डिजिटल हाई स्पीड सिलियरी वीडियोमाइक्रोस्कोपी का उपयोग करके नाक ब्रशिंग नमूनाकरण और प्रसंस्करण - कोविड-19 महामारी के लिए अनुकूलन
Summary
पीसीडी निदान के लिए एक सफल और उच्च गुणवत्ता वाले सिलिअरी कार्यात्मक विश्लेषण की गारंटी देने के लिए, श्वसन उपकला नमूनाकरण और प्रसंस्करण के लिए एक सटीक और सावधानीपूर्वक विधि आवश्यक है। कोविड-19 महामारी के दौरान पीसीडी डायग्नोस्टिक सेवा प्रदान करना जारी रखने के लिए, उचित संक्रमण नियंत्रण उपायों को शामिल करने के लिए सिलियरी वीडियोमाइक्रोस्कोपी प्रोटोकॉल को अपडेट किया गया है।
Abstract
प्राथमिक सिलियरी डिस्केनेसिया (पीसीडी) एक आनुवंशिक मोटाइल सिलियोपैथी है, जिससे महत्वपूर्ण ओटोसिनोपुलमोनरी रोग होता है। विभिन्न नैदानिक तौर-तरीकों के साथ चुनौतियों के कारण पीसीडी निदान अक्सर छूट जाता है या विलंबित होता है। डिजिटल हाई-स्पीड वीडियोमाइक्रोस्कोपी (डीएचएसवी) का उपयोग करके सिलियरी वीडियोमाइक्रोस्कोपी, पीसीडी के लिए नैदानिक उपकरणों में से एक, सिलियरी फंक्शनल विश्लेषण (सीएफए) करने के लिए इष्टतम विधि माना जाता है, जिसमें सिलियरी बीट फ्रीक्वेंसी (सीबीएफ) और बीट पैटर्न (सीबीपी) विश्लेषण शामिल हैं। हालांकि, डीएचएसवी में नमूनों के प्रसंस्करण और विश्लेषण के लिए मानकीकृत, प्रकाशित ऑपरेटिंग प्रक्रिया का अभाव है। इसमें जीवित श्वसन उपकला का भी उपयोग किया जाता है, जो कोविड-19 महामारी के दौरान एक महत्वपूर्ण संक्रमण नियंत्रण मुद्दा है। इस स्वास्थ्य संकट के दौरान नैदानिक सेवा प्रदान करना जारी रखने के लिए, सिलियरी वीडियोमाइक्रोस्कोपी प्रोटोकॉल को पर्याप्त संक्रमण नियंत्रण उपायों को शामिल करने के लिए अनुकूलित किया गया है।
यहां, हम सिलिएटेड श्वसन नमूनों के नमूने और प्रयोगशाला प्रसंस्करण के लिए एक संशोधित प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं, जो कोविड-19 संक्रमण नियंत्रण उपायों का पालन करने के लिए किए गए अनुकूलन पर प्रकाश डालता है। इस प्रोटोकॉल के अनुसार संसाधित और विश्लेषण किए गए 16 स्वस्थ विषयों से प्राप्त नाक ब्रशिंग नमूनों से सीएफए के प्रतिनिधि परिणाम वर्णित हैं। हम इष्टतम गुणवत्ता वाले उपकला सिलिएटेड स्ट्रिप्स प्राप्त करने और संसाधित करने के महत्व को भी स्पष्ट करते हैं, क्योंकि गुणवत्ता चयन मानदंडों को पूरा नहीं करने वाले नमूने अब सीएफए के लिए अनुमति देते हैं, संभावित रूप से नैदानिक विश्वसनीयता और इस तकनीक की दक्षता को कम करते हैं।
Introduction
प्राथमिक सिलियरी डिस्केनेसिया (पीसीडी) एक विरासत में मिली विषम मोटाइल सिलियोपैथी है, जिसमें श्वसन सिलिया स्थिर, धीमी या डिस्काइनेटिक होती है, जिससे बिगड़ा हुआ म्यूकोसिलरी क्लीयरेंस और क्रोनिक ओटो-साइनो-पल्मोनरी रोग 1,2,3,4 होता है। पीसीडी की नैदानिक अभिव्यक्तियाँ पुरानी गीली खांसी और पुरानी नाक की भीड़ हैं जो प्रारंभिक शैशवावस्था में शुरू होती हैं, आवर्तक या पुरानी ऊपरी और निचले श्वसन पथ के संक्रमण से ब्रोन्किइक्टेसिस होता है, और आवर्तक या पुरानी ओटिटिस मीडिया और साइनसाइटिस 5,6,7 होता है। पीसीडी रोगियों में से लगभग आधे अंग पार्श्विक दोषों के साथ मौजूद होते हैं जैसे कि साइटस इनवर्सस या सीटूस एम्बिगस। कुछ रोगियों में पुरुषों में इम्मोटिल शुक्राणु और महिलाओं में फैलोपियन ट्यूब में इम्मोटिल सिलिया के कारण बांझपन के मुद्दों के साथ भी मौजूद हैं। पीसीडी दुर्लभ है, लेकिन प्रसार को परिभाषित करना मुश्किल है, और 1: 10,000 से 1: 20,000 9,10 तक है। हालांकि, निदान में कठिनाइयों और नैदानिक संदेह की कमी के कारण पीसीडी का वास्तविक प्रसार अधिक माना जाता है। पीसीडी के लक्षण अन्य तीव्र या पुरानी श्वसन स्थितियों के सामान्य श्वसन अभिव्यक्तियों की नकल करते हैं, और निदान की पुष्टि करने की नैदानिक चुनौतियां अच्छी तरह से ज्ञात हैं, जिससे अपर्याप्त उपचार और अनुवर्ती 2,5,9,11 होते हैं।
डिजिटल हाई-स्पीड वीडियोमाइक्रोस्कोपी (डीएचएसवी) का उपयोग करके सिलियरी वीडियोमाइक्रोस्कोपी, पीसीडी 4,8,12,13 के लिए नैदानिक उपकरणों में से एक है। डीएचएसवी को सिलियरी फंक्शनल एनालिसिस (सीएफए) करने के लिए इष्टतम विधि माना जाता है, जिसमें सिलियरी बीट फ्रीक्वेंसी (सीबीएफ) और बीट पैटर्न (सीबीपी) विश्लेषण 2,14,15,16 शामिल हैं। डीएचएसवी जीवित श्वसन उपकला का उपयोग करता है, जो आमतौर पर नाक ब्रशिंग13 से प्राप्त होता है।
वर्तमान कोविड-19 प्रकोप को देखते हुए, पीसीडी निदान की पुष्टि अब और भी महत्वपूर्ण है क्योंकि सबूत बताते हैं कि अंतर्निहित श्वसन रोग कोविड-19 संक्रमणके बाद बदतर परिणाम पैदा कर सकता है। वर्तमान महामारी के दौरान एक सुरक्षित और कुशल पीसीडी नैदानिक सेवा भी सामान्य आबादी19 की तुलना में पुष्टि किए गए पीसीडी रोगियों को अतिरिक्त सुरक्षात्मक उपायों से लाभ उठाने की अनुमति देगी।
कोविड-19 का संचरण मुख्य रूप से ड्रॉपलेट स्प्रेड20 के माध्यम से होता है। नाक के नमूने20 में उच्च वायरल लोड द्वारा स्पर्शोन्मुख (या न्यूनतम रोगसूचक) रोगियों से संचरण की उच्च क्षमता का सुझाव दिया जाता है। इसके अतिरिक्त, यदि वायरल कण एरोसोलाइज्ड हो जाते हैं, तो वे कम से कम 3 घंटे 21 तक हवा मेंरहते हैं। इसलिए, श्वसन स्वास्थ्य कर्मियों को नैदानिक देखभाल और नैदानिक तकनीकों के लिए नमूना संग्रह करते समय वायरल लोड के उच्च भंडार के संपर्क मेंलाया जाता है। इसके अलावा, जीवित श्वसन नमूनों में हेरफेर तकनीशियन को सीओवीआईडी -19 संदूषण के लिए उजागर करता है। कोविड-19 रोगियों की देखभाल करने वाले श्वसन चिकित्सकों और ईएनटी सर्जनों के लिए सर्वोत्तम अभ्यास की सिफारिशोंको लागू किया जा रहा है, लेकिन कोविड-19 महामारी के दौरान डीएचएसवी करने के लिए सिफारिशों की कमी है।
पीसीडी डायग्नोस्टिक सेवा प्रदान करना जारी रखने के लिए, स्वास्थ्य कार्यकर्ता (नमूना संग्रह करने वाले) और तकनीशियन (नमूना प्रसंस्करण करने वाले) की सुरक्षा सुनिश्चित करते हुए, कोविड-19 महामारी के दौरान सिलियरी वीडियोमाइक्रोस्कोपी प्रोटोकॉल को अनुकूलित करना पड़ा। सिलियरी वीडियोमाइक्रोस्कोपी की तकनीक वर्तमान में अनुसंधान सेवा और विशेष नैदानिक केंद्रों तक सीमित है, क्योंकि सीएफए को व्यापक प्रशिक्षण और अनुभव की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, वर्तमान में, डीएचएसवी 4,13 का उपयोग करके नमूनों के प्रसंस्करण और विश्लेषण के लिए मानकीकरण और सटीक संचालन प्रक्रिया की कमी है।
इस पेपर का उद्देश्य डीएचएसवी के लिए मानक संचालन प्रक्रियाओं का वर्णन करना है, विशेष रूप से जीवित नाक उपकला का नमूना लेने और प्रसंस्करण करते समय संक्रमण नियंत्रण उपायों और सुरक्षा के संदर्भ में। यह वर्तमान कोविड-19 प्रकोप के बावजूद उच्च गुणवत्ता वाले पीसीडी निदान और देखभाल को जारी रखने की अनुमति देगा।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस पेपर का उद्देश्य कोविड-19 महामारी के दौरान उचित संक्रमण नियंत्रण विचारों के लिए किए गए समायोजन के साथ नाक ब्रशिंग नमूनों का उपयोग करके सीएफए के लिए एक मानक संचालन प्रक्रिया प्रदान करना है। पीसीडी नि?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम जीन-फ्रैंकोइस पापोन, ब्रूनो लुइस, एस्टेल एस्कुडियर और पेरिस-एस्ट के पीसीडी डायग्नोस्टिक सेंटर के सभी टीम के सदस्यों को उनके पीसीडी डायग्नोस्टिक सेंटर की यात्रा के दौरान उनकी उपलब्धता और हार्दिक स्वागत के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं। हम रॉबर्ट हर्स्ट और लीसेस्टर के पीसीडी केंद्र में सभी टीम के सदस्यों को उनके स्वागत और समय, सलाह और विशेषज्ञता के लिए भी धन्यवाद देते हैं।
Materials
| 15 mL conical tubes | FisherScientific | 352096 | 15 ml High-Clarity Polypropylene Conical Tube with lid |
| Amphotericin B | LONZA | 17-836E | Antifungal solution |
| Blakesley-weil nasal forceps | NOVO SURGICAL | E7739-12 | Used to hold the brush to perform the nasal brushing |
| Bronchial cytology brush | CONMED | 129 | Used for nasal brushing |
| Cotton swab | NUOVA APTACA | 2150/SG | Used for COVID-19 testing |
| Digitial high-speed videomicroscopy camera | IDTeu Innovation in motion | CrashCam Mini 1510 | |
| Glass slide | ThermoScientific | 12372098 | Microscope slides used to create the visualization chamber |
| Heated Box | IBIDI cells in focus | 10918 | Used to heat the sample |
| Inverted Light microscope | Zeiss | AXIO Vert.A1 | |
| Lens Heater | TOKAI HIT | TPiE-LH | Used to heat the oil immersion lens |
| Medium 199 (M199), HEPES | TermoFisher Scientific | 12340030 | Cell Culture Medium |
| Motion Studio X64 | IDT Motion | version 2.14.01 | Software |
| Oil | FischerScientific, Carl Zeiss | 11825153 | |
| Rectangular cover slip | VWR | 631-0145 | Used to cover the visualization chamber |
| Spacer (Ispacer) 0.25 mm | Sunjinlab | IS203 | Used for the creation of the hermetic closed visualization chamber |
| Square cover slip | VWR | 631-0122 | Used for the creation of lab-built open visualization chamber |
| Streptomycin/Penicillin | FisherScientific, Gibco | 11548876 | Antiobiotics solution |
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