이 기사는 살아있는 세포의 원형질막에서 분자 확산을 측정하기 위해 스팟 변이 형광 상관 분광법 (svFCS) 현미경을 구축하는 방법에 대한 프로토콜을 제시하는 것을 목표로합니다.
원형질막 조직과 관련된 것을 포함하여 살아있는 세포의 동적 생물학적 과정은 각각 나노미터에서 마이크로미터 및 마이크로초에서 분에 이르는 다양한 공간적 및 시간적 스케일에서 발생한다. 이러한 광범위한 생물학적 과정은 기존의 현미경 검사 접근법에 도전합니다. 여기에서는 맞춤형 클래식 형광 현미경을 사용하여 스팟 변동 형광 상관 분광법 (svFCS) 측정을 구현하는 절차를 자세히 설명합니다. 이 프로토콜에는 svFCS 설정의 특정 성능 검사 및 생리적 조건 하에서 살아있는 세포의 원형질막에서 svFCS에 의한 분자 확산 측정에 대한 지침이 포함됩니다. 또한, 우리는 콜레스테롤 산화 효소 처리에 의해 원형질막 뗏목 나노 도메인을 파괴하는 절차를 제공하고 svFCS 분석에 의해 원형질막의 측면 조직의 이러한 변화가 어떻게 밝혀 질 수 있는지 보여줍니다. 결론적으로, 이러한 형광 기반 방법은 적절한 공간 및 시간적 분해능을 갖는 원형질막의 측방향 조직에 대한 전례 없는 세부사항을 제공할 수 있다.
원형질막 조직의 복잡성
세포막 조직에 대한 현재의 이해는 몇 가지 측면1을 고려해야합니다. 첫째, 복합 지질 조성은 세포 유형뿐만 아니라 단일 세포 (막 소기관 / 원형질막) 내에서도 다양합니다. 게다가, 관련 또는 내재적 막 단백질은 대부분 동적 다량체 복합체로 조직되며, 막의 외부로 연장되는 큰 도메인이 막횡단 도메인 단독보다 훨씬 큰 면적을 차지한다. 더욱이, 막-관련 단백질은 단백질 기능을 조절하는데 역할을 하는 특이적 지질-결합 또는 지질-상호작용 능력을 나타낸다. 이들은 지질의 국소 조성 및 접근성에 직접적으로 의존한다2.
마지막으로, 막 단백질의 본질적인 비대칭 구조와 지질의 분포로 인해 두 막 전단지 사이에서 상당한 수준의 비대칭이 관찰됩니다. 실제로, 합성과 가수분해 사이의 지질 대사 균형은 전단지 사이의 지질 플립 플롭과 결합하여 그러한 비대칭 분포를 생성합니다. 이중층을 가로지르는 임의의 수송은 멤브레인의 소수성 내부를 통해 극성 헤드 그룹을 이동시키는 데 필요한 자유 에너지에 의해 제약되기 때문에, 그것은 일반적으로 선택적 수송기에 의해 보조된다. 각 세포 유형에 대해 비대칭은 단단히 유지되는 경향이 있습니다. 전체적으로, 이들 인자는 원형질막(3,4)의 측방향 불균질성 또는 구획화에 기여한다.
우리는 이중층 내부 및 전반에 걸친 고유 한 분자 확산을 고려하여 원형질막의 이러한 표현을 풍부하게하며, 이는 열 번째에서 수백 나노 미터 및 마이크로 초에서 초까지의 규모로 동적 측면 이질성에 기여합니다. 예를 들어, 지질 의존성 막 나노 도메인 – 콜레스테롤로 정의 된 소위 지질 뗏목과 스핑고지질이 풍부한 신호 전달 플랫폼 -은 원형질막 5,6의 구획화에 기여합니다. 그러나, 막 조직에 대한 현재의 견해는 지질 뗏목에만 국한되지 않는다. 막 나노도메인은 조성, 기원 및 기능에서 더 복잡하고 이질적이다. 여전히, 원형질막에서의 그들의 존재는 긴밀하게 조정되어야 하고, 단백질과 지질 사이의 동적 상호작용은 막 나노 도메인 1,3,7,8의 공간 분포 및 화학적 변형에 중요한 것으로 보인다.
svFCS 원리와 원형질막의 조직을 조사하기 위한 그것의 응용
주로 생물물리학적 기술을 통해 막 도메인의 분석에서 많은 진전이 이루어졌지만, 원형질막의 국소 조직을 지시하는 결정인자는 적절한 공간적, 시간적 분해능으로 정제될 필요가 있다. 개별 분자 추적에 기반한 결정인자는 우수한 공간 정밀도를 제공하고다양한 동작 모드의 특성화를 허용하지만 9,10,11,12의 다양한 모드의 특성화를 허용하지만 고전적인 낮은 카메라 프레임 속도로 제한된 시간 해상도를 가지며 상당한 수의 궤적을 기록하기 위해 더 많은 실험적 노력이 필요합니다. 대안적으로, 막 성분의 확산 계수는 광표백 후 형광 회수 (FRAP)13 또는 형광 상관 분광법 (FCS)14에 의해 평가될 수 있다. 후자는 주로 높은 감도와 선택성, 현미경 탐지량, 낮은 침습성 및 넓은 동적 범위15로 인해 더 많은 주목을 받았습니다.
FCS의 개념적 기초는 약 50 년 전16,17 년 전에 Magde와 동료들에 의해 소개되었습니다. 이는 높은 시간적 분해능(μs에서 s까지)을 갖는 형광 방출의 변동을 기록하는 것에 기초한다18. 현대 버전에서, 살아있는 세포에서의 측정은 관심 영역 내에 위치된 작은 공초점 여기 부피 (~0.3 펨톨리터)에 의해 수행된다 (예를 들어, 원형질막에서); 관찰 부피의 안팎으로 들어가는 형광 분자를 확산시킴으로써 생성된 형광 신호는 매우 높은 시간적 분해능(즉, 검출기 상의 각 광자의 도착 시간)으로 수집된다. 이어서, 신호는 자기상관 함수(ACF)를 생성하기 위해 계산되고, 이로부터 분자가 초점 부피 내에 머무르는 평균 시간td(확산 시간)가 추출되고, 입자의 평균 수와 함께, ACF의 진폭에 반비례하는 관찰 부피에 존재하는 (N)이 추출된다. 이 마지막 파라미터는 관찰 부피 내의 분자 농도에 대한 유용한 정보일 수 있다.
그 이후로, 바이오 포토닉스에서 빠르게 발전하는 계측 덕분에 점점 더 많은 FCS 양식이 구현되어 살아있는 시스템에서 발생하는 역동적 인 현상에 대한 설명이 가능해졌습니다. 그럼에도 불구하고, 분자 종은 확산 계수 값의 더 겹치는 분포를 경험할 것이며, 이는 일반적으로 분자가 시간19에서 비선형 관계로 확산되는 변칙적 확산 특성에 의해 반영되며,이 변칙적 인 하위 확산의 생물학적 의미를 식별하는 데 어려움이 있습니다. 과거에는 FRAP에 의한 분자 확산을 단지 하나의 영역이 아닌 다양한 크기의 영역으로부터 기록함으로써 이러한 어려움이 다소 극복되어 추가적인 공간 정보를 제공하였다. 이것은 예를 들어, 막 마이크로도메인20,21,22의 개념화를 가능하게 하였다.
FCS 측정(즉, 소위 스폿 변동 형광 상관 분광법(svFCS))에 대한 이 전략의 번역은 관찰의 초점 부피의 크기를 변화시킴으로써 확립되었고, 형광의 변동이 상이한 공간 스케일(23)에 기록될 수 있게 하였다. 따라서, svFCS 접근법은 연구된 분자의 분자 확산 모드 및 막 분할의 유형(단리된 대 인접 도메인(24))의 확인 및 결정을 허용하는 간접적인 공간 정보를 제공한다. 확산 시간td를 허리(ω) 값에 의해 정의된 다양한 공간 스케일의 함수로서 플로팅함으로써, 이 경우23,25의 검출 빔 반경 크기에 대응하나, 주어진 생리학적 조건에서 주어진 분자의 확산 법칙을 특성화할 수 있다. 따라서, svFCS는 시간 영역(26)에서 단일 입자 추적에 대한 완벽한 아날로그이다. 브라운 확산 제약 하에서, 확산 시간td와 허리 ω 사이의 엄격한 선형 관계를 기대해야 한다(그림 1)23,25. 이 계획으로부터의 확산 법칙의 편차의 기원은 세포 골격 메쉬 워크, 분자 우집, 나노 도메인에서의 동적 분할 또는 이들 및 기타 효과의 임의의 조합과 같은 비독점적 인 이유에 기인 할 수 있으며 (그림 1), 실험적으로 테스트 할 필요가 있습니다25.
여기에서는 처음부터 구축된 맞춤형 svFCS 광학 시스템을 매일 사용하는 데 필요한 모든 제어 체크포인트를 제공하며, 이는 실험적 접근 방식에 대한 이전 프로토콜 리뷰27,28을 보완합니다. 또한, 개념 증명으로서, 우리는 지질-래프트 나노도메인29에 국한된 것으로 알려진 원형질막 글리코실포스파티딜이노시톨-앵커드 단백질인 Thy1-GFP에 대한 svFCS 확산법(DL)의 확립을 위한 설정, 세포의 준비, 데이터 수집 및 분석의 교정에 관한 지침을 제공한다. 마지막으로, 우리는 콜레스테롤 옥시다제 처리에 의한 지질 – 뗏목 나노 도메인의 부분적 불안정화가 Thy1-GFP의 확산 특성에 어떻게 영향을 미치는지 보여줍니다. 또한 svFCS 설정을 처음부터 빌드하는 방법에 대한 자세한 설명은 보충 자료에 나와 있습니다.
여기에서는 FCS 확산법 분석 덕분에 살아있는 세포에서 원형질막 조직의 역학을 해독하는 강력한 실험 접근법 인 표준 형광 현미경에서 svFCS 모듈의 구현을 설명했습니다. 개념적으로, svFCS는 간단한 원리에 기초한다: 조명 영역(23)의 크기를 변화시키면서 시간 영역에서의 형광의 상관관계 측정. 이 전략은 현미경 측정에서 나노스코픽 정보를 추론하는 데 중요한 역할을 했으며, 이는 정상 상태(25) 및 생리적 과정 30,31,32,33에서 원형질막 조직에 기여하는 주요 물리화학적 요소를 해독하는 데 도움이 된다. 전체적으로, 이러한 svFCS 분석은 다양한 세포 유형에서 지질 의존성 나노 도메인의 존재와 다른 신호 전달 사건을 튜닝하는 데 직접적인 영향을 미친다는 것을 명확하게 보여줍니다.
이 프레임 워크 내에는 광자 예산을 최적화하고 광학 수차를 최소화하기 위해 svFCS 설정을 구축하는 동안 고려해야 할 몇 가지 광학적 측면이 있습니다. 따라서 svFCS 측정을 수행할 때 튜브 렌즈를 제거할 수 있는 현미경을 사용하는 것이 좋습니다. 또한, 단일 아이리스는 svFCS 설정에서 중요한 역할을 합니다: 목표물의 뒤쪽 조리개에서 빔 크기를 변경하여 효과적인 허리 크기(즉, 유효 여기 볼륨)를 직접 변경합니다. 빔 직경은 가장 작은 허리 크기(34)를 얻기 위해 객관적인 뒷동공에 맞아야 한다. 허리 크기를 조정하는 데 도움이되는이 옵션은 광자 예산의 최적화를 보장하고 구현하기 쉽습니다. 마지막으로, 최소 수의 광학 부품이 광 경로를 따라 사용됩니다. 시스템이 덜 복잡할수록 손실되는 광자가 줄어 듭니다. 이러한 모든 옵션은 svFCS 실험의 견고성을 크게 향상시킵니다.
프로토콜 자체와 관련하여 몇 가지 중요한 단계를 고려해야합니다. 가장 중요한 것은 성공적인 svFCS 측정에 중요한 광 경로의 적절한 정렬입니다 (프로토콜, 섹션 2). 이는 2 nM Rh6G 용액으로부터의 형광 신호를 분석함으로써 쉽게 확인할 수 있으며, 이는 300 μW 레이저 조명 하에서 ∼200 kHz이어야 한다. 모든 홍채를 열어야 하며 ACF는 중요한 진폭(일반적으로 G0~1.5–2.0)을 가져야 합니다. 또 다른 중요한 점은 세포와 svFCS 분석을위한 준비에 관한 것입니다 (프로토콜, 섹션 4-8). 그들의 밀도는 관찰 될 분리 된 세포가 분석에 사용할 수 있도록 적응되어야합니다. 비부착성 세포는 폴리-L-라이신 용액을 사용하여 챔버형 커버글라스 상에 고정화되어야 한다. 세포 표지로부터의 형광 신호는 너무 강하지 않아야하며, 또는 맞추기 어려운 매우 평평한 ACF를 초래할 것이며, 적합 매개 변수는 중요한 오류로 부담됩니다. 또한, 세포의 비균질한 표지 및 형광 응집체는 svFCS 측정을 해석하기가 매우 어렵게 만든다. 마지막으로, 콜레스테롤 산화 효소 처리는 세포 생존율에 영향을 미치며, svFCS 분석은 치료 후 한 시간을 초과해서는 안됩니다. 또한 지지체에 부착되지 않기 때문에 상부 원형질막으로부터의 형광 변동을 기록하는 것이 더 좋으며, 지지체와의 물리적 상호 작용으로 인해 분자의 확산이 방해받을 위험이 없습니다.
svFCS 기술은 검출량을 조정하기 위한 양식의 다양성 때문에 다양한 접근법에서 사용하기 위한 충분한 진보가 있었고, 살아있는 세포에서 다양한 생물학적 과정을 연구할 수 있게 되었다. 여기 부피의 크기를 조정하는 대안은 가변 빔 확장기(35)를 사용하는 것이다. 또한, z 방향(36)을 따라 원형질막의 인터셉트로부터 형광 신호를 기록함으로써 조명 영역의 크기를 간단하게 변조할 수도 있다. 이것은 확산 법칙37,38을 도출하기 위해 이론적 틀이 개발 된 표준 공초점 현미경에서 수행 할 수 있습니다.
svFCS 방법이 원형질막의 불균질한 측면 조직의 특성화에 필요한 시공간 분해능을 제공하지만, 기하학적 감금 모드는 상호 배타적이지 않습니다. 한 방향 또는 다른 방향에서 t0의 편차는 배타적으로 지배적인 감금 모드(25)를 드러낸다. 더욱이, 본 svFCS 방법의 또 다른 중요한 한계는 고전적인 광학 회절 한계 (∼200 nm)로부터 기인한다. 이것은 의심할 여지없이 세포 원형질막 내에 분자를 가두는 도메인보다 더 크다. 따라서, 감금의 분석은 확산 법칙으로부터 외삽된 t0 값으로부터 추론된다.
이러한 단점은 대체 방법을 구현함으로써 극복되었습니다. 초기에, 나노애퍼처로 뚫린 금속 필름을 사용하는 것은 매우 작은 막 영역(즉, 75nm와 250nm 사이에서 변하는 반경의 단일 나노메트릭 개구들의 광학 회절 한계 이하)39를 조명할 수 있는 가능성을 제공하였다. 단리된 도메인 조직에 대한 이론적 확산 법칙으로부터 예측된 전이 정권이 따라서 보고되었고, 나노메트릭 멤브레인 이질성의 특징적인 크기의 정제와 지질 의존성 나노도메인39에 의해 점유된 표면적의 정량적 추정을 허용하였다. 대안적으로, 나노메트릭 조명은 또한 근거리 스캐닝 광학 현미경(40) 또는 평면 광학 나노안테나(41)를 사용하여 개발되었다. 보다 최근에, 자극 방출 고갈(STED)과 FCS의 결합은 매우 높은 공간 분해능으로 확산 법칙을 문서화하는 강력하고 민감한 도구를 제공하였다. 이 STED-FCS는 단기간 내에 발생하는 나노스케일의 분자 확산 특성에 대한 액세스를 허용하여, 원형질막(42,43)에서 지질 프로브의 동적 조직에 대한 연구를 가능하게 한다. 그러나, STED 공정에서 형광의 불완전한 억제는 FCS에서의 자기상관곡선의 분석에 도전한다.
이러한 어려움을 극복하기 위해 새로운 피팅 모델이 개발되어 확산 시간 및 평균 분자 수 측정(44)의 정확도가 향상되었다. 마지막으로, 원형질막에서의 느린 분자 확산을 위해, svFCS 원리는 이미지 상관 분광법(45)에 의해 기록된 데이터에 적용될 수 있다. 최근에, 원자력 현미경 (AFM)과 이미징 총 내부 반사-FCS (ITIR-FCS)의 결합이 나노 도메인(46)의 고밀도로 인해 원형질막, 특히 퍼콜레이션 임계 막 구성 근처에서 분자 확산을 방해하는 메커니즘의 성질의 개선에 기여한다는 것이 입증되었다.
결론적으로, svFCS에 의한 확산 법칙을 확립하는 것은 동적 집단 지질 및 막 단백질의 연관성에 의해 생성 된 국소 이질성을 추론하기위한 실험 증거를 제공했다. Wohland와 동료(46)가 언급 한 바와 같이, “FCS 확산 법 분석은 동적 정보로부터 해결 한계 이하의 구조적 및 조직적 특징을 추론하는 데 유용한 도구로 남아 있습니다.” 그럼에도 불구하고, 우리는 원형질막에서 발생하는 분자 사건의 역학에 대한 더 나은 이해를 허용해야하는 확산 법칙의 해석을 개선하기위한 새로운 모델을 개발해야합니다.
The authors have nothing to disclose.
SB, SM 및 DM은 CNRS, Inserm 및 Aix-Marseille University의 기관 자금 지원과 프랑스 국립 연구 기관 (ANR-17-CE15-0032-01 및 ANR-18-CE15-0021-02)과 프랑스 “Investissement d’Avenir”(ANR-10-INBS-04 France-BioImaging, ANR-11-LABX-054 labex INFORM)의 프로그램 보조금으로 지원되었습니다. KW는 생명 공학 및 나노 기술 분야에서 학제 간 환경 박사 과정 인 “BioTechNan”을 인정합니다. EB는 프로젝트 번호 2016/21/D/NZ1/00285에 따라 폴란드 국립 과학 센터 (NCN)와 프랑스 정부 및 폴란드 프랑스 대사관의 재정 지원을 인정합니다. MŁ는 폴란드 개발부 (CBR POIR.02.01.00-00-0159/15-00/19)와 국립 연구 개발 센터 (Innochem POIR.01.02.00-00-0064/17)의 재정 지원을 인정합니다. TT는 프로젝트 번호 2016/21/B/NZ3/00343에 따라 폴란드 국립 과학 센터 (NCN)와 브로츠와프 생명 공학 센터 (KNOW)의 재정 지원을 인정합니다.
Aligment tool | Spanner Wrench for SM1-Threaded Retaining Rings | Thorlabs | SPW602 |
Avalanche Photodiode and Single Photon Counting Module (SPCM) | Single-Photon Counting Module, Avalanche Photodiode | Excelitas | SPCM-AQRH-15 |
BNC 50 Ω plug to 50 Ω plug lead 2 m | RS Components | 742-4315 | |
Coaxial cable 415 Cinch Connectors, RG-316, 50 Ω With connector, 1.22 m, RoHS2 | RS Components | 885-8172 | |
Tee 50Ω RF Adapter BNC Plug to BNC Socket 0 → 1GHz | RS Components | 546-4948 | |
Brennenstuhl 2.5 m, 8 Socket Type E – French Extension Lead, 230 V | RS Components | 768-5500 | |
Mascot, 6W Plug In Power Supply 5V dc, 1.2A, 1 Output Switched Mode Power Supply, Type C | RS Components | 452-8394 | |
Crystek CCSMACL-MC-24 Reference Oscillator Power Cable RF Adapter | RS Components | 792-4079 | |
Fluorescence filtering | 535/70 ET Bandpass, AOI 0° Chroma Diameter 25 mm | AHF filter | F47-539 |
Laser Beamsplitter zt488 RDC, AOI 45° Chroma 25.5 x 36 x 1 mm | AHF filter | F43-088 | |
496/LP BrightLine HC Longpass Filter, AOI 0° Chroma Diameter 25 | AHF filter | F37-496 | |
Hardware correlator | 80 MHz Digital Correlator | Correlator.com | Flex02-12D |
Laser | LASER LASOS LDM-XT fiber coupled, 488 nm, 65 mW | Lasos | BLD-XT 488100 |
Laser safety | High-Performance Black Masking Tape, 1" x 180' (25 mm x 55 m) Roll | Thorlabs | T743-2.0 |
Lens Tissues, 25 Sheets per Booklet, 5 Booklets | Thorlabs | MC-5 | |
Laser Safety Glasses, Light Orange Lenses, 48% Visible Light Transmission | Thorlabs | LG3B | |
Microscope | Zeiss Axiovert 200M Motorized Inverted Fluorescence Microscope Fine and coarse focusing, reflector turret rotation, objective nosepiece rotation, switching camera ports, and internal light shutters |
Carl Zeiss | |
C-Apochromat 40x/1,2 W Korr.selected for FCS (D=0.14-0.19 mm) (WD=0.28 mm at D=0.17 mm), UV-VIS-IR |
Carl Zeiss | 421767-9971-711 | |
Adapter W0.8 / M27x0.75 H "5" | Carl Zeiss | 000000-1698-345 | |
Middle ring W0.8 – W0.8 H "5" | Carl Zeiss | 000000-1698-347 | |
Optical path | D25.4mm Mirror, Protected Silver | Thorlabs | PF10-03-P01 |
D25.4mm, F=60.0.mm, Visible Achromat | Thorlabs | AC254-060-A | |
D25.4mm, F=35.0.mm, Visible Achromat | Thorlabs | AC254-035-A | |
25 µm mounted pinhole | Thorlabs | P25S I | |
25.4mm Mounted Zero, Order 1/2 Waveplate 488 nm | Thorlabs | WPH10M-488 (HWP) | |
20mm Polarizing Beamsplitter Cube 420-680 nm | Thorlabs | PBS201 | |
Rotation Stage 56 mm x 26 mm Threaded ID | Thorlabs | RSP1/M | |
52 mm x 52 mm Kinematic Platform Mount | Thorlabs | KM100B/M | |
Adjustable Prism Clamp | Thorlabs | PM3/M | |
Beam block – active area 19 mm x 38 mm | Thorlabs | LB1/M | |
Iris Diaphragm 1 mm to 25 mm Aperture | Thorlabs | ID25/M | |
Left-Handed Kinematic Cylindrical Lens Mount | Thorlabs | KM100CL | |
1" Optic Holder, M4 Tap | Thorlabs | MFF101/M | |
1" Stackable Lens Tube | Thorlabs | SM1L03 | |
Stackable Lens Mount for 1" optic-usable depth ½ | Thorlabs | SM1L05 | |
Stackable Lens Mount For 1"Optic-usable Depth 2" | Thorlabs | SM1L20 | |
Small Optical Rails 600mm, metric | Thorlabs | RLA600/M | |
Small Optical Rails 75mm, metric | Thorlabs | RLA075/M | |
Small Optical Rails 150mm, metric | Thorlabs | RLA150/M | |
Rail Carrier, Counterbored Hole 1"x 1" | Thorlabs | RC1 | |
Rail Carrier, Perpendicular Dovetail | Thorlabs | RC3 | |
High Precision Translating Lens Mount for 1 inch | Thorlabs | LM1XY/M | |
½ " (12mm) Dovetail Translation Stage | Thorlabs | DT12/M | |
Rail Clamps | Thorlabs | CL6 | |
Metric XYZ Translation Stage (Includes PT102) | Thorlabs | PT3/M | |
Black Rubberized Fabric | Thorlabs | BK5 | |
Ball Driver kit/ 6 tools | Thorlabs | BD-KIT/M | |
Adapter with External M6 x 1.0 Threads and External M4 x 0.7 Threads | Thorlabs | AP6M4M | |
Mounting Base, 25 mm x 58 mm x 10 mm, 5 Pack | Thorlabs | BA1S/M-P5 | |
Lens Mount for 25.4mm optic | Thorlabs | LMR1/M | |
SM1 FC/APC Adapter | Thorlabs | SM1FCA | |
Kinematic Mirror Mount For 1 inch Optics | Thorlabs | KM100 | |
Silicon Power Head, 400-1100nm, 50mW | Thorlabs | S120C | |
12.7 mm Post Holders, Spring-Loaded Hex-Locking Thumbscrew, L=50 mm, 5 Pack |
Thorlabs | PH50/M-P5 | |
Post Holder with Spring-Loaded Hex-Locking Thumbscrew, L=20 mm | Thorlabs | PH20/M | |
12.7 mm x 50 mm Stainless Steel Optical Post, M4 Stud, M6-Tapped Hole, 5 Pack |
Thorlabs | TR50/M-P5 | |
12.7 mm x 75 mm Stainless Steel Optical Post, M4 Stud, M6-Tapped Hole, 5 Pack |
Thorlabs | TR75/M-P5 | |
USB Power and Energy Meter Interface | Thorlabs | PM100USB | |
12.7 mm x 30 mm Stainless Steel Optical Post, M4 Stud, M6-Tapped Hole |
Thorlabs | TR30/M | |
12.7 mm x 20 mm Stainless Steel Optical Post, M4 Stud, M6-Tapped Hole |
Thorlabs | TR20/M | |
750 mm long Structural Rail (detection box) | Thorlabs | XE25L750/M | |
350 mm long Structural Rail (detection box) | Thorlabs | XE25L350/M | |
Quick Corner Cube for 25 mm Rails | Thorlabs | XE25W3 | |
Right-Angle Bracket for 25 mm Rails | Thorlabs | XE25A90 | |
Black posterboard 20" x 30" (508 mm x 762 mm), 1/16" (1.6 mm) Thick, 5 Sheets | Thorlabs | TB5 | |
Hinge for 25 mm Rail Enclosures | Thorlabs | XE25H | |
Lid Stop for 25 mm Rail Enclosures | Thorlabs | XE25LS | |
M4 Cap Screw Kit | Thorlabs | HW-KIT1/M | |
M6 Cap Screw Kit and Hardware kit | Thorlabs | HW-KIT2/M | |
Table Clamp, L-Shape, 5 Pack | Thorlabs | CL5-P5 | |
SM1 Ring-Actuated Iris Diaphragm (Ø0.8 – Ø12 mm) | Thorlabs | SM1D12D | |
Ø1" SM1-Mounted Frosted Glass Alignment Disk w/Ø1 mm Hole | Thorlabs | DG10-1500-H1-MD | |
Honeycomb Optical Table Top, Standa | Standa | 1HB10-15-12 | |
Optical Table support, Standa | Standa | 1TS05-12-06-AR | |
Sample nano-positionning | Precision XYZ Nanopositioning | Physik Instrumente | PI P527-3.CD |
Digital Multi-Channel Piezo Co, 3 Channels, -30 to 130 V Sub- D Connector(s), Capacitive Sensors, |
Physik Instrumente | PI E727-3.CD | |
Temperature chamber | Zeiss 200M Inverted Microscope Incubator System MATT BLK | Digital Pixel | |
Dual Channel Microprocessor Temperature Controller | Digital Pixel | DP_MTC_2000_DUO | |
Two Vibration Free Heater Modules | Digital Pixel | DP_150_VF | |
PT100 Temperature Sensor | Digital Pixel | DP_P100_TS | |
Biological Reagents and Materials | |||
Cell culture and transfection | Cos7 cells | ATCC® | CRL-1651™ |
8- well Lab-Tek chambers | Thermo Fisher Scientific | 155411PK | |
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Thermo Fisher Scientific | 11965092 | |
Fetal bovine serum | Thermo Fisher Scientific | 16000044 | |
L-glutamine | Thermo Fisher Scientific | 25030081 | |
PBS buffer | Thermo Fisher Scientific | 14190144 | |
PenStrep | Thermo Fisher Scientific | 15140122 | |
PolyJet Transfection Reagent | SignaGen Laboratories | SL100688 | |
Cholesterol content measurement | Amplex Red Cholesterol Assay Kit | Thermo Fisher Scientific | A12216 |
Protease Inhibitor Cocktail | Thermo Fisher Scientific | 87786 | |
Phosphatase Inhibitor Cocktail | Thermo Fisher Scientific | 78420 | |
ROTI Nanoquant Working Solution | Roth | K880 | |
GloMax Discover Microplate Reader | Promega | GM3000 | |
svFCS measurements | HBSS buffer | Thermo Fisher Scientific | 14025092 |
Hepes buffer | Thermo Fisher Scientific | 15630080 | |
Cholesterol oxidase | Sigma-Aldrich | C8868 | |
Rhodamine 6G | Sigma-Aldrich | 83697-1G |