JoVE Journal > Neuroscience
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Résultats
Discussion
Divulgations
Acknowledgements
Materials
References
Traduction automatique
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Neurosciences

Subretinale transplantatie van menselijk embryonaal stamcel-afgeleid retinaal weefsel in een katachtig groot diermodel

Published: August 05, 2021
doi:
10.3791/61683
, , , , ,
1College of Veterinary Medicine, Department of Small Animal Clinical Sciences,Michigan State University, 2Lineage Cell Therapeutics, Inc.

Summary

Hier wordt een chirurgische techniek gepresenteerd voor het transplanteren van van menselijke pluripotente stamcellen (hPSC) afgeleid netvliesweefsel in de subretinale ruimte van een groot diermodel.

Abstract

Retinale degeneratieve (RD) aandoeningen geassocieerd met fotoreceptorverlies zoals leeftijdsgebonden maculaire degeneratie (AMD), retinitis pigmentosa (RP) en Leber Congenitale Amaurosis (LCA) veroorzaken progressief en slopend verlies van het gezichtsvermogen. Er is een onvervulde behoefte aan therapieën die het gezichtsvermogen kunnen herstellen zodra fotoreceptoren verloren zijn gegaan. Transplantatie van menselijke pluripotente stamcel (hPSC)-afgeleid retinaal weefsel (organoïden) in de subretinale ruimte van een oog met geavanceerde RD brengt retinale weefselvellen met duizenden gezonde mutatievrije fotoreceptoren en heeft een potentieel om de meeste / alle blinderende ziekten geassocieerd met fotoreceptordegeneratie te behandelen met één goedgekeurd protocol. Transplantatie van foetaal netvliesweefsel in de subretinale ruimte van diermodellen en mensen met gevorderde RD is met succes ontwikkeld, maar kan niet worden gebruikt als een routinetherapie vanwege ethische problemen en beperkte weefseltoevoer. Grote oog erfelijke retinale degeneratie (IRD) diermodellen zijn waardevol voor het ontwikkelen van gezichtshersteltherapieën met behulp van geavanceerde chirurgische benaderingen om retinale cellen / weefsel in de subretinale ruimte te transplanteren. De overeenkomsten in bolgrootte en fotoreceptordistributie (bijv. Aanwezigheid van macula-achtige regiogebiedcentralisten) en beschikbaarheid van IRD-modellen die de menselijke IRD nauw samenvatten, zouden een snelle vertaling van een veelbelovende therapie naar de kliniek vergemakkelijken. Hier wordt een chirurgische techniek gepresenteerd voor het transplanteren van hPSC-afgeleid netvliesweefsel in de subretinale ruimte van een groot diermodel waarmee deze veelbelovende aanpak in diermodellen kan worden beoordeeld.

Introduction

Miljoenen mensen over de hele wereld worden beïnvloed door retinale degeneratie (RD) met als gevolg een visuele beperking of blindheid geassocieerd met verlies van de lichtgevoelige fotoreceptoren (PR’s). Leeftijdsgebonden maculaire degeneratie (AMD) is een belangrijke oorzaak van blindheid als gevolg van een combinatie van genetische risicofactoren en omgevings- / levensstijlfactoren. Daarnaast is gebleken dat meer dan 200 genen en loci erfelijke RD (IRD)1 veroorzaken. Retinitis pigmentosa (RP), de meest voorkomende IRD, is genetisch heterogeen met meer dan 3.000 genetische mutaties in ongeveer 70 genen die 2,3,4 worden gerapporteerd. Leber Congenitale Amaurosis (LCA), die blindheid in de kindertijd veroorzaakt, is ook genetisch heterogeen 5,6. Genaugmentatietherapie is ontwikkeld en bevindt zich in klinische onderzoeken voor de behandeling van een klein aantal IRD’s 3,7. Er moet echter een afzonderlijke therapie worden ontwikkeld voor de behandeling van elke afzonderlijke genetische vorm van IRD en daarbij slechts een kleine subgroep van patiënten behandelen. Bovendien is genvergroting afhankelijk van de aanwezigheid van een populatie van te redden fotoreceptoren en is daarom niet van toepassing op gevorderde degeneratie.

Er is daarom een dringende en nog onvervulde klinische behoefte aan de ontwikkeling van therapieën die geavanceerde RD’s en diepgaande tot terminale blindheid aanpakken en behandelen. In de afgelopen 2 decennia zijn neuroprothetische implantaten ontwikkeld en getest in grote diermodellen, zoals de kat, voorafgaand aan menselijk gebruik 8,9,10,11,12,13,14. Evenzo zijn in de afgelopen 20 jaar retinale vervangingstherapieën met behulp van vellen embryonaal of zelfs volwassen netvlies van zoogdieren die subretinaal zijn getransplanteerd, ontwikkeld 15,16,17,18,19,20,21,22 en zelfs met succes getest bij RD-patiënten 23,24,25. Beide benaderingen maken gebruik van het idee om nieuwe sensoren (fotovoltaïsche siliciumfotodiodes in het geval van neuroprothetische apparaten26,27, en gezonde mutatievrije fotoreceptoren georganiseerd in vellen, in het geval van retinale plaatimplantatie) in het netvlies te introduceren met gedegenereerde PR’s. Recente studies hebben het gebruik van op stamcellen gebaseerde benaderingen onderzocht, zoals transplantatie van menselijke pluripotente stamcellen (hPSC)-afgeleide retinale voorlopers28,29, hPSC-fotoreceptoren 30 en hPSC-retinale organoïden31,32,33. Retinale organoïden maken de vorming van netvliesweefsel in een schaal mogelijk en afleiding van fotoreceptorvellen met duizenden mutatievrije PR’s, die lijken op de fotoreceptorlaag in het zich ontwikkelende menselijke foetale netvlies 34,35,36,37,38,39,40 . Het transplanteren van hPSC-afgeleid retinaal weefsel (organoïden) in de subretinale ruimte van patiënten met RD-aandoeningen is een van de nieuwe en veelbelovende benaderingen voor experimentele celtherapie, die wordt nagestreefd door een aantal teams31,32,41,42. Vergeleken met transplantatie van de celsuspensie (van jonge fotoreceptoren of retinale voorlopercellen), werd aangetoond dat getransplanteerde vellen foetale fotoreceptoren resulteerden in verbeteringen in het gezichtsvermogen in klinische onderzoeken23,24.

Het hier gepresenteerde protocol beschrijft in detail een transplantatieprocedure voor subretinale toediening van de gehele retinale organoïden (in plaats van organoïde randen33,41) als een potentieel betere manier om intacte retinale vellen met PR’s te introduceren, om de overleving van het transplantaat te vergroten en de bladconservering te verbeteren. Hoewel procedures voor het introduceren van een plat stuk menselijk netvlies en ook RPE-pleisters zijn ontwikkeld43,44,45, is transplantatie van grotere 3D-grafts niet onderzocht. Van stamcellen afgeleide retinale organoïden bieden een onuitputtelijke bron van fotoreceptorbladen voor het ontwikkelen van technologieën voor het herstel van het gezichtsvermogen, zijn vrij van ethische beperkingen en worden beschouwd als een uitstekende bron van menselijk netvliesweefsel voor therapieën gericht op de behandeling van gevorderde RD en terminale blindheid46. De ontwikkeling van chirurgische methoden voor nauwkeurige subretinale implantatie van retinale organoïden met minimaal letsel aan de retinale niche van de gastheer (neuraal netvlies, retinaal pigmentepitheel en retinale en choroïdale vasculatuur) is een van de kritieke stappen voor het bevorderen van dergelijke therapie in de richting van klinische toepassingen31,32. Grote diermodellen zoals katten, honden, varkens en apen hebben bewezen goede modellen te zijn voor het onderzoeken van chirurgische toedieningsmethoden en om de veiligheid van geïmplanteerde vellen weefsel (retinale pigmentepitheel (RPE) cellen) aan te tonen en het gebruik van organoïden te onderzoeken 41,44,45,47,48,49,50 . Het grote dierlijke oog heeft een vergelijkbare bolgrootte als de mens en een vergelijkbare anatomie, waaronder de aanwezigheid van een gebied met een hoge fotoreceptordichtheid, inclusief kegeltjes (het centrale gebied), dat lijkt op de menselijke macula 6,51,52.

In dit manuscript wordt een techniek beschreven voor de implantatie van hPSC-afgeleid retinaal weefsel (organoïden) in de subretinale ruimte van katachtige grote diermodellen (zowel wild-type als CrxRdy / + katten), die, samen met veelbelovende werkzaamheidsresultaten32,53, een basis vormt voor verdere ontwikkeling van dergelijke onderzoekstherapie in de richting van klinische toepassingen om RD-aandoeningen te behandelen.

Protocol

De procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de verklaring van de Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) for Use of Animals in Ophthalmic and Vision Research. Ze werden ook goedgekeurd door de Michigan State University Institutional Animal Care and Use Committee. Wild-type en CrxRdy / + katten uit een kolonie katten die worden onderhouden aan de Michigan State University werden gebruikt in deze studie. Dieren werden gehuisvest onder 12 uur: 12 uur licht-donker c…

Representative Results

Deze procedure maakt de succesvolle en reproduceerbare implantatie van hPSC-afgeleide retinale organoïden mogelijk in de subretinale ruimte van een groot oogdiermodel (hier gedemonstreerd aan de hand van 2 voorbeelden: wild-type katten met gezonde fotoreceptoren (PR’s) en CrxRdy / + katten met degenererende PR’s en netvlies). Bereid met behulp van de stappen in figuur 1 de van hPSC afgeleide retinale organoïden voor en laad deze in de borosilicaatglazen canule …

Discussion

Implantatie van hPSC-afgeleid retinaal weefsel (retinale organoïden) in de subretinale ruimte is een veelbelovende experimentele benadering voor het herstellen van het gezichtsvermogen voor retinale degeneratieve ziekten in een laat stadium veroorzaakt door PR-celdood (ernstige of terminale blindheid). De gepresenteerde aanpak bouwt voort op een eerder ontwikkelde en met succes geteste experimentele therapie op basis van subretinale transplantatie van een stuk menselijk foetaal netvliesweefsel23,24,25<…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dit werk werd gefinancierd door NEI Fast-track SBIR-subsidie R44-EY027654-01A1 en SBIR-subsidie 3 R44 EY 027654 – 02 S1 (I.O.N., Lineage Cell Therapeutics; Dr. Petersen-Jones is een co-PI). De auteurs willen mevrouw Janice Querubin (MSU RATTS) bedanken voor haar hulp bij anesthesie en algemene zorg voor de dieren die in deze studie zijn opgenomen, evenals hulp bij chirurgische instelling en voorbereiding / sterilisatie van instrumenten. De auteurs willen Dr. Paige Winkler bedanken voor de hulp bij het ontvangen van de organoïden en het plaatsen ervan in media op de dag voorafgaand aan de implantatie en voor de hulp op de dag van de implantatie. De auteurs zijn ook de heer Randy Garchar (LCTX) dankbaar voor het ijverig verzenden van retinale organoïden, het assembleren van de verzender en het downloaden van temperatuur- en G-stress-records na elke zending. Dit werk werd uitgevoerd terwijl auteur Igor Nasonkin in dienst was van Biotime (nu Lineage).

Materials

0.22 µm pore syringe filter with PES membrane Cameo NA can be found by various suppliers
23G subretinal injector with extendable 41 G cannula DORC 1270.EXT
250 µL hamilton gas tight luer lock syringe Hamilton NA can be found by various suppliers
6-0 Silk suture Ethicon 707G
6-0/7-0 polyglactin suture Ethicon J570G
Acepromazine maleate 500mg/5mL (Aceproject) Henry Schein Animal Health NA can be found by various suppliers
Buprenorphine 0.3 mg/mL Par Pharmaceutical NA can be found by various suppliers
cSLO + SD-OCT Heidelberg Engineering Spectralis HRA+ OCT
Cyclosporine Novartis NA can be found by various suppliers
Dexamethasone 2mg/mL (Azium) Vetone NA can be found by various suppliers
Doxycyline 25mg/5mL Cipla NA can be found by various suppliers
Fatal Plus solution (pentobarnital solution) Vortech NA can be found by various suppliers
Gentamicin 20mg/2mL Hospira NA can be found by various suppliers
Glass capillary (Thin-Wall Single-Barrel Standard Borosilicate (Schott Duran) Glass Tubing World Precision Instruments TW150-4
Methylprednisolone actetate 40 mg/mL Pfizer NA can be found by various suppliers
Microscope Zeiss NA
OCT medium (Tissue-Tek O.C.T. Compound) Sakura 4583
Olympic Vac-Pac Size 23 Natus NA can be found by various suppliers
Paraformaldehyde 16% solution EMS 15719
Phenylephrine Hydrochloride 10% Ophthalmic Solution Akorn NA can be found by various suppliers
Prednisolone 15mg/5mL Akorn NA can be found by various suppliers
Propofol 5000mg/50mL (10 mg/mL) (PropoFlo28) Zoetis NA can be found by various suppliers
RetCam II video fundus camera Clarity Medical Systems NA can be found by various suppliers
Triamcinolone 400mg/10 mL (Kenalog-40) Bristol -Myers Squibb Company NA can be found by various suppliers
Tropicamide 1% ophthalmic solution Akorn NA can be found by various suppliers
Vitrectomy 23G port Alcon Accurus systems
Vitrectomy machine Alcon Accurus systems
Vitreo-retinal vertical 80° scissors with squeeze handle Frimen FT170206T
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Veleri, S., et al. Biology and therapy of inherited retinal degenerative disease: insights from mouse models. Disease Models and Mechanisms. 8 (2), 109-129 (2015).
  2. Dias, M. F., et al. Molecular genetics and emerging therapies for retinitis pigmentosa: Basic research and clinical perspectives. Progress in Retinal and Eye Research. 63, 107-131 (2018).
  3. Petersen-Jones, S. M., et al. Patients and animal models of CNGbeta1-deficient retinitis pigmentosa support gene augmentation approach. The Journal of Clinical Investigation. 128 (1), 190-206 (2018).
  4. Winkler, P. A., et al. A large animal model for CNGB1 autosomal recessive retinitis pigmentosa. PLoS One. 8 (8), 72229 (2013).
  5. Occelli, L. M., Tran, N. M., Narfstrom, K., Chen, S., Petersen-Jones, S. M. CrxRdy Cat: A large animal model for CRX-associated leber congenital amaurosis. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (8), 3780-3792 (2016).
  6. Mowat, F. M., et al. Early-onset progressive degeneration of the area centralis in RPE65-deficient dogs. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 58 (7), 3268-3277 (2017).
  7. Occelli, L. M., et al. Gene supplementation rescues rod function and preserves photoreceptor and retinal morphology in dogs, leading the way towards treating human PDE6A-retinitis pigmentosa. Human Gene Therapy. 28 (12), 1189-1201 (2017).
  8. Eckhorn, R., et al. Visual resolution with retinal implants estimated from recordings in cat visual cortex. Vision Research. 46 (17), 2675-2690 (2006).
  9. Pardue, M. T., et al. Status of the feline retina 5 years after subretinal implantation. Journal of Rehabilitation Research and Development. 43 (6), 723-732 (2006).
  10. Chow, A. Y., et al. Subretinal implantation of semiconductor-based photodiodes: durability of novel implant designs. Journal of Rehabilitation Research and Development. 39 (3), 313-321 (2002).
  11. Volker, M., et al. In vivo assessment of subretinally implanted microphotodiode arrays in cats by optical coherence tomography and fluorescein angiography. Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 242 (9), 792-799 (2004).
  12. Chow, A. Y., et al. Implantation of silicon chip microphotodiode arrays into the cat subretinal space. Institute of Electrical and Electronics Engineering Transactions on Neural Systems and Rehabilitation Engineering. 9 (1), 86-95 (2001).
  13. Sachs, H. G., et al. Subretinal implantation and testing of polyimide film electrodes in cats. Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 243 (5), 464-468 (2005).
  14. Villalobos, J., et al. A wide-field suprachoroidal retinal prosthesis is stable and well tolerated following chronic implantation. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 54 (5), 3751-3762 (2013).
  15. Bragadottir, R., Narfstrom, K. Lens sparing pars plana vitrectomy and retinal transplantation in cats. Veterinary Ophthalmology. 6 (2), 135-139 (2003).
  16. Narfstrom, K., Holland Deckman, K., Menotti-Raymond, M. The domestic cat as a large animal model for characterization of disease and therapeutic intervention in hereditary retinal blindness. Journal of Ophthalmology. , 906943 (2011).
  17. Seiler, M. J., et al. Functional and structural assessment of retinal sheet allograft transplantation in feline hereditary retinal degeneration. Veterinary Ophthalmology. 12 (3), 158-169 (2009).
  18. Aramant, R. B., Seiler, M. J. Transplanted sheets of human retina and retinal pigment epithelium develop normally in nude rats. Experimental Eye Research. 75 (2), 115-125 (2002).
  19. Lin, B., McLelland, B. T., Mathur, A., Aramant, R. B., Seiler, M. J. Sheets of human retinal progenitor transplants improve vision in rats with severe retinal degeneration. Experimental Eye Research. 174, 13-28 (2018).
  20. Seiler, M. J., Aramant, R. B. Cell replacement and visual restoration by retinal sheet transplants. Progress in Retinal and Eye Research. 31 (6), 661-687 (2012).
  21. Seiler, M. J., et al. Vision recovery and connectivity by fetal retinal sheet transplantation in an immunodeficient retinal degenerate rat model. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 58 (1), 614-630 (2017).
  22. Lorach, H., et al. Transplantation of mature photoreceptors in rodents with retinal degeneration. Translational Vision Science and Technology. 8 (3), 30 (2019).
  23. Radtke, N. D., et al. Vision improvement in retinal degeneration patients by implantation of retina together with retinal pigment epithelium. American Journal of Ophthalmology. 146 (2), 172-182 (2008).
  24. Radtke, N. D., Aramant, R. B., Seiler, M. J., Petry, H. M., Pidwell, D. Vision change after sheet transplant of fetal retina with retinal pigment epithelium to a patient with retinitis pigmentosa. Archives of Ophthalmology. 122 (8), 1159-1165 (2004).
  25. Radtke, N. D., Seiler, M. J., Aramant, R. B., Petry, H. M., Pidwell, D. J. Transplantation of intact sheets of fetal neural retina with its retinal pigment epithelium in retinitis pigmentosa patients. American Journal of Ophthalmology. 133 (4), 544-550 (2002).
  26. Lorach, H., Palanker, E. Retinal prostheses: High-resolution photovoltaic implants. Medical Science (Paris). 31 (10), 830-831 (2015).
  27. Mathieson, K., et al. Photovoltaic retinal prosthesis with high pixel density. Nature Photonics. 6 (6), 391-397 (2012).
  28. Banin, E., et al. Retinal incorporation and differentiation of neural precursors derived from human embryonic stem cells. Stem Cells. 24 (2), 246-257 (2006).
  29. Hambright, D., et al. Long-term survival and differentiation of retinal neurons derived from human embryonic stem cell lines in un-immunosuppressed mouse retina. Molecular Vision. 18, 920-936 (2012).
  30. Lamba, D. A., Gust, J., Reh, T. A. Transplantation of human embryonic stem cell-derived photoreceptors restores some visual function in Crx-deficient mice. Cell Stem Cell. 4 (1), 73-79 (2009).
  31. Singh, R. K., Occelli, L. M., Binette, F., Petersen-Jones, S. M., Nasonkin, I. O. Transplantation of human embryonic stem cell-derived retinal tissue in the subretinal space of the cat eye. Stem Cells and Development. 28 (17), 1151-1166 (2019).
  32. McLelland, B. T., et al. Transplanted hESC-derived retina organoid sheets differentiate, integrate, and improve visual function in retinal degenerate rats. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 59 (6), 2586-2603 (2018).
  33. Assawachananont, J., et al. Transplantation of embryonic and induced pluripotent stem cell-derived 3D retinal sheets into retinal degenerative mice. Stem Cell Reports. 2 (5), 662-674 (2014).
  34. Eiraku, M., et al. Self-organizing optic-cup morphogenesis in three-dimensional culture. Nature. 472 (7341), 51-56 (2011).
  35. Nakano, T., et al. Self-formation of optic cups and storable stratified neural retina from human ESCs. Cell Stem Cell. 10 (6), 771-785 (2012).
  36. Singh, R. K., et al. Characterization of three-dimensional retinal tissue derived from human embryonic stem cells in adherent monolayer cultures. Stem Cells and Development. 24 (23), 2778-2795 (2015).
  37. Wahlin, K. J., et al. Photoreceptor outer segment-like structures in long-term 3D retinas from human pluripotent stem cells. Scientific Reports. 7 (1), 766 (2017).
  38. Zhong, X., et al. Generation of three-dimensional retinal tissue with functional photoreceptors from human iPSCs. Nature Communications. 5, 4047 (2014).
  39. Capowski, E. E., et al. Reproducibility and staging of 3D human retinal organoids across multiple pluripotent stem cell lines. Development. 146 (1), 171686 (2019).
  40. Meyer, J. S., et al. Modeling early retinal development with human embryonic and induced pluripotent stem cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (39), 16698-16703 (2009).
  41. Shirai, H., et al. Transplantation of human embryonic stem cell-derived retinal tissue in two primate models of retinal degeneration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (1), 81-90 (2016).
  42. Mandai, M., et al. iPSC-derived retina transplants improve vision in rd1 end-stage retinal-degeneration mice. Stem Cell Reports. 8 (4), 1112-1113 (2017).
  43. Scruggs, B. A., et al. Optimizing donor cellular dissociation and subretinal injection parameters for stem cell-based treatments. Stem Cells Translational Medicine. 8 (8), 797-809 (2019).
  44. Singh, R., et al. Pluripotent stem cells for retinal tissue engineering: Current status and future prospects. Stem Cell Reviews and Reports. 14 (4), 463-483 (2018).
  45. Sharma, R., et al. Clinical-grade stem cell-derived retinal pigment epithelium patch rescues retinal degeneration in rodents and pigs. Science Translational Medicine. 11, 475 (2019).
  46. Ghosh, F., Engelsberg, K., English, R. V., Petters, R. M. Long-term neuroretinal full-thickness transplants in a large animal model of severe retinitis pigmentosa. Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 245 (6), 835-846 (2007).
  47. Koss, M. J., et al. Subretinal implantation of a monolayer of human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium: a feasibility and safety study in Yucatan minipigs. Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 254 (8), 1553-1565 (2016).
  48. da Cruz, L., et al. Phase 1 clinical study of an embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium patch in age-related macular degeneration. Nature Biotechnology. 36 (4), 328-337 (2018).
  49. Kashani, A. H., et al. Subretinal implantation of a human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium monolayer in a porcine model. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1185, 569-574 (2019).
  50. Kashani, A. H., et al. Surgical method for implantation of a biosynthetic retinal pigment epithelium monolayer for geographic atrophy: Experience from a Phase 1/2a study. Ophthalmology. Retina. 4 (3), 264-273 (2020).
  51. Petersen-Jones, S. M., Komaromy, A. M. Dog models for blinding inherited retinal dystrophies. Human Gene Therapy. Clinical Development. 26 (1), 15-26 (2015).
  52. Beltran, W. A., et al. Canine retina has a primate fovea-like bouquet of cone photoreceptors which is affected by inherited macular degenerations. PLoS One. 9 (3), 90390 (2014).
  53. Nasonkin, I. O., et al. Transplantation of human embryonic stem cell derived retinal tissue in the subretinal space of immunodeficient rats with retinal degeneration (RD). Investigative Ophthalmology and Visual Science. 60 (9), 3109 (2019).
  54. Singh, R. K., et al. Development of a protocol for maintaining viability while shipping organoid-derived retinal tissue. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 14 (2), 388-394 (2020).
  55. Petersen-Jones, S. M. Drug and gene therapy of hereditary retinal disease in dog and cat models. Drug Discovery Today. Disease Models. 10 (4), 215-223 (2013).
  56. Machemer, R., Buettner, H., Norton, E., Parel, J. M. Vitrectomy: a pars plana approach. Transactions – American Academy of Ophthalmology and Otolaryngology. 75 (4), 813-820 (1972).
  57. Machemer, R., Norton, E. W. Vitrectomy, a pars plana approach. II. Clinical experience. Modern Problems in Ophthalmology. 10, 178-185 (1972).
  58. Machemer, R., Parel, J., Norton, E. Vitrectomy: a pars plana approach. Technical improvements and further results. Transactions – American Academy of Ophthalmology and Otolaryngology. 76 (2), 462-466 (1972).
  59. O’Malley, C., Heintz, R. M. Vitrectomy with an alternative instrument system. Annals of Ophthalmology. 7 (4), 585-588 (1975).
  60. Machemer, R., Hickingbotham, D. The three-port microcannular system for closed vitrectomy. American Journal of Ophthalmology. 100 (4), 590-592 (1985).
  61. Petersen-Jones, S. M., et al. AAV retinal transduction in a large animal model species: comparison of a self-complementary AAV2/5 with a single-stranded AAV2/5 vector. Molecular Vision. 15, 1835-1842 (2009).
  62. Annear, M. J., et al. Successful gene therapy in older Rpe65-deficient dogs following subretinal injection of an adeno-associated vector expressing RPE65. Human Gene Therapy. 24 (10), 883-893 (2013).
  63. Beltran, W. A., et al. Optimization of retinal gene therapy for X-linked retinitis pigmentosa due to RPGR mutations. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 25 (8), 1866-1880 (2017).
  64. Bainbridge, J. W. B., et al. Long-term effect of gene therapy on Leber’s Congenital Amaurosis. The New England Journal of Medicine. 372 (20), 1887-1897 (2015).

Tags

Subretinal TransplantationFeline Large Animal ModelRetinal DegenerationAge-related Macular DegenerationRetinitis PigmentosaLeber Congenital AmaurosisLateral CanthotomyBarraquer Eyelid SpeculumCastroviejo Corneal Tying ForcepsMosquito HemostatSilk SuturesTenon’s CapsuleSclerotomyPolyglactin Sutures
check_url/fr/61683?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citer Cet Article
Occelli, L. M., Marinho, F., Singh, R. K., Binette, F., Nasonkin, I. O., Petersen-Jones, S. M. Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model. J. Vis. Exp. (174), e61683, doi:10.3791/61683 (2021).
Télécharger la Citation
Réimpressions et Autorisations

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image