Denne fedtdækkede øtransplantationsmetode er egnet til påvisning af indpodede øer i intraperitonealhulen. Det kræver især ikke brug af biobindingsmidler eller suturering.
Ø transplantation er en cellulær erstatningsterapi for svær diabetes mellitus. Intraperitonealhulen er typisk transplantationsstedet for denne procedure. Imidlertid har intraperitoneal øtransplantation nogle begrænsninger, herunder dårlig transplantationseffektivitet, vanskelig transplantatdetektionsevne og manglende graftektomikapacitet til analyse efter transplantation. I dette papir bruges “fedtdækket øtransplantation”, en intraperitoneal øtransplantationsmetode, der anvender epididymalt hvidt fedtvæv, til at vurdere de terapeutiske virkninger af bioengineered holme. Metodens enkelhed ligger i såning af holme på epididymalt hvidt fedtvæv og brug af vævet til at dække øerne. Mens denne metode kan kategoriseres som en intraperitoneal øtransplantationsteknik, deler den egenskaber med intra-fedtvævsøtransplantation. Den fedtdækkede øtransplantationsmetode viser imidlertid mere robuste terapeutiske virkninger end intra-fedtvævsø-øtransplantation, herunder forbedring af blodsukker- og plasmainsulinniveauer og potentialet for transplantatfjernelse. Vi anbefaler vedtagelsen af denne metode til vurdering af mekanismerne for holmens indkapsling i hvidt fedtvæv og de terapeutiske virkninger af bioengineered holme.
Hældningstransplantation er en cellulær erstatningsterapi til patienter med svær diabetes mellitus. Nylige rapporter har vist, at antallet af insulinuafhængighed tre år efter transplantation forbedres op til 44%1 , og at ca. 80% af modtagerne, der modtager mere end 600.000 samlede ø-ækvivalenter, opnår insulinuafhængighed2. Desuden blev det i den seneste Collaborative Islet Transplant Registry-rapport afsløret, at fastende blodsukkerniveauer blev opretholdt på 60-140 mg / dL i over en periode på 5 år hos over 70% af patienterne, der gennemgik øtransplantation alene. Undersøgelsen fastslog også, at omkring 90% af de patienter, der fik øtransplantation alene eller øtransplantation efter nyretransplantation, ikke udviklede nogen alvorlige hypoglykæmiske hændelser i over 5 år3.
Selvom de kliniske resultater af denne behandling er blevet bedre, skal der stadig tages fat på nogle begrænsninger, herunder nødvendigheden af at etablere et optimalt transplantationssted. Leveren er et typisk transplantationssted for klinisk øtransplantation, fordi det er det største organ, der kan rumme et stort volumen af holme. Hos nogle patienter er leveren imidlertid ikke tilgængelig (f.eks. på grund af portalhypertension, hepatitis og / eller cirrose4) og derfor andre steder, herunder det renale subkapsulære rum5,6, omental pose 7,8,9,10, mesentri 11, mave-tarmkanalen 12, skeletmuskulatur 13, subkutant væv 13, knoglemarv 14 og milt 15 ,16,17, er blevet betragtet som alternative transplantationssteder.
Selvom intraperitoneal øtransplantation let kan udføres under lokalbedøvelse, hvilket gør intraperitonealhulen til et tiltalende sted for klinisk øtransplantation, spredes øerne ved transplantation gennem hele intraperitonealhulen, hvilket gør ø-engraftmentdetektion og vellykket engraftmentbekræftelse vanskelig. Derfor er intraperitonealhulen ikke bredt anerkendt som et ideelt klinisk transplantationssted. I stedet bruges det ofte som en kontrolmodel til prækliniske undersøgelser for at undersøge effektiviteten af transplanterede indkapslede18 og bioengineered holme19. En nøjagtig sammenligning mellem bioengineered og kontroløer er imidlertid vanskelig at opnå på grund af udfordringerne med at udføre en nøjagtig engraftmentvurdering.
I modsætning hertil er brugen af intraperitonealt hvidt fedtvæv i omentalposen8, mesenteriet og andre ekstrahepatiske steder blevet godt rapporteret 10,20,21,22,23, og mange af de undersøgelser, der undersøgte funktionen af bioengineered holme transplanteret ved hjælp af hvidt fedtvæv, var i stand til at rapportere lovende terapeutiske resultater20,24,25, 26. Da brugen af epididymalt fedtvæv letter påvisning af transplanterede øer, blev den “fedtdækkede øtransplantationsmetode”, der anvender epididymalt fedtvæv, udviklet til at overvinde begrænsningerne ved intraperitoneal øtransplantation. I dette papir beskrives fedtdækket øtransplantation ved hjælp af epididymalt fedtvæv.
Den fedtdækkede øtransplantationsmetode inkorporerer teknikker fra to forskellige transplantationsteknikker: intraperitoneal øtransplantation og intrafedtvævsøtransplantation. Da overflademembranen af epididymalt hvidt fedtvæv anses for at være det hvide fedtvæv, der er dækket af peritoneum, og som er knyttet til epididymis, kan den fedtdækkede øtransplantationsmetode anatomisk kategoriseres som en type intraperitoneal øtransplantation. Teknikken, hvormed øerne leveres til modtagerdyret, ligner imidlertid me…
The authors have nothing to disclose.
Denne undersøgelse blev finansieret af et tilskud til videnskabelig forskning (C) (19K09839, NS) fra Japans ministerium for uddannelse, kultur, sport, videnskab og teknologi.
4-0 Nylon | Alfresa | ER2004NA45-KF2 | Closing abdomen |
Alexa 488-conjugated donkey anti-guinea pig | Jackson Immunoresearch | 706-546-148 | Secondary antibody for insulin antibody |
Alexa 647-conjugated donkey anti-rabbit | Jackson Immunoresearch | 711-606-152 | Secondary antibody for von Willebrand factor antibody |
DMEM, low glucose, pyruvate | ThermoFisher Scientific | 11885084 | Culturing islets, transplanting islets |
Eosin | Fujifilm Wako Chemicals | 051-06515 | Using for staining tissue by eosin |
Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL | Eppendorf | 30120086 | Collecting islets |
Falcon 15 mL Conical Centrifuge Tubes | Corning | 352095 | Collecting islets |
Falcon 40 µm Cell Strainer | Falcon | 352340 | Using for separating islets from other pancreatic tissue |
Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes | Corning | 352070 | Discarding excessive medium/buffer |
Guinea pig anti-insulin | Agilent Technologies Japan, Ltd. (Dako) | IR002 | Primary antibody for murine insulin |
Hematoxylin | Muto Pure Chemicals Co., Ltd. | 30002 | Using for staining tissue by hematoxylin |
Isodine solution 10% | Shionogi&Co., Ltd. | no catalog number | Using for disinfection |
Isoflurane | Fujifilm Wako Chemicals | 095-06573 | Using for anesthesia |
Labcon 1000 µL ZapSilk Low Retention Pipette Tips | Labcon | 1177-965-008 | Using for separating islets from other pancreatic tissue |
Labcon 200 µL ZapSilk Low Retention Pipette Tips | Labcon | 1179-965-008 | Using for seeding islets onto epididymal white adipose tissue |
Mintsensor | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co. Ltd., | 8AEB02E | Using for monitoring blood glucose |
Pipetteman P-1000 | Gilson | F123602 | Using for separating islets from other pancreatic tissue |
Pipetteman P-200 | Gilson | F123601 | Using for seeding islets onto epididymal white adipose tissue |
Rabbit anti-vWF | Abcam | ab6994 | Primary antibody for murine von Willebrand factor |