Un protocole pour bloquer le flux lymphatique par suturing chirurgical des vaisseaux lymphatiques afferents est présenté.
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Article de méthode
Blocage du flux lymphatique par suturing vaisseaux lymphatiques afferent chez la souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les vaisseaux lymphatiques sont essentiels au maintien de l’équilibre des fluides tissulaires et à l’optimisation de la protection immunitaire en transportant des antigènes, des cytokines et des cellules vers les ganglions lymphatiques drainants (LN). L’interruption du flux lymphatique est une méthode importante lors de l’étude de la fonction des vaisseaux lymphatiques. Les vaisseaux lymphatiques afferents du pied murin aux ganglions lymphatiques popliteal (pLNs) sont bien définis comme les seules voies pour le drainage lymphatique dans les pLN. Le suturing ces vaisseaux lymphatiques afferents peut sélectivement empêcher le flux lymphatique aux pLNs. Cette méthode permet d’interférer dans le flux lymphatique avec des dommages minimes aux cellules endothéliales lymphatiques dans le pLN drainant, les vaisseaux lymphatiques afferents, ainsi que d’autres vaisseaux lymphatiques autour de la région. Cette méthode a été utilisée pour étudier comment la lymphe affecte les venules endothéliales élevées (HEV) et l’expression de chimiokine dans le LN, et comment la lymphe coule par le tissu adipeux entourant le LN en l’absence des vaisseaux lymphatiques fonctionnels. Avec la reconnaissance croissante de l’importance de la fonction lymphatique, cette méthode aura des applications plus larges pour démêler davantage la fonction des vaisseaux lymphatiques dans la régulation du microenvironnement LN et des réponses immunitaires.
Introduction
L’organisation spatiale du système lymphatique fournit un soutien structurel et fonctionnel pour éliminer efficacement le liquide extracellulaire et transporter les antigènes et les cellules présentant des antigènes (APC) vers les LN drainants. Les vaisseaux lymphatiques initiaux (également appelés capillaires lymphatiques) sont hautement perméables en raison de leurs jonctions intercellulaires discontinues, qui facilitent la collecte efficace des fluides, des cellules et d’autres matériaux des espaces extracellulairesenvironnants 1. Les vaisseaux lymphatiques initiaux fusionnent dans la collecte des vaisseaux lymphatiques, qui ont des jonction....
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Protocole
Tous les travaux sur les animaux doivent être approuvés par le comité institutionnel et gouvernemental d’éthique et de manipulation des animaux. C’est une opéra tion de non-survie.
1. Préparation des matériaux
- Préparer 100 mL d’éthanol à 70 % en mélangeant 70 mL d’éthanol à 100 % avec 30 mL d’eau stérile. Autoclave tous les outils chirurgicaux avant la chirurgie et garder les outils dans 70% d’éthanol avant et pendant la chirurgie pour maintenir la stérilisation.
- Préparer un appareil d’injection.
- Coupez ~30 cm de tube en polyéthylène (0,28 mm de diamètre). Connectez la pointe d’une aiguille de 30 G x 1/2 (aiguil....
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Résultats
Suture des vaisseaux lymphatiques a été utilisé dans les étudesprécédentes 15,16,17,19, où il a servi d’outil important pour étudier la fonction du flux lymphatique avant la biologie moléculaire des vaisseaux lymphatiques a été mieux compris. Le blocage du flux lymphatique interrompt l’homéostasie LN, ce qui conduit à hevs perdre l’expression génétique critique nécessaire pour homing lymphocyte.......
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Discussion
Le blocage du flux lymphatique aura de larges applications dans la manipulation de l’administration d’antigènes au LN dans des conditions saines et maladies. Il est possible d’utiliser cette méthode pour contrôler le moment de l’administration d’antigènes afin d’étudier comment le flux lymphatique continu régule la réponse immunitaire dans l’évacuation des LN. Cette méthode d’interruption du flux lymphatique peut également être utilisée pour étudier comment la lymphe influe sur la compartimentation cellulaire, l’activati.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.
Remerciements
Les auteurs remercient Ava Zardynezhad pour la relecture du manuscrit. Ces travaux sont appuyés par l’Institut canadien de recherche en santé (IRSC, PJT-156035), la Fondation canadienne pour l’innovation pour la SL (32930) et la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine pour Yujia Lin (81901576).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Chlorure de sodium < > 0,9 % solution saline forte | Baxter | JB1323 | |
| < forte>100 % éthanol | Greenfield Global | University of Calgary services de distribution UN1170. | |
| Crème dépilatoire | Nair | Nair Sensitive Formula Épilation Crè ; moi avec de l’huile d’amande douce et de l’huile pour bébé, 200 ml. Ou un produit similaire. | |
| fort | Sigma Life Science | E2129-10G | Pour 1 ml de colorant bleu Evans, ajoutez 0,1 g de bleu Evans à 10 ml de PBS. La solution Evens Blue sera filtrée à travers des filtres de 0,22 mm et maintenue stérile dans des aliquotes de 1 ml. |
| Fluorescein isothiocyanate isomere I (FITC) | Sigma Life Science | F7250-1G | |
| Forceps Dumont #3 | WPI | 500337 | |
| Forceps Dumont #5 | WPI | 500233 | |
| Appareil d’injection | Connectez une extrémité du tube en polyéthylène à 30G & fois ; ½ ; aiguille. Fixez une seringue de tuberculose de 1 ml à l’aiguille. Déloger la tige de l’aiguille d’un autre 30G & fois ; ½ ; aiguille. Insérez l’extrémité émoussée du 30G & times ; ½ ; l’arbre de l’aiguille dans l’autre extrémité du tube. Le diamètre intérieur de ce tube est de 0,28 mm. Ainsi, 1,6 cm de liquide dans le tube est 1 &mu ;l. | ||
| Seringue à insuline | Becton Dickinson and Company (BD) | 329461 | |
| IRIS Forcep straight | WPI | 15914 | |
| IRIS scissors | WPI | 14218-G | |
| Kétamine | Narketan | DIN 02374994 | Les fournisseurs de kétamine et de xylazine sont généralement soumis à une réglementation institutionnelle et gouvernementale. |
| Needles (26Gx3/8) | Becton Dickinson and Company (BD) | 305110 | |
| Needles (30Gx1/2) | Becton Dickinson and Company (BD) | 305106 | |
| Paton Needle Holder | ROBOZ | RS6403 | Straight, Without Lock ; Dentelé |
| Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Sigma Life Science | P4417-100TAB | |
| Tube en polyéthylène | Becton Dickinson and Company (BD) | 427401 | |
| Ruban chirurgical (1.25cmx9.1m ) | Transpore | 1527-0 | |
| Ruban chirurgical (2.5cmx9.1m ) | Transpore | 1527-1 | |
| Suture | Davis and Geck CYANAMID Canada | 11/04 | 0.7 métrique monofilament polypropylène |
| seringue (1ml) | Becton Dickinson and Company (BD) | 309659 | |
| VANNAS scissors | World Precision Instruments (WPI) | 14122-G | |
| Xylazine | Rompun | DIN02169606 | Les fournisseurs de kétamine et de xylazine sont généralement soumis à une réglementation institutionnelle et gouvernementale. |
| Équipement | |||
| Microscope à dissection | Olympus | Olympus S261 (522-STS OH141791) avec source lumineuse : Olympus Highlight 3100 | |
| Microscope confocal | Leica | SP8 |
Références
- Pflicke, H., Sixt, M. Preformed portals facilitate dendritic cell entry into afferent lymphatic vessels. The Journal of Experimental Medicine. 206, 2925-2935 (2009).
- Schmid-Schonbein, G. W. Microlymphatics and lymph flow. Physiological Reviews. 70
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Réimpressions et autorisations
