Détection de l’expression de microARN dans les reins de souris néphropathiques immunoglobulines A

Summary

Les microARN sont impliqués dans la pathogenèse de la néphropathie à IgA. Nous avons développé une méthode fiable pour détecter les niveaux d’expression des microARN dans les reins d’un modèle murin de néphropathie à IgA (souris HIGA). Cette nouvelle méthode facilitera la vérification de l’implication des miARN dans la néphropathie à IgA.

Abstract

La néphropathie à immunoglobuline A (IgA) est un type de glomérulonéphrite primaire caractérisée par le dépôt anormal d’IgA, conduisant à l’insuffisance rénale terminale. Ces dernières années, l’implication des microARN (miARN) a été rapportée dans la pathogenèse de la néphropathie à IgA. Cependant, il n’existe pas de méthode établie pour profiler les miARN dans la néphropathie à IgA à l’aide de modèles de petits animaux. Par conséquent, nous avons développé une méthode fiable pour analyser les miARN dans le rein d’un modèle murin IgA (souris HIGA). L’objectif de ce protocole est de détecter les niveaux d’expression altérés des miARN dans les reins des souris HIGA par rapport aux niveaux dans les reins des souris témoins. En bref, cette méthode comprend quatre étapes: 1) l’obtention d’échantillons de reins de souris HIGA; 2) purifier l’ARN total des échantillons de reins; 3) synthétiser l’ADN complémentaire à partir de l’ARN total; et 4) la réaction en chaîne par polymérase quantitative à transcription inverse (qRT-PCR) des miARN. En utilisant cette méthode, nous avons réussi à détecter les niveaux d’expression de plusieurs miARN (miR-155-5p, miR-146a-5p et miR-21-5p) dans les reins de souris HIGA. Cette nouvelle méthode peut être appliquée à d’autres études de profilage des miARN dans la néphropathie à IgA.

Introduction

La néphropathie à immunoglobuline A (IgA) est un type de glomérulonéphrite primaire caractérisée par le dépôt anormal d’IgA dans la région mésangiale glomérulaire^{rénale 1,2}. C’est la glomérulonéphrite primaire la plus fréquente et conduit à l’insuffisance rénale terminale chez 20 à 40 % des patients². La cause est encore inconnue mais une infection muqueuse persistante a été impliquée ^1,3. Des corticostéroïdes, des immunosuppresseurs et des inhibiteurs du système rénine-angiotensine ont été proposés comme méthodes thérapeutiques....

Protocol

Les expériences sur les animaux ont été approuvées par le Comité d’éthique animale de l’Université médicale de Jichi et sont conformes aux directives sur l’utilisation et le soin des animaux de laboratoire du Guide des animaux de laboratoire de l’Université médicale de Jichi.

1. Obtention d’échantillons de reins de souris HIGA

REMARQUE: Les souris HIGA présentent un phénotype stable de néphropathie à IgA après^{l’âge de} 25 semaines 8,9,10,11. Les souris Balb/c doivent être sélectionnées com....

Results

Nous avons étudié les niveaux d’expression des miARN dans les reins de souris HIGA (n = 10). Ce résultat a été obtenu entièrement sur la base du protocole décrit. Les reins des souris Balb/c ont été choisis comme témoins (n = 10). Dans les deux groupes, des personnes âgées de 25 semaines ont été sélectionnées. Seules les souris HIGA femelles étaient disponibles auprès du fournisseur. Les niveaux d’expression de trois miARN (miR-155-5p, miR-146a-5p et miR-21-5p; Graphique 1) ont été détectés,.......

Discussion

Nous avons pu mesurer les niveaux d’expression des miARN dans les reins d’un modèle murin de néphropathie à IgA (souris HIGA) en utilisant cette nouvelle méthode. La néphropathie à IgA est une maladie inexpliquée qui nécessite des recherches supplémentaires pour clarifier son étiologie et ses cibles thérapeutiques ^1,3. Cependant, l’obtention d’échantillons de rein humains est très invasive. Cette nouvelle technique est avantageuse en ce qu’elle permet l’étude de .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BALB/cCrSlc (femelle de 25 semaines)	Japan SLC, Inc.	none	Souris de contrôle
HIGA/NscSlc (femelle de 25 semaines)	Japan SLC, Inc.		Néphropathie IgA modèle murin
MicroAmp Optical 96 well reaction plate pour qRT-PCR	Thermo Fisher Scientific	4316813	96 well
reaction plate MicroAmp Optical Adhesive Film	Thermo Fisher Scientific	4311971	film adhésif pour plaque réactionnelle 96 puits
miScript II RT kit	Qiagen	218161	Experimental kit for synthesis d’ADNc
miRNeasy Mini kit	Qiagen	217004	Kit expérimental pour l’extraction de l’ARN total
miScript Primer Assay (RNU6-2)	Qiagen	MS00033740	amorce spécifique miARN
miScript Primer Assay (miR-155-5p)	Qiagen	MS00001701	amorce spécifique miRNA
miScript Primer Assay (miR-146a-5p)	Qiagen	MS00001638	amorce spécifique miARN
miScript Primer Assay (miR-21-5p)	Amorce spécifique aux miARN	Qiagen	MS00009079
Kit de PCR verte miScript SYBR Kit			expérimental 218073 pour PCR en temps réel
Broyeur QIA	Qiagen	79654	Colonne de broyage de biopolymères
QuantStudio 12K Flex Système de PCR en temps réel	Thermo Fisher Scientific	4472380	instrument de PCR en temps réel
QuantStudio 12K Flex Software version 1.2.1.	Thermo Fisher Scientific	4472380	logiciel d’instrument de PCR en temps réel
biomasher takara standard	Homogénéisateur de silicium	Takara Bio	9790B