्ट ट्रांसप्लांटेशन के लिए कफ तकनीक का अनुकूलन

Published: June 26, 2020
doi:

Summary

हम कफ पर पोत एवर्ट में मदद करने के लिए माउस सर्वाइकल हेट्रोटोपिक हृदय प्रत्यारोपण के लिए कफ तकनीक के लिए एक आंतरिक ट्यूब दृष्टिकोण पेश करते हैं। हमने पाया कि दो अनुभवी सर्जनों के बीच सहयोग स्पष्ट रूप से ऑपरेशन के समय को छोटा करता है ।

Abstract

मुरीन हृदय प्रत्यारोपण ४० से अधिक वर्षों के लिए किया गया है । माइक्रोसर्जरी में प्रगति के साथ, सर्जिकल दक्षता में सुधार करने के लिए कुछ नई तकनीकों का उपयोग किया गया है। हमारी प्रयोगशाला में, हमने दो प्रमुख चरणों के साथ कफ तकनीक को अनुकूलित किया है। सबसे पहले, हमने कफ पर पोत के विकृति को सुविधाजनक बनाने के लिए बाहरी जुगुलर नस और कैरोटिड धमनी रक्त वाहिका में एक अस्थायी आंतरिक ट्यूब डालने के लिए आंतरिक ट्यूब तकनीक का उपयोग किया। दूसरा, हमने दो अनुभवी सर्जनों के सहयोग से पूर्ण हेट्रोटोपिक कार्डियक प्रत्यारोपण किया। इन संशोधनों ने 95% की सफलता दर के साथ परिचालन समय को 25 मिनट तक प्रभावी ढंग से कम कर दिया। इस रिपोर्ट में, हम इन प्रक्रियाओं का विस्तार से वर्णन करते हैं और एक पूरक वीडियो प्रदान करते हैं। हमारा मानना है कि बेहतर कफ तकनीक पर यह रिपोर्ट मुरीन हेट्रोटोपिक हार्ट ट्रांसप्लांटेशन के लिए व्यावहारिक मार्गदर्शन प्रदान करेगी और बुनियादी शोध के लिए इस माउस मॉडल की उपयोगिता में वृद्धि करेगी ।

Introduction

1 9 73 में पेट के भीतर एंड-टू-एंड एनास्टोमोसिस के माध्यम से माउस हेट्रोटोपिक हृदय प्रत्यारोपण की स्थापना बुनियादी प्रत्यारोपण इम्यूनोलॉजी अनुसंधान1में एक प्रमुख मील का पत्थर था। इस मॉडल ने इस्केमिया प्रतिरफ्यूजन इंजरी 2 , इम्यूनोलॉजिकल अस्वीकृति और सहिष्णुता3,,4के तंत्र का विश्लेषण करने के लिए एक महत्वपूर्ण और वैध उपकरण प्रदान किया।4 हालांकि, सर्जरी की जटिल और समय लेने वाली प्रकृति के साथ-साथ संक्रमण की क्षमता के परिणामस्वरूप गंभीर पेरिऑपरेटिव पेट आसंजन और भड़काऊ प्रतिक्रियाएं हो सकती हैं, जिसके परिणामस्वरूप हेट्रोटोपिक हृदय प्रत्यारोपण मॉडल के लिए कम दक्षता होती है।

सर्वाइकल हेट्रोटोपिक हार्ट ट्रांसप्लांटेशन तकनीक का वर्णन सबसे पहले चेन ने 19915में किया था . इस मॉडल में, प्राप्तकर्ता की बाहरी जुगुलर नस को भ्रष्टाचार की फेफड़े की धमनी से अनस्टोमोस किया जाता है और कैरोटिड धमनी आरोही महाधमनी के लिए एनास्टोमोस किया जाता है। इस विधि के मुख्य फायदे निगरानी की सुविधा और प्राप्तकर्ता को आघात को कम करना है। उसी वर्ष, मात्सुरा ने एक बेहतर तकनीक का वर्णन किया, जिसमें बाहरी जुगुलर नस और कैरोटिड धमनी का अंत टेफ्लॉन कफ के ऊपर किया गया था और एक परिधि रेशम लिगामेंट6के साथ तय किया गया था। कुछ शोधकर्ताओं ने कफ को प्राप्तकर्ता की बाहरी जुगलबंदी नस में डालने से पहले दाता हृदय में सही फेफड़े कीधमनीमें भी ठीक किया । इस प्रकार अब तक, कफ तकनीक को व्यापक रूप से विभिन्न संवहनी पेडिकल प्रत्यारोपण मॉडलों में लागू किया गया है, जिसमें फेफड़े8,यकृत9और गुर्देके 10 प्रत्यारोपण शामिल हैं।

आज तक, कफ तकनीक से जुड़ी कई कठिनाइयां हैं। उदाहरण के लिए, कैरोटिड धमनी अतिरिक्त लोच के कारण कफ पर एवर्ट करना मुश्किल है, जिसके परिणामस्वरूप ऊतक पीछे की ओर फ्लिप कर रहा है। इसलिए, इस चरण को पूरा करने के लिए अतिरिक्त अभ्यास और एक माइक्रोसर्जिकल डिलेटर की आवश्यकता हो सकती है। इसके अलावा सर्वाइकल वेसल तैयार करने में 25 मिनट तक का समय लग सकता है।

इन मुद्दों को हल करने के लिए, हम आंतरिक ट्यूब तकनीक पेश करते हैं, जो कफ तकनीक पर आधारित है और इसमें बाहरी जुगुलर नस और कैरोटिड धमनी पर कफ को ठीक करना शामिल है जो एक आंतरिक ट्यूब का उपयोग करके पोत की दीवार के विकृति में मदद करता है। इसके अलावा, सरल प्रशिक्षण के साथ, प्राप्तकर्ता की तैयारी 15.5 मिनट तक कम हो जाती है। यह तकनीक ऑपरेशन की जटिलता को कम करती है और अतिरिक्त अभ्यास या संवहनी दिलवाले के उपयोग की आवश्यकता नहीं होती है। यह सभी प्रत्यारोपण प्रतिरक्षा अनुसंधान में लागू किया जा सकता है, विशेष रूप से तीसरे पक्ष की प्रतिरक्षा सहिष्णुता की पुष्टि करने के लिए जिसके दौरान प्राप्तकर्ता को दो कार्डियक एलोग्रफ्ट प्राप्त होते हैं, एक पेट के भीतर और दूसरा गर्दन11में। हम इस मॉडल को स्थापित करने के लिए दो कुशल सर्जनों के बीच सहयोग की भी सलाह देते हैं, जिसमें एक सर्जन प्राप्तकर्ता पशु और अन्य कटाई तैयार करता है और दाता हृदय को प्रत्यारोपित करता है। इस तरह के सहयोग से ऑपरेशन का समय 25 मिनट तक छोटा हो सकता है। इस अनुकूलित प्रक्रिया का उपयोग करते हुए, हमने सिनेजेनिक, एलोजेनिक12,13, 14,,,15,,16,,17,,18, 19,19और ज़ेनोजेनिक माउस हार्ट ट्रांसप्लांटेशन मॉडल20 स्थापितकिए हैं।16,

आंतरिक ट्यूब तकनीक के विकास के लिए तर्क एक उच्च सफलता दर के साथ एक माउस हार्ट प्रत्यारोपण मॉडल की स्थापना के लिए ऑपरेशन समय को कम करने के लिए किया गया था। सर्वाइकल हार्ट ट्रांसप्लांटेशन मॉडल का अनुकूलन पारंपरिक सीवन और कफ तकनीक21की तुलना में सर्जरी के समय की एक छोटी अवधि में उच्च सफलता दर के अधिग्रहण की सुविधा प्रदान करता है । इसके अलावा, सहयोग मॉडल एक ही ऑपरेटर के साथ की गई सर्जरी की तुलना में दाता दिल के गर्म इस्कीमिक समय को और कम कर सकता है।

Protocol

पशु (BALB/c, C57BL/6, पुरुष, 8-12 सप्ताह) श्यामेन विश्वविद्यालय प्रयोगशाला पशु केंद्र में एक विशिष्ट रोगजनक मुक्त सुविधा में रखे जाते हैं । C57BL/6 प्राप्तकर्ता के रूप में प्रयोग किया जाता है और BALB/c दाता के रूप में प्रयो?…

Representative Results

सर्जिकल ऑपरेशन समय प्रशिक्षण के बाद, एक कुशल सर्जन आंतरिक ट्यूब तकनीक का उपयोग करके 35 मिनट के भीतर सफलतापूर्वक ऑपरेशन कर सकता है, जिसमें प्राप्तकर्ता की तैयारी के लिए लगभग 15.5 मिनट की आव?…

Discussion

माउस हृदय प्रत्यारोपण मॉडल प्रत्यारोपण इम्यूनोलॉजी अनुसंधान के लिए महत्वपूर्ण उपकरण हैं, इस मॉडल के प्रतिरक्षा तंत्र और जीन संशोधित चूहों की एक बड़ी संख्या के मूल्यांकन के लिए उपकरण और सामग्री के रू…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

इस काम को फुजियान प्रांतीय स्वास्थ्य शिक्षा संयुक्त अनुसंधान परियोजना (WKJ2016-2-20), नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (81771271 और 81800664), नेशनल की आर एंड डी प्रोग्राम ऑफ चाइना (2018YFA01) द्वारा समर्थित किया गया था। 08304) और फुजियान प्रांत (JAT170714), चीन के हुआन प्रांत के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (2019JJ50842) और हुआन प्रांत के Huxiang युवा प्रतिभाओं (२०१९RS2013) में युवा और मध्यम आयु वर्ग के शिक्षकों के लिए शिक्षा और वैज्ञानिक अनुसंधान परियोजना ।

Materials

Artery cuff Self-made Polyamide tube. diameter: 0.55 mm,length: 1.0 mm
Artery inner tube Self-made Polyamide tube. Diameter: 0.28mm
Micro curved forceps Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory WA3050 1/8 arc, 0.3-mm tip without a hook
Micro needle holders Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory WA2050 0.2-mm tip
Micro scissors Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory WA1050 Straight, blade length: 10 mm
Micro straight forceps Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory WA3060 0.15-mm tip without a hook
Scanlan Vascu-Statt Bulldog Clamps Scanlan International Inc 1001-531 Clamping pressure 20–25 grams
Vein cuff Self-made Polyamide tube. diameter: 0.9 mm,length: 1.2 mm
Vein inner tube Self-made Polyamide tube. Diameter: 0.6 mm

References

  1. Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Heart transplantation in congenic strains of mice. Transplantation Proceedings. 5 (1), 733-735 (1973).
  2. Que, W., et al. Prolonged cold ischemia time in mouse heart transplantation using supercooling preservation. Transplantation. , (2019).
  3. Wang, C. Y., et al. Suppression of murine cardiac allograft arteriopathy by long-term blockade of CD40-CD154 interactions. Circulation. 105 (13), 1609-1614 (2002).
  4. Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy. Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).
  5. Chen, Z. H. A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice. Transplantation. 52 (6), 1099-1101 (1991).
  6. Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique. Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).
  7. Wang, Q., Liu, Y., Li, X. K. Simplified technique for heterotopic vascularized cervical heart transplantation in mice. Microsurgery. 25 (1), 76-79 (2005).
  8. Li, W., et al. Surgical technique for lung retransplantation in the mouse. Journal of Thoracic Disease. 5 (3), 321-325 (2013).
  9. Kamada, N., Calne, R. Y. A surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat. Surgery. 93 (1), 64-69 (1983).
  10. Chen, H., Zhang, Y., Zheng, D., Praseedom, R. K., Dong, J. Orthotopic kidney transplantation in mice: technique using cuff for renal vein anastomosis. PLoS One. 8 (10), 77278 (2013).
  11. Miller, M. L., et al. Spontaneous restoration of transplantation tolerance after acute rejection. Nature Communications. 6, 7566 (2015).
  12. Lin, Y., et al. Overexpression of Jagged-1 combined with blockade of CD40 pathway prolongs allograft survival. Immunology and Cell Biology. 93 (2), 213-217 (2015).
  13. Xie, B., et al. Combined costimulation blockade inhibits accelerated rejection mediated by alloantigen-primed memory T cells in mice. Immunological Investigations. 38 (7), 639-651 (2009).
  14. Shao, W., et al. Combination of monoclonal antibodies with DST inhibits accelerated rejection mediated by memory T cells to induce long-lived heart allograft acceptance in mice. Immunology Letters. 138 (2), 122-128 (2011).
  15. Dai, H., et al. Blockade of CD27/CD70 pathway to reduce the generation of memory T cells and markedly prolong the survival of heart allografts in presensitized mice. Transplant Immunology. 24 (4), 195-202 (2011).
  16. Yan, G., et al. Inhibition of accelerated rejection mediated by alloreactive CD4(+) memory T cells and prolonged allograft survival by arsenic trioxide. Immunological Investigations. 42 (5), 438-454 (2013).
  17. Yan, G., et al. Inhibiting accelerated rejection mediated by alloreactive CD4(+) memory T cells and prolonging allograft survival by 1alpha,25-dihydroxyvitamin D(3) in nude mice. Immunology Letters. 149 (1-2), 54-61 (2013).
  18. Lin, Y., et al. Arsenic trioxide is a novel agent for combination therapy to prolong heart allograft survival in allo-primed T cells transferred mice. Transplant Immunology. 25 (4), 194-201 (2011).
  19. Shao, W., et al. CD44/CD70 blockade and anti-CD154/LFA-1 treatment synergistically suppress accelerated rejection and prolong cardiac allograft survival in mice. Scandinavian Journal of Immunology. 74 (5), 430-437 (2011).
  20. Li, Y., et al. A highly reproducible cervical cuff technique for rat-to-mouse heterotopic heart xenotransplantation. Xenotransplantation. , (2017).
  21. Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. Journal of Visualized Experiments. (92), e50753 (2014).
  22. Blanchard, J. M., Pollak, R. Techniques for perfusion and storage of heterotopic heart transplants in mice. Microsurgery. 6 (3), 169-174 (1985).
  23. Felix, N. J., et al. H2-DMalpha(-/-) mice show the importance of major histocompatibility complex-bound peptide in cardiac allograft rejection. Journal of Experimental Medicine. 192 (1), 31-40 (2000).
  24. Tomita, Y., et al. Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice. Transplantation. 64 (11), 1598-1601 (1997).
  25. Niimi, M. The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon. Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).
  26. Wang, K., Zhang, N., Li, H. Improved technique of mouse heterotopic heart graft retransplantation. Microsurgery. 26 (3), 200-202 (2006).
  27. Plenter, R. J., Grazia, T. J. Murine heterotopic heart transplant technique. Journal of Visualized Experiments. (89), (2014).
  28. Ratschiller, T., et al. Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice. Journal of Visualized Experiments. (102), e52907 (2015).
  29. Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant. Experimental and Clinical Transplantation. 8 (3), 245-249 (2010).
  30. Fukunaga, N., Bissoondath, V., Rao, V. Submandibular Gland-preserving Technique for Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice. Transplantation. 102 (11), 464-465 (2018).
check_url/fr/61103?article_type=t

Play Video

Citer Cet Article
Ma, Y., Xie, B., Dai, H., Wang, C., Liu, S., Lan, T., Xu, S., Yan, G., Qi, Z. Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation. J. Vis. Exp. (160), e61103, doi:10.3791/61103 (2020).

View Video