इस काम में, हम विशिष्ट सेल लक्ष्यीकरण के लिए एंटीबॉडी के साथ चुंबकीय नैनोमटेरियल्स को बायोफंक्शनलाइज करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं। उदाहरण के लिए, हम कैंसर कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए लोहे के नैनोवायर्स का उपयोग करते हैं।
चुंबकीय नैनोमटेरियल्स को विभिन्न बायोमेडिकल अनुप्रयोगों में बहुत ध्यान दिया गया है। साइड इफेक्ट्स को कम करते हुए निदान और उपचार में उनकी प्रभावकारिता को बढ़ाने के लिए विशिष्ट लक्ष्यीकरण एजेंटों के साथ इन नैनोमटेरियल्स को बायोफंक्शनलाइज करना एक महत्वपूर्ण पहलू है। गैर-चुंबकीय नैनोमटेरियल्स की तुलना में चुंबकीय नैनोमटेरियल्स का लाभ संपर्क-मुक्त तरीके से और बड़ी दूरी पर चुंबकीय क्षेत्रों का जवाब देने की उनकी क्षमता है। यह उन्हें मार्गदर्शन या जमा करने की अनुमति देता है, जबकि उनकी निगरानी भी की जा सकती है। हाल ही में, जैव चिकित्सा अनुप्रयोगों के लिए अद्वितीय विशेषताओं के साथ चुंबकीय नैनोवायर्स (एनडब्ल्यू) विकसित किए गए थे। इन एनडब्ल्यू का बड़ा चुंबकीय क्षण एक चुंबकीय क्षेत्र द्वारा उनके आंदोलन का अधिक कुशल रिमोट कंट्रोल सक्षम बनाता है। इसका उपयोग कैंसर उपचार, दवा वितरण, सेल ट्रेसिंग, स्टेम सेल भेदभाव या चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग में बड़ी सफलता के साथ किया गया है। इसके अलावा, टेम्पलेट-असिस्टेड इलेक्ट्रोकेमिकल जमाव द्वारा एनडब्ल्यू निर्माण एनडब्ल्यू गुणों पर कड़े नियंत्रण के साथ एक बहुमुखी विधि प्रदान करता है। विशेष रूप से लौह एनडब्ल्यू और लौह-लौह ऑक्साइड (कोर-शेल) एनडब्ल्यू उनके उच्च चुंबकीकरण और कम विषाक्तता के कारण बायोमेडिकल अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त हैं।
इस काम में, हम एक विशिष्ट सेल सतह मार्कर के खिलाफ निर्देशित विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ आयरन / आयरन ऑक्साइड एनडब्ल्यू को बायोफंक्शनलाइज करने की एक विधि प्रदान करते हैं जो बड़ी संख्या में कैंसर कोशिकाओं में अतिरंजित होता है। चूंकि विधि लौह ऑक्साइड सतह के गुणों का उपयोग करती है, इसलिए यह सुपरपैरामैग्नेटिक आयरन ऑक्साइड नैनोकणों पर भी लागू होती है। एनडब्ल्यू को पहले 3-एमिनोप्रोपिल-ट्राई-एथोक्सी-सिलेन (एपीटीईएस) के साथ लेपित किया जाता है जो एक लिंकर के रूप में कार्य करता है, जिससे एंटीबॉडी सहसंयोजक रूप से जुड़े होते हैं। एपीटीईएस कोटिंग और एंटीबॉडी बायोफंक्शनलाइजेशन इलेक्ट्रॉन ऊर्जा हानि स्पेक्ट्रोस्कोपी (ईईएलएस) और जेटा संभावित माप द्वारा साबित होते हैं। इसके अलावा, एनडब्ल्यू पर एंटीबॉडी की एंटीजेनेसिटी का परीक्षण इम्यूनोप्रेसिपेशन और वेस्टर्न ब्लॉट का उपयोग करके किया जाता है। बायोफंक्शनलाइज्ड एनडब्ल्यू के विशिष्ट लक्ष्यीकरण और उनकी जैव-रासायनिकता का अध्ययन कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी और सेल व्यवहार्यता परख द्वारा किया जाता है।
चुंबकीय नैनोमटेरियल्स की एक अनूठी संपत्ति चुंबकीय क्षेत्र1 का जवाब देने की उनकी क्षमता है, जिसका उपयोग उन्हें कई तरीकों से सक्रिय करने के लिए लाभकारी रूप से किया जा सकता है, जबकि उन्हें चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई) द्वारा भी निगरानी की जा सकती है। उच्च आवृत्ति पर एक वैकल्पिक चुंबकीय क्षेत्र लागू करते समय, वे गर्मी उत्पन्न कर सकते हैं, जो हाइपरथर्मिया को प्रेरित कर सकता है, एक चिकित्सीय विकल्पप्रदान करता है। एक अन्य दृष्टिकोण फोटोथर्मल उपचार है, जिसे निकट अवरक्त (एनआईआर) लेजर 2,3 के साथ महसूस किया जा सकता है।
चुंबकीय नैनोमटेरियल्स की बड़ी संख्या में, लौह ऑक्साइड को जैविक अनुप्रयोगों जैसे चुंबकीय पृथक्करण, हाइपरथर्मिया2,4, सेल मार्गदर्शन5, दवा वितरण 6,7,8 और एमआरआई 9,10 में एक कंट्रास्ट एजेंट के रूप में सबसे अधिक ध्यान दिया गया है। यह उनकी उच्च जैव-रासायनिकता 11,12, बड़े चुंबकीकरण 11,12, लेपित होने की क्षमता 9,13,14,15, दवाओं को ले जाने की क्षमता 2,16, दवाओं के साथ कार्यात्मक होने की क्षमता2,16 या / और लक्षित एजेंटों 12,13,17 के कारण है।, 18, और ऑप्टिकल ऊर्जा को गर्मी में परिवर्तित करने की क्षमता2. हाल ही में, मैग्फोर्स ने हाइपरथर्मिया उपचारके लिए आयरन ऑक्साइड नैनोकणों का उपयोग करके कैंसर रोगियों पर नैदानिक परीक्षण शुरू किया।
हाल ही में, बायोमेडिकलअनुप्रयोगों 3,11,16,20,21,22 के लिए चुंबकीय नैनोवायर्स (एनडब्ल्यू) का तेजी से शोषण किया गया है। उनके पास चुंबकीय नैनोबीड्स के समान गुण हैं, लेकिन एक अनिसोट्रोपिक आकार और एक बहुत बड़ा चुंबकीय क्षण प्रदान करते हैं, जो चुंबकीय क्षेत्र23,24 द्वारा एक बहुत ही कुशल रिमोट कंट्रोल को सक्षम बनाता है, जिसमें मैग्नेटो-मैकेनिकल प्रभाव 25,26,27,28,29 को प्रेरित करने के लिए कम आवृत्ति एक्ट्यूएशन शामिल है।. नतीजतन, एनडब्ल्यू को विभिन्न जैविक अनुप्रयोगों जैसे एक्सोसोम आइसोलेशन30 सेल ट्रैकिंग21, कैंसर उपचार 3,11,16, दवा वितरण 16,31,32 और एमआरआई कंट्रास्ट एजेंट 33 के रूप में लागू किया गया है।
विशिष्ट सेल लक्ष्यीकरण क्षमता के साथ बायोफंक्शनलाइज्ड चुंबकीय नैनोमटेरियल्स में बायोमेडिकल अनुप्रयोगों और सटीक चिकित्सा में34,35 की बड़ी क्षमता है। इन लक्ष्यीकरण एजेंटों को संलग्न करने के लिए, नैनोमटेरियल्स पर एक सतह संशोधन की आवश्यकता होती है। आमतौर पर, उन्हें एक कोटिंग की आवश्यकता होती है जो एक कार्यात्मक समूह प्रदान करती है, जो उपचार एजेंटों के लगाव की सुविधा प्रदान करती है। साहित्य में, चुंबकीय नैनोमटेरियल्स के लिए कार्बनिक और अकार्बनिक कोटिंग्स की एक बड़ी संख्या है। कार्यात्मक समूह के आधार पर जिसे नैनोमटेरियल में स्थिर किया जा सकता है, इन कोटिंग्स को चार मुख्य समूहों में वर्गीकृत किया जा सकता है: कार्बोक्जिलिक एसिड समूहों पर आधारित अणु, पॉलिमर, हिस्टिडाइन और सिलेन समूहों के आधार पर अणु।
कार्बोक्जिलिक एसिड समूहों पर आधारित अणु सतह संशोधन विधियों में से एक है। यह उच्च आत्मीयता का उपयोग करता है
कोटिंग पर नकारात्मक कार्बोक्जिलिक एसिड समूह और चुंबकीय नैनोमटेरियल्स पर सकारात्मक चार्ज 36,37,38 के बीच। एक धातु की सतह पर कार्बोक्जिलिक एसिड की बाध्यकारी प्रक्रिया में धातु-कार्बोक्सिलेट लवण की पीढ़ी या धातु के लिए कार्बोक्सिल समूह का आसंजन शामिल हो सकता है। हालांकि, बहु-खंडित एनडब्ल्यू के लिए, जैसे लोहा / सोना या निकल / सोने के एनडब्ल्यू, जिनमें जैव-अनुप्रयोगों के लिए शानदार गुण हैं39,40, इस प्रकार की कोटिंग आसानी से लागू नहीं की जा सकती है। इसे एक ही समय में दो अलग-अलग कोटिंग्स की आवश्यकता होती है: सोने के खंडों को संशोधित करने के लिए थिओल समूह और चुंबकीय खंडों (लोहा या निकल) के लिए कार्बोक्सिल समूह। कार्बोक्सिल समूहों पर आधारित अणुओं के कुछ उदाहरण हेमटोपोरफाइरिन, पिमेलिक एसिड, पामिटिक एसिड और 3-[(2-एमिनोथाइल) डिथियो] प्रोपियोनिक एसिड (एईडीपी)38 हैं। पॉलिमर का उपयोग करके चुंबकीय नैनोमटेरियल्स के सतह संशोधन कुछ अलग फायदे प्रदान करते हैं। पॉलिमर के बड़े आणविक भार के कारण, यह एक समाधान38 में चुंबकीय नैनोमटेरियल की स्थिरता को बढ़ाता है। हालांकि, यह नैनोमटेरियल38 के आकार में काफी वृद्धि करेगा। पॉलीविनाइलपाइरोलिडोन (पीवीपी), पॉलीथाइलीनमाइन (पीईआई), आर्जिनिन-ग्लाइसिन-डी एस्पार्टिक एसिड (आरजीडी), और पॉलीथीन ग्लाइकॉल (पीईजी) सतह संशोधनों के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले पॉलिमर के कुछ उदाहरण हैं। प्रत्येक की अपनी विशेषताएं हैं और38 का उपयोग करती हैं। तीसरी सतह संशोधन विधि हिस्टिडाइन कोटिंग का उपयोग कर रही है। हिस्टिडाइन एक प्रोटीन है जिसमें हिस्टिडाइन एमिनो एसिड साइड चेन होती है जिसमें निकल38 जैसे चुंबकीय नैनोमटेरियल्स की सीमित संख्या के लिए उच्च संबंध होता है। यह प्रोटीन शोधन प्रक्रियाओं 38,41,42 के लिए नियोजित किया जा सकता है। एक हिस्टिडाइन कोटिंग को बहु-खंडित एनडब्ल्यू पर भी लागू किया जा सकता है, जैसे कि निकल / नैनोमटेरियल सतह का सिलनाइजेशन एक अच्छी तरह से स्थापित प्रक्रियाहै 38,43,44. यह तीन एकल बंधों के माध्यम से किसी भी धातु ऑक्साइड की सतह से जुड़े एक सिलिकॉन परमाणु पर आधारित है, और एक ही समय में यह सिलिकॉन परमाणु एक अल्काइल श्रृंखला 38,43,44 के माध्यम से अंत में कार्यात्मक समूह से जुड़ा हुआ है। इस कोटिंग का लाभ मुक्त अमाइन समूह प्रदान कर रहा है, और इसमें क्रमशः निकल और सोने जैसे चुंबकीय और गैर-चुंबकीय सामग्री38,45 दोनों को कोट करने की क्षमता है। इसलिए, खारा समूह पर आधारित अणुओं का उपयोग करना बहु-खंडित एनडब्ल्यू को बायोफंक्शनलाइज करने के लिए एक व्यावहारिक मार्ग है। सिलेन समूहों पर आधारित अणुओं के कुछ उदाहरण (3-एमिनोप्रोपाइल) ट्राइएथोक्सीसिलेन (एपीटीईएस) और (3-एमिनोप्रोपाइल) ट्राइमेथॉक्सीसिलेन (एपीटीएमएस) 38,45 हैं।
कोटिंग के लिए एक लक्ष्यीकरण एजेंट के अतिरिक्त रोगग्रस्त कोशिकाओं के निदान और उपचार दोनों में महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकता है, और साथ ही, स्वस्थ ऊतकों पर दुष्प्रभाव ों को कम कर सकताहै46,47. नैनोमैटेरियल्स की सतह पर एक लक्ष्यीकरण एजेंट के अलावा एंडोसाइटोसिस रिसेप्टर्स7 के माध्यम से सेलुलर चयनात्मक बंधन और आंतरिककरण दोनों को बढ़ाता है। इन लक्ष्यीकरण लिगेंड के बिना, नैनोमटेरियल्स कोशिका झिल्ली के साथ गैर-विशिष्ट रूप से बातचीत करते हैं, जो लिगेंड48 के साथ नैनोमटेरियल्स की तुलना में कम दर पर बांधता है। कैंसर के ऊतकों को लक्षित करने की चुनौतियों में से एक स्वस्थ ऊतकों के लिए उनकी विशिष्ट समानता है। इसलिए, लक्ष्यीकरण की सफलता मुख्य रूप से जैविक लक्ष्य49,50 के रूप में उपयोग करने के लिए उपयुक्त लिगैंड का निर्धारण करने पर निर्भर करती है। कैंसर कोशिकाओं48,51 (जैसे, सीडी 44, स्वस्थ कोशिकाओं 52,53,54,55 की तुलना में कैंसर कोशिकाओं में इसकी उच्च अभिव्यक्ति के कारण) को नैनोमटेरियल्स को निर्देशित करने के लिए विभिन्न लक्ष्यीकरण एजेंटों को नियोजित किया गया है।
लक्ष्यीकरण एजेंटों को तीन मुख्य समूहों में वर्गीकृत किया जा सकता है, उन घटकों के आधार पर जो वे बने हैं और उनकी जटिलता: एपटामर-आधारित लक्ष्यीकरण, लिगैंड-आधारित लक्ष्यीकरण और एंटीबॉडी-आधारित लक्ष्यीकरण। एपटामर डीएनए या आरएनए-ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स के छोटे रासायनिक रूप से संश्लेषित किस्में हैं जो दो और तीन-आयामी संरचनाओं में मुड़े हुए हैं, जिससे वे एक विशिष्ट एंटीजन को लक्षित करने में सक्षम होते हैं, अक्सर प्रोटीन56। लिगैंड-आधारित लक्ष्यीकरण में पेप्टाइड्स और लघु अमीनो एसिड चेन57 शामिल हैं। एंटीबॉडी-आधारित लक्ष्यीकरण में एक पूरे एंटीबॉडी, या एंटीबॉडी टुकड़े का उपयोग शामिल है, जैसे कि एकल-श्रृंखला चर टुकड़े या एंटीजन-बाइंडिंग टुकड़े51। इस विधि का उपयोग करने से अपने विशिष्ट लक्ष्य एंटीजन के लिए उच्च बाध्यकारी संबंध के साथ दो बाध्यकारी साइटों को रखने का लाभ होता है, जो इसे अत्यधिक उच्च चयनात्मकतादेता है। बाइंडिंग साइटें एक लॉक के अनुरूप होती हैं और एंटीजन एक कुंजी58 के अनुरूप होती हैं।
इस काम में, उपयोग किए गए एनडब्ल्यू को एल्यूमीनियम ऑक्साइड झिल्ली पर इलेक्ट्रोडपोजिशन द्वारा निर्मित किया गया था, एक विधि जो पिछले प्रकाशन59 में विस्तार से वर्णित थी। यहां ध्यान इन लौह-लौह ऑक्साइड (कोर-शेल) एनडब्ल्यू को झिल्ली से जारी करने और लक्ष्यीकरण क्षमता प्रदान करने के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ बायोफंक्शनिंग करने पर है। एंटीबॉडी सीधे लौह-लौह ऑक्साइड एनडब्ल्यू से नहीं बंध सकते हैं और उन्हें एक लिंकर की आवश्यकता होती है। एपीटीईएस के साथ एनडब्ल्यू को कोटिंग मुक्त अमाइन समूह प्रदान करता है, जिससे एंटीबॉडी पर कार्बोक्सिल समूह के माध्यम से सहसंयोजक लगाव सक्षम होता है (चित्रा 1)। एपीटीईएस कोटिंग का लाभ चुंबकीय21 और गैर-चुंबकीय60 सामग्री दोनों के लिए काम करने की क्षमता है, जैसे लोहा / सोना या निकल / सोनाएनडब्ल्यू 45। इस प्रोटोकॉल में बताए गए सभी कोटिंग और बायोफंक्शनलाइजेशन चरणों का उपयोग सामान्य रूप से किसी भी लौह / लौह ऑक्साइड नैनोमटेरियल के साथ किया जा सकता है। आयरन/आयरन ऑक्साइड एनडब्ल्यू का उपयोग यहां एक उदाहरण के रूप में किया गया था। परिणाम बताते हैं कि एंटीबॉडी-कार्यात्मक एनडब्ल्यू में विशिष्ट सेल सतह रिसेप्टर्स के लिए एक उच्च एंटीजेनिकता होती है, जिसका उपयोग विभिन्न अनुप्रयोगों के लिए किया जा सकता है। उदाहरणों में सेल पृथक्करण, दवा वितरण, फोटोथर्मल और / या मैग्नेटो-मैकेनिकल उपचार का उपयोग करके विशिष्ट कैंसर सेल उपचार शामिल हैं।
किसी भी नैनोमटेरियल निर्माण और कोटिंग विधि के साथ, उपयोग किए जाने वाले समाधानों की उच्च गुणवत्ता की आवश्यकता होती है। रिलीज (1 एम एनएओएच) और कार्यात्मकता (एमईएस) समाधान ों को कई बार पुन: उपयोग किया जा सकता है। हालांकि, एक नई प्रक्रिया शुरू करने से पहले उनके पीएच मान की जांच करना बहुत महत्वपूर्ण है। रिलीज चरण में, एनएओएच के साथ एनडब्ल्यू को धोना कम से कम चार बार किया जाना चाहिए। धुलाई जितनी बेहतर होगी, एनडब्ल्यू की स्थिरता उतनी ही बेहतर होगी और वे उतने ही कम होंगे। ऑक्साइड परत इथेनॉल या पानी में विसर्जन पर एनडब्ल्यू की स्थिरता को बढ़ातीहै।
एपीटीईएस और एंटीबॉडी के साथ कोटिंग के बाद एनडब्ल्यू का व्यास और लंबाई प्रभावित हुई। यहां, व्यास 41.5 एनएम से बढ़कर 70 एनएम हो गया, और एनडब्ल्यू को तोड़ने वाले सोनिकेशन चरणों के कारण लंबाई 2.5 μm से घटकर 1.6 μm हो गई। इसलिए, बायोफंक्शनलाइजेशन चरण के बाद एनडब्ल्यू की आकृति विज्ञान को चिह्नित करना आवश्यक है।
एनडब्ल्यू के लिए एंटीबॉडी का लगाव अमाइन समूह (एपीटीईएस पर) और कार्बोक्सिल समूह (एंटीबॉडी पर) के बीच सहसंयोजक बातचीत पर निर्भर करता है। इसलिए, एपीटीईएस कोटिंग की उपस्थिति की पुष्टि करना एक महत्वपूर्ण कदम है, जिसके लिए हमने ईईएलएस मैपिंग का उपयोग किया। कोटिंग विधि सुरक्षित और सीधी है। इसे उच्च तापमान या लंबे इनक्यूबेशन समय की आवश्यकता नहीं होती है। इसके अलावा, एपीटीईएस कोटिंग अन्य एंटीबॉडी या प्रोटीन के सहसंयोजक लगाव को सक्षम करने के लिए एक लिंकर के रूप में काम करती है जिसमें कार्बोक्सिल समूह होता है।
एक एंटीबॉडी के साथ एनडब्ल्यू को बायोफंक्शनलाइज करने के मामले में, बायोफंक्शनलाइजेशन प्रक्रिया के बाद एंटीबॉडी की बाध्यकारी साइटों की एंटीजेनेसिटी प्रभावित हो सकती है। इस समस्या की जांच के लिए आईपी और डब्ल्यूबी विधि का उपयोग किया जा सकता है। इस प्रोटोकॉल में उल्लिखित बायोफंक्शनलाइजेशन विधि का उपयोग करने से एंटीबॉडी को एक विशिष्ट सेल रिसेप्टर के लिए उच्च एंटीजेनिसिटी वाले एनडब्ल्यू से बांधने की अनुमति मिलेगी। इसके अलावा, एंटीबॉडी के साथ एनडब्ल्यू को बायोफंक्शनलाइज करने से कोशिकाओं को रुचि के रिसेप्टर, सीडी 44 के साथ लक्षित करने की क्षमता बढ़ गई। इसकी पुष्टि कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी द्वारा की गई थी। यद्यपि अनकोटेड एनडब्ल्यू की जैव-रासायनिकता अधिक थी (>95%), एनडब्ल्यू में एपीटीईएस कोटिंग या एंटीबॉडी जोड़ने से उनकी जैव-रासायनिकता 100% बढ़ गई।
इसके अलावा, कोटिंग और बायोफंक्शनलाइजेशन प्रोटोकॉल कुशल, किफायती और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है। यह किसी भी अन्य लौह-लौह ऑक्साइड नैनोमटेरियल पर लागू होना चाहिए, जिससे कोटिंग और संलग्न एंटीबॉडी दोनों की एकाग्रता को सतह क्षेत्र और नैनोमटेरियल के द्रव्यमान के आधार पर अनुकूलित किया जाना चाहिए। यह प्रोटोकॉल सामान्य प्रयोगशाला में परिवेश की स्थिति में सुरक्षित रूप से किया जा सकता है। बायोफंक्शनलाइजेशन ने नैनोमटेरियल की जैव-रासायनिकता और उनकी लक्ष्यीकरण क्षमता में काफी वृद्धि की है। सामान्य तौर पर, एनडब्ल्यू नैनोमेडिकल अनुप्रयोगों (मल्टी-मोडल या मिश्रित उपचार, सेल डिटेक्शन या मार्गदर्शन और जैविक संवेदन सहित) के लिए बेहद आशाजनक सामग्री हैं। बायोफंक्शनलाइजेशन के साथ संयुक्त, जैसा कि यहां वर्णित है, बढ़ी हुई सटीकता और प्रभावकारिता के लिए विशिष्ट सेल लक्ष्यीकरण प्राप्त किया जा सकता है।
The authors have nothing to disclose.
इस प्रकाशन में रिपोर्ट किए गए शोध को किंग अब्दुल्ला यूनिवर्सिटी ऑफ साइंस एंड टेक्नोलॉजी (केएयूएसटी) द्वारा समर्थित किया गया था।
2 mL tube (snap-cap Microcentrifuge) | Eppendorf, Fisherscientific | 05-402-7 | |
2-N-Morpholino EthaneSulfonic acid hydrate 99% (MES) | Thermscientific | AC172590250 | Concentration 0.1 M and pH 4.7 |
3-3-Dimethyl-aminopropyl Carbodiimide (EDC) | Thermofisher | PG82079 | |
3-AminoPropyl-Tri-Ethoxy-Silane (APTES) | Sigma Aldrich | 919302 | |
5 mL glass tube | Fisherscientific | 03-339-22C | |
96-well plate ( flat bottom) | Sigma Aldrich | CLS3595 | |
Anti-CD44 antibody | BD Biosciences | 550990 | Clone 515, concentration 1 mg/mL |
APTES ((3-Aminopropyl)triethoxysilane), 99% | Sigma Aldrich | 919-30-2 | Concentration 99% |
BCA assay (Pierce BCA Protein Assay Kit) | Thermofisher | 23225 | |
Bovine Serum Albumin solution (BSA) | Sigma Aldrich | 9048-46-8 | Concentration 35% |
Cell incubator | Thermofisher | 50116047 | |
Cell viability reagent | AlamarBlue,Thermofisher | DAL1025 | |
Colon cancer cells – HCT116 cell line | ATCC | 430641 | |
Hardwood Hammer | Any hammer tool can be used, there is no specific brand. | ||
Inductively coupled plasma Mass Spectrometer (ICP-MS) | Perkin Elmer | ELAN 9000 ICP-MS | The used software is "Elan instrument control session" |
Laboratory Retort Stand with Clamp | RVFM | 13-0140 | This is used to handle the 5 mL glass tube in the sonicator bath. |
Magnetic rack (DynaMag-2 Magnet) | Thermofisher | 12321D | |
McCoy’s 5A Medium 1x | Gibco | 16600082 | |
Microplate reader (Bio-Rad xMark Absorbance Spectrophotometer) | Bio-Rad | 1681150 | Microplate Manager 6 software (#168-9520) |
Phosphate buffered saline (PBS) 10x | Gibco | 14200067 | Concentration 0.1 M (No calcuim, no magnesium) |
Phosphate buffered saline (PBS) 1x | Gibco | 14190136 | Concentration 0.01 M (No calcuim, no magnesium) |
Plate shaker (Microplate Genie) | Scientific Industries (Genie) | SI-0400 | |
Single Edge Razor blades | Polysciences | 08410-1 | |
Sodum hydrixide (NaOH) | Sigma Aldrich | 1310-73-2 | Concentration 1 M, pH 13 |
Sulfo-N-HydroxySulfosuccinimide (sulfo-NHS) | Thermofisher | 106627-54-7 | |
Trypsin | ATCC | 30-2101 | |
Tube rotator | VWR | 10136-084 | |
Tube shaker (Eppendorf Thermomixer R Mixer, 2.0 mL) | Eppendorf, Fisherscientific | 05-400-204 | |
Ultrasonic bath (2510) | Branson | 2489502 |