الأكسجين الناجم عن نموذج اعتلال الشبكية لأمراض الشبكية الإقفاري في القوارض
Summary
يمكن استخدام اعتلال الشبكية الناجم عن الأكسجين (OIR) في نموذج أمراض الشبكية الإقفارية مثل اعتلال الشبكية من الخداج واعتلال الشبكية السكري التكاثري ولخدمة كنموذج لدراسات إثبات المفهوم في تقييم الأدوية المضادة للأدوية المضادة للأمراض الوعائية. OIR يحفز neovascularization قوية وقابلة للتكرار في شبكية العين التي يمكن تحديدها كميا.
Abstract
أحد النماذج شائعة الاستخدام لـ اعتلال الشبكية الإقفائي هو نموذج اعتلال الشبكية الناجم عن الأكسجين (OIR). هنا نحن وصف البروتوكولات التفصيلية ل OIR نموذج التعريفي وقراءاته في كل من الفئران والجرذان. يتم حث الشبكية neovascularization في OIR عن طريق تعريض الجراء القوارض إما إلى فرط التأكسج (الفئران) أو مستويات بالتناوب من فرط التأكسج ونقص الأكسجة (الفئران). قراءات الأولية لهذه النماذج هي حجم المناطق النيفا (NV) و avascular (AVA) في شبكية العين. يمكن استخدام هذا النموذج قبل التكين في الجسم الحي لتقييم فعالية العقاقير المضادة للأوعية أو لمعالجة دور جينات محددة في تكوين الأوعية الدموية في الشبكية باستخدام الحيوانات المعالجة وراثيا. النموذج لديه بعض سلالة والمورد الاختلاف محددة في التعريفي OIR التي ينبغي أن تؤخذ في الاعتبار عند تصميم التجارب.
Introduction
هناك حاجة إلى نماذج تجريبية موثوقة وقابلة للتكرار لدراسة الأمراض الكامنة وراء أمراض العين الوعائية وتطوير علاجات جديدة لهذه الأمراض المدمرة. الأوعية الدموية المرضية هي السمة المميزة للضمور البقعي الرطب المرتبط بالعمر (AMD) وبالنسبة للعديد من أمراض الشبكية الإقفارية بينهم اعتلال الشبكية من الخداج (ROP) ، واعتلال الشبكية السكري التكاثري (PDR) وانسداد الوريد الشبكي (RVO)1،2،3،4. يتبع شبكية العين البشريّة والقوارض نمطاً مماثلاً من التطور، حيث أنّ شبكية العين البشريّة والقوارض من بين آخر الأنسجة التي يتمّ أوعية الأوعية الدموية. قبل أن تتطور الأوعية الدموية الشبكية تماما، يتلقى الشبكية إمداداتها الغذائية من الأوعية الدموية الهيالويد، والتي، بدورها، تتراجع عندما يبدأ الأوعية الشبكية لتطوير1،2. في الإنسان ، يتم الانتهاء من تطوير الأوعية الدموية في الشبكية قبل الولادة ، في حين أن نمو الأوعية الدموية في الشبكية يحدث بعد الولادة في القوارض. منذ تطور الأوعية الدموية الشبكية يحدث بعد الولادة في القوارض، فإنه يوفر نظام نموذج مثالي لدراسة الأوعية الدموية2،3. القوارض حديثي الولادة لديها شبكية العين افاسومية التي تتطور تدريجيا حتى اكتمال تطور شبكية العين الأوعية الدموية يتحقق بحلول نهاية الأسبوع الثالث بعد الولادة4. الأوعية الدموية المتنامية من الماوس الوليدي هي البلاستيك، وأنها تخضع الانحدار خلال hyperoxia التحفيز5.
ROP هو السبب الرئيسي للعمى الطفولة في البلدان الغربية، كما أنه يؤثر على ما يقرب من 70٪ من الأطفال الخدج مع وزن الولادة تحت 1250 ز6،7. يحدث ROP في الرضع الخدج الذين يولدون قبل أن تكمل الأوعية الشبكية نموها الطبيعي. تقدم ROP في مرحلتين: في المرحلة الأولى، تأخر الولادة المبتسرة نمو الأوعية الدموية الشبكية حيث بعد في المرحلة الثانية، فإن الأوعية الدموية غير المكتملة للشبكية النامية تسبب نقص الأكسجة، مما يحفز على التعبير عن عوامل النمو الوعائية التي تحفز نمو الأوعية الدموية الجديدة وغير الطبيعية8. وقد نموذج OIR نموذجا يستخدم على نطاق واسع لدراسة الفيزيولوجيا المرضية من ROP وغيرها من اعتلالات النترية الإقفارية وكذلك لاختبار المرشحين المخدرات رواية2,3,9. ويعتبر على نطاق واسع كنموذج استنساخه لإجراء دراسات إثبات من المفهوم للأدوية المضادة للأمراض المضادة للأمراض الوعائية المحتملة وكذلك غير العين. يختلف نموذجان القوارض أي الفأر والجرذان OIR في نموذجها التعريفي ونمط ظاهري للمرض. نموذج الفئران يحاكي النمط الظاهري ROP أكثر دقة، ولكن نموذج الماوس يوفر نموذج أكثر قوة وسريعة وقابلة للتكرار لneovascularization الشبكية (NV). في نموذج الماوس، يتطور NV إلى شبكية العين المركزية. هذا القراءة المرضية مهم في دراسات فعالية الأدوية للعديد من اعتلالات الشبكية الإقفارية ، مثل PDR و RV و AMD الناضح وكذلك للأمراض غير العينية ، الأوعية الدموية مثل السرطان. وعلاوة على ذلك، فإن توافر الفئران المتلاعب بها وراثيا (المعدلة وراثيا و القاضية) يجعل نموذج OIR الماوس خيارا أكثر شعبية. ومع ذلك، لا الماوس ولا نموذج OIR الفئران يخلق تليف الشبكية، وهو أمر نموذجي في الأمراض البشرية.
أدى الفهم بأن مستويات الأكسجين العالية تساهم في تطوير ROP في10 10،11 إلى تطوير نماذج حيوانية. وقد أجريت الدراسات الأولى حول تأثير الأكسجين على الأوعية الدموية الشبكية في 195012,13,14 وحتى 1990s كانت هناك العديد من التحسينات على نموذج OIR. البحث الذي أجراه سميث وآخرون في عام 1994 وضع معيارا لنموذج OIR الماوس الحالي الذي يفصل بين اعتلال الرحم من اعتلال الشبكية15. اعتماد واسع النطاق لطريقة لتحديد حجم vaso-طمس و NV المرضية من قبل كونور وآخرون (2009) زادت منشعبيتها 16. في هذا النموذج، يتم وضع الفئران في 75٪ الأكسجين (O2)لمدة 5 أيام في P7، تليها 5 أيام في ظروف نورموكسيك. يسبب فرط التأكسج من P7 إلى P12 انتفاخ الأوعية الشبكية إلى التراجع في شبكية العين المركزية. عند العودة إلى الظروف نورموكسيك, الشبكية avascular يصبح نقص الأكسجة (الشكل 1A). بسبب المحفزات نقص الأكسجة من الشبكية المركزية أفاسيتشال, بعض الأوعية الدموية الشبكية تنبت نحو الزجاجة, تشكيل ما قبل البروتينال NV, دعا قبل الخزامينات2,3. هذه الخصلات غير ناضجة، وفرط في الفرط. كمية من قمم NV في P17، وبعد ذلك يتراجع. الشبكية هي إعادة الأوعية الانعاشية بالكامل و NV هو تراجع تماما من قبل P23 – P25 (الشكل 2A)2،3.
وقد وصفت أول نموذج O 2 O (باستخدام مستويات متفاوتة من O2) في 1990s تبين أن مستويات O2 متفاوتة في 80٪ و 40٪ تسبب NV أكثر وضوحا من أقل من 80٪ O2 التعرض المستمر17. في وقت لاحق اكتشف أن نموذج نقص الأكسجة المتقطعة، حيث يتم تدوير O2 من فرط التأكسج (50٪) إلى نقص الأكسجة (10-12٪), أسباب أكثر من NV 80/40٪ O2 نموذج18. في نموذج 50/10٪ ، تتعرض الجراء الفئران إلى 50 ٪ لمدة 24 ساعة ، تليها 24 ساعة في 10 ٪ O2. واستمرت هذه الدورات حتى P14، عندما يتم إرجاع الجراء الفئران إلى الظروف normoxic(الشكل 1B). كما هو الحال في المرضى ROP الإنسان، في نموذج الفئران المناطق avascular تطوير إلى أطراف الشبكية بسبب شبكية العين غير ناضجة plexus الأوعية الدموية (الشكل 3).
في كلا النموذجين، المعلمات الرئيسية التي عادة ما يتم قياسها كميا هي حجم AVA و NV. ويتم تحليل هذه المعلمات عادة من يتصاعد الشبكية شقة حيث تسمى الخلايا البطانية4،16. في السابق تم تقييم كمية ما قبل الطمث NV من أقسام عرضية شبكية العين عن طريق عد الأوعية الدموية أو نواة الخلايا الوعائية الممتدة إلى الزجاجي فوق الغشاء الداخلي المحدد. والقيود الرئيسية التي تحد من هذا النهج هي أنه لا يمكن تحديد كميّة الـ AVAs.
Protocol
Representative Results
Discussion
شدة النمط الظاهري للمرض يعتمد على كل من سلالة وحتى البائع في كل من الفئران والجرذان OIR نماذج23. وهذا يشير إلى أن هناك تبايناً جينياً واسعاً في تطور علم الأمراض. بشكل عام ، تتطور القوارض المصطبغة نمطًا ظاهريًا أكثر حدة من تلك المهق. على سبيل المثال، الأوعية الدموية الشبكية من ألب…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر ماريان كارلسبرغ، آن ماري هابانييمي، بايفي بارتانين وآن كانكونين على الدعم الفني الممتاز. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل أكاديمية فنلندا، ومؤسسة بايفيككي وساكاري سهلبرغ، ومؤسسة تامبيري للسل، والمؤسسة الطبية الفنلندية، ومؤسسة بحوث منطقة مستشفى بيركانما، وصندوق أبحاث مستشفى تامبيري الجامعي.
Materials
| 33 gauge, Small Hub RN Needle | Hamilton Company | 7803-05, 10mm, 25°, PS4 | For intravitreal injection |
| Adobe Photoshop | Adobe Inc. | For image analysis | |
| Air pump air100 | Eheim GmbH & Co. KG. | 143207 | For inhalation anaesthesia |
| Anaesthesia unit 410 AP | Univentor Ltd. | 2360309 | For inhalation anaesthesia |
| AnalaR NORMAPUR Soda lime | VWR International Ltd | 22666.362 | For CO2 control during model induction |
| Attane Vet 1000 mg/g | VET MEDIC ANIMAL HEALTH OY | vnr 17 05 79 | For inhalation anaesthesia |
| Brush | For preparation of flat mounts | ||
| Carbon dioxide gas | For sacrifice | ||
| Celeris D430 ERG system | Diagnosys LLC | 121 | For in vivo ERG |
| Cell culture dishes | Greiner Bio-One International GmbH | 664 160 | For preparation of flat mounts |
| Cepetor Vet 1 mg/mL | VET MEDIC ANIMAL HEALTH OY | vnr 08 78 96 | For anaesthesia |
| Cover slips | Thermo Fisher Scientific | 15165452 | For preparation of flat mounts |
| O2 Controlled InVivo Cabinet, Aninal Filtrarion System and Dehumidifier | Coy Laboratory Products | Closed system for disease model induction, optional for semi-closed system | |
| E702 O2 sensor | BioSphenix, Ltd. | E207, 1801901 | For oxygen level measurement |
| Envisu R2200 Spectral Domain Optical Coherence Tomograph (SD-OCT) | Bioptigen, Inc. | BPN000668 | For in vivo imaging |
| Eye spears | Beaver-Visitec International, Inc. | 0008685 | For intravitreal injection and in vivo imaging |
| Flexilux 600LL Cold light source | Mikron | 11140 | For intravitreal injection or tissue collection |
| Fluorescein sodium salt | Merck KGaA | F6377-100G | For in vivo imaging |
| Gas Exhaust unit (+Double 3-way valve, mouse and rat face masks, UNOsorb filter) | UNO Roestvaststaal BV | GEX 17015249 | For inhalation anaesthesia |
| Glass syringe, Model 65 RN | Hamilton Company | 7633-01 | For intravitreal injection |
| HRA2 Retina angiograph (FA) | Heidelberg Engineering GmbH | Spec-KT-05488 | For in vivo imaging |
| Isolectin GS-IB4, Alexa Fluor 488 Conjugate | Thermo Fisher Scientific | I21411 | For labeling retinal vasculature on flat mounts |
| Ketaminol Vet 50 mg/mL | Intervet International B.V. | vnr 51 14 85 | For anaesthesia |
| Medicinal Oxygen gas | For disease model induction | ||
| Mice C57BL/6JRj | Janvier Labs | Also other strains possible | |
| Microscope slides | Thermo Fisher Scientific | J1800AMNZ | For preparation of flat mounts |
| Minims Povidone Iodine 5% (unit) | Bausch & Lomb U.K Limited | vnr 24 11 304 | For intravitreal injection |
| Nitrogen gas | For disease model induction (rat) | ||
| Oftan Chlora 10 mg/g | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | vnr 55 01 11 | For intravitreal injection |
| Oftan Metaoksedrin 100 mg/ml | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | vnr 55 03 43 | For in vivo ERG |
| Oftan Obucain 4 mg/ml | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | vnr 55 03 50 | For intravitreal injection |
| Oftan Tropicamid 5 mg/ml | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | vnr 04 12 36 | For in vivo imaging |
| ProOx Model 110 O2 controller and animal chamber | BioSphenix, Ltd. | 803 | For disease model induction, semi-closed system, optional for closed system |
| ProOx Model P360 O2 controller and animal chamber | BioSphenix, Ltd. | 538 | For disease model induction, semi-closed system, optional for closed system |
| Rats CD(SD) | Charles River Laboratories | Also other strains possible | |
| Revertor 5 mg/mL | VET MEDIC ANIMAL HEALTH OY | vnr 13 04 97 | For anaesthesia reversal |
| Silica gel | For humidity control during model induction | ||
| Systane Ultra 10ml | Alcon | Tamro 2050250 | For hydration of the eye |
| Systane Ultra unit 0.7ml | Alcon | Tamro 2064871 | For hydration of the eye |
| Transfer pipette | Thermo Fisher Scientific | 1343-9108 | For preparation of flat mounts |
| VENTI-Line VL 180 PRIME Drying oven | VWR | VL180S 170301 | For drying silica gel |
| VisiScope SZT350 Stereomicroscope | VWR | 481067 | For intravitreal injection or tissue collection |
References
- Chase, J. The evolution of retinal vascularization in mammals. A comparison of vascular and avascular retinae. Ophthalmology. 89 (12), 1518-1525 (1982).
- Sun, Y., Smith, L. E. H. Retinal vasculature in development and diseases. Annual Review of Vision Science. 4, 101-122 (2018).
- Vähätupa, M., Järvinen, T. A. H., Uusitalo-Järvinen, H. Exploration of oxygen-induced retinopathy model to discover new therapeutic drug targets in retinopathies. Frontiers in Pharmacology. 11, 873 (2020).
- Stahl, A., et al. The mouse retina as an angiogenesis model. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51 (6), 2813-2826 (2010).
- Benjamin, L. E., Hemo, I., Keshet, E. A plasticity window for blood vessel remodelling is defined by pericyte coverage of the preformed endothelial network and is regulated by PDGF-B and VEGF. Development. 125 (9), 1591-1598 (1998).
- Bashinsky, A. L. Retinopathy of prematurity. North Carolina Medical Journal. 78 (2), 124-128 (2017).
- Ludwig, C. A., Chen, T. A., Hernandez-Boussard, T., Moshfeghi, A. A., Moshfeghi, D. M. The epidemiology of retinopathy of prematurity in the united states. Ophthalmic Surgery, Lasers and Imaging Retina. 48 (7), 553-562 (2017).
- Hartnett, M. E. Pathophysiology and mechanisms of severe retinopathy of prematurity. Ophthalmology. 122 (1), 200-210 (2015).
- Liu, C. H., Wang, Z., Sun, Y., Chen, J. Animal models of ocular angiogenesis: From development to pathologies. FASEB Journal. 31 (11), 4665-4681 (2017).
- Szewczyk, T. S. Retrolental fibroplasia; etiology and prophylaxis. American Journal of Ophthalmology. 35 (3), 301-311 (1952).
- Szewczyk, T. S. Retrolental fibroplasia and related ocular diseases; classification, etiology, and prophylaxis. American Journal of Ophthalmology. 36 (10), 1336-1361 (1953).
- Gerschman, R., Nadig, P. W., Snell, A. C., Nye, S. W. Effect of high oxygen concentrations on eyes of newborn mice. American Journal of Physiology. 179 (1), 115-118 (1954).
- Gyllnesten, L. J., Hellström, B. E. Experimental approach to the pathogenesis of retrolental fibroplasia. III. changes in the eye induced by exposure of newborn mice to general hypoxia. British Journal of Ophthalmology. 39 (7), 409-415 (1955).
- Curley, F. J., Habegger, H., Ingalls, T. H., Philbrook, F. R. Retinopathy of immaturity in the newborn mouse after exposure to oxygen imbalances. American Journal of Ophthalmology. 42 (3), 377-392 (1956).
- Smith, L. E., et al. Oxygen-induced retinopathy in the mouse. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 35 (1), 101-111 (1994).
- Connor, K. M., et al. Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: A model of vessel loss, vessel regrowth and pathological angiogenesis. Nature Protocols. 4 (11), 1565-1573 (2009).
- Penn, J. S., Tolman, B. L., Lowery, L. A. Variable oxygen exposure causes preretinal neovascularization in the newborn rat. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 34 (3), 576-585 (1993).
- Penn, J. S., Henry, M. M., Tolman, B. L. Exposure to alternating hypoxia and hyperoxia causes severe proliferative retinopathy in the newborn rat. Pediatric Research. 36 (6), 724-731 (1994).
- Ritter, M. R., et al. Three-dimensional in vivo imaging of the mouse intraocular vasculature during development and disease. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 46 (9), 3021-3026 (2005).
- Xiao, S., et al. Fully automated, deep learning segmentation of oxygen-induced retinopathy images. Journal of Clinical Investigation Insight. 2 (24), 97585 (2017).
- Mazzaferri, J., Larrivee, B., Cakir, B., Sapieha, P., Costantino, S. A machine learning approach for automated assessment of retinal vasculature in the oxygen induced retinopathy model. Scientific Reports. 8 (1), 22251-22257 (2018).
- Kim, C. B., D’Amore, P. A., Connor, K. M. Revisiting the mouse model of oxygen-induced retinopathy. Eye and Brain. 8, 67-79 (2016).
- Barnett, J. M., Yanni, S. E., Penn, J. S. The development of the rat model of retinopathy of prematurity. Documenta Ophthalmologica. 120 (1), 3-12 (2010).
- Ritter, M. R., et al. Myeloid progenitors differentiate into microglia and promote vascular repair in a model of ischemic retinopathy. Journal of Clinical Investigation. 116 (12), 3266-3276 (2006).
- Floyd, B. N., et al. Differences between rat strains in models of retinopathy of prematurity. Molecular Vision. 11, 524-530 (2005).
- Scott, A., Powner, M. B., Fruttiger, M. Quantification of vascular tortuosity as an early outcome measure in oxygen induced retinopathy (OIR). Experimental Eye Research. 120, 55-60 (2014).
- Walsh, N., Bravo-Nuevo, A., Geller, S., Stone, J. Resistance of photoreceptors in the C57BL/6-c2J, C57BL/6J, and BALB/cJ mouse strains to oxygen stress: Evidence of an oxygen phenotype. Current Eye Research. 29 (6), 441-447 (2004).
- Chan, C. K., et al. Differential expression of pro- and antiangiogenic factors in mouse strain-dependent hypoxia-induced retinal neovascularization. Laboratory Investigation. 85 (6), 721-733 (2005).
- Stahl, A., et al. Postnatal weight gain modifies severity and functional outcome of oxygen-induced proliferative retinopathy. American Journal of Pathology. 177 (6), 2715-2723 (2010).
- Liegl, R., Priglinger, C., Ohlmann, A. Induction and readout of oxygen-induced retinopathy. Methods in Molecular Biology. 1834, 179-191 (2019).
- Holmes, J. M., Duffner, L. A. The effect of postnatal growth retardation on abnormal neovascularization in the oxygen exposed neonatal rat. Current Eye Research. 15 (4), 403-409 (1996).
- Holmes, J. M., Zhang, S., Leske, D. A., Lanier, W. L. The effect of carbon dioxide on oxygen-induced retinopathy in the neonatal rat. Current Eye Research. 16 (7), 725-732 (1997).
- Heiduschka, P., Plagemann, T., Li, L., Alex, A. F., Eter, N. Different effects of various anti-angiogenic treatments in an experimental mouse model of retinopathy of prematurity. Journal of Clinical and Experimental Ophthalmology. 47 (1), 79-87 (2019).
- Tokunaga, C. C., et al. Effects of anti-VEGF treatment on the recovery of the developing retina following oxygen-induced retinopathy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 55 (3), 1884-1892 (2014).
- Tokunaga, C. C., Chen, Y. H., Dailey, W., Cheng, M., Drenser, K. A. Retinal vascular rescue of oxygen-induced retinopathy in mice by norrin. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 54 (1), 222-229 (2013).
- Vähätupa, M., Uusitalo-Järvinen, H., Järvinen, T. A. H., Uusitalo, H., Kalesnykas, G. Intravitreal injection of PBS reduces retinal neovascularization in the mouse oxygen-induced retinopathy model. Investigative Ophthalmology & Visual Science. Abstract Issue. 57 (12), 3649 (2016).
- Penn, J. S., et al. Angiostatic effect of penetrating ocular injury: Role of pigment epithelium-derived factor. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 47 (1), 405-414 (2006).
- Becker, S., Wang, H., Stoddard, G. J., Hartnett, M. E. Effect of subretinal injection on retinal structure and function in a rat oxygen-induced retinopathy model. Molecular Vision. 23, 832-843 (2017).
- Sophie, R., et al. Aflibercept: A potent vascular endothelial growth factor antagonist for neovascular age-related macular degeneration and other retinal vascular diseases. Biological Therapy. 2, (2012).
- Mezu-Ndubuisi, O. J. In vivo angiography quantifies oxygen-induced retinopathy vascular recovery. Optometry and Vision Science. 93 (10), 1268-1279 (2016).
- Mezu-Ndubuisi, O. J., et al. In vivo retinal vascular oxygen tension imaging and fluorescein angiography in the mouse model of oxygen-induced retinopathy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 54 (10), 6968-6972 (2013).
- Dailey, W. A., et al. Ocular coherence tomography image data of the retinal laminar structure in a mouse model of oxygen-induced retinopathy. Data in Brief. 15, 491-495 (2017).
- Mezu-Ndubuisi, O. J., Taylor, L. K., Schoephoerster, J. A. Simultaneous fluorescein angiography and spectral domain optical coherence tomography correlate retinal thickness changes to vascular abnormalities in an in vivo mouse model of retinopathy of prematurity. Journal of Ophthalmology. 2017, 9620876 (2017).
- Pinto, L. H., Invergo, B., Shimomura, K., Takahashi, J. S., Troy, J. B. Interpretation of the mouse electroretinogram. Documenta Ophthalmologica. 115 (3), 127-136 (2007).
- Nakamura, S., et al. Morphological and functional changes in the retina after chronic oxygen-induced retinopathy. PLoS One. 7 (2), 32167 (2012).
- Dorfman, A. L., Polosa, A., Joly, S., Chemtob, S., Lachapelle, P. Functional and structural changes resulting from strain differences in the rat model of oxygen-induced retinopathy. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 50 (5), 2436-2450 (2009).
- Vähätupa, M., et al. SWATH-MS proteomic analysis of oxygen-induced retinopathy reveals novel potential therapeutic targets. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 59 (8), 3294-3306 (2018).
- Campos, M., Amaral, J., Becerra, S. P., Fariss, R. N. A novel imaging technique for experimental choroidal neovascularization. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 47 (12), 5163-5170 (2006).
- Yanez, C. O., et al. Deep Vascular Imaging in Wounds by Two-Photon Fluorescence Microscopy. PLos One. 8 (7), 67559 (2013).
- Wickramasinghe, L. C., et al. Lung and eye disease develop concurrently in supplemental oxygen-exposed neonatal mice. American Journal of Pathology. , 30287 (2020).
