Un test rapide de préférence alimentaire à Drosophila

Résumé

Nous présentons un protocole pour un essai d'alimentation à deux choix pour les mouches. Cet essai d'alimentation est rapide et facile à exécuter et convient non seulement pour la recherche en laboratoire à petite échelle, mais aussi pour les écrans comportementaux à haut débit chez les mouches.

Résumé

Pour choisir des aliments à valeur nutritive tout en évitant la consommation d'agents nocifs, les animaux ont besoin d'un système de goût sophistiqué et robuste pour évaluer leur environnement alimentaire. La mouche des fruits, Drosophila melanogaster, est un organisme modèle génétiquement tractable qui est largement utilisé pour déchiffrer les fondements moléculaires, cellulaires et neuronaux de la préférence alimentaire. Pour analyser les préférences alimentaires des mouches, une méthode d'alimentation robuste est nécessaire. Décrit ici est un test d'alimentation à deux choix, qui est rigoureux, économique et rapide. L'analyse est à base de boîtes de Pétri et implique l'ajout de deux aliments différents complétés par du colorant bleu ou rouge aux deux moitiés du plat. Ensuite, ~70 mouches prédémarrées de 2 à 4 jours sont placées dans le plat et autorisées à choisir entre les aliments bleus et rouges dans l'obscurité pendant environ 90 min. L'examen de l'abdomen de chaque mouche est suivi du calcul de l'indice de préférence. Contrairement aux assiettes multiwell, chaque boîte de Pétri ne prend que ~20 s à remplir et permet d'économiser du temps et des efforts. Cet essai d'alimentation peut être employé pour déterminer rapidement si les mouches aiment ou n'aiment pas un aliment particulier.

Introduction

Malgré des différences dramatiques dans la structure anatomique des organes gustatives entre les mouches et les mammifères, les réactions comportementales des mouches à de nombreuses substances tastantes sont étonnamment similaires à celles des mammifères. Par exemple, les mouches^{préfèrent le sucre 1,2,3,4,5,6,7,8}, acides aminés^9,10, et faible te....

Protocole

1. Assemblage des chambres d'essai

REMARQUE : Bien que ce protocole décrive l'utilisation d'une boîte de Pétri de 35 mm (figure 1A), l'effet désiré peut être obtenu à l'aide de n'importe quel récipient étanche à fond lisse qui peut être coupé en deux et couvert.

1. Tout d'abord, couper en deux une boîte de Pétri de 35 mm lidded en fixant une longueur de plastique (5 mm de largeur et 3 mm de hauteur) sur la ligne médiane avec adhésif étanche, formant deux compartiments étanches. Confirmez que le joint est complet pour éviter les fuites qui peuvent entraîner le mélange des deux substrats alimentaires.
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Résultats

Dans cet essai, un plat de 35 mm a été divisé en deux compartiments d'alimentation égaux, chaque moitié du plat contenant de la nourriture agarose couplée à un colorant bleu ou rouge (Figure 1A). Pour exclure le biais des colorants, les concentrations de colorants bleus et rouges ont été soigneusement affinées pour donner un PI approximatif de « 0 » lorsque seuls ces deux colorants ont été ajoutés (figure 1B). Une fois que la boîte de Pétri a été chargée avec de.......

Discussion

Cette méthode implique plusieurs étapes cruciales où des problèmes peuvent se produire. Tout d'abord, assurez-vous que les mouches ingèrent une quantité suffisante de nourriture pour fournir des données stables. Si les mouches mangent mal, assurez-vous que les mouches ont été affamées pendant au moins 24 h et que le média expérimental contient au moins une concentration minimale de saccharose (2 mM). Pour stimuler davantage la consommation alimentaire, prolongez la période de famine humide au-delà de 24 h, selon l'état p.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Boîte de Pétri 35 mm	Fisher Scientific	08-772E
Agarose	Thomas Scientific	C756P56
Adhésif transparent	Fisher Scientific	NC9884114
Tubes à centrifuger coniques	Fisher Scientific	05-527-90
Microscope de dissection	Amscope	SM-2T-6WB-V331
FCF Brilliant Blue	Wako Chemical	3844-45-9
Fly CO2 système d’anesthésie	Genesee Scientfic	59-114/54-104M
Incubateur à mouches avec cycle jour/nuit programmable	Powers Scientific Inc.	IS33SD
Lignes anti-mouches
Plat en verre (passe au micro-ondes)
Kimwipes	Fisher Scientific	06-666A
Bouteille de stockage multimédia	Fisher Scientific	50-192-9998
Séparateur en plastique coupé pour s’adapter au plat à partir d’une feuille d’une épaisseur ne dépassant pas 5 mm
Flacons anti-mouches	en plastiqueGenesee Scientific	32-116
Saccharose	Millipore Sigma	S9378
Sulforhodamine B	Millipore Sigma	S9012
Composé d’intérêt
Mélangeur Vortex	Benchmark Scientific	BV1000
Bain d’eau	Fisher Scientific	FSGPD05