顔の発達を評価するための鳥類前脳キメラの作成
Summary
この記事では、頭蓋顔面発達中の基底前脳のシグナル伝達とパターン化の特性をテストするために設計された組織移植技術について説明します。
Abstract
鳥類の胚は1世紀以上にわたってモデルシステムとして使用されており、脊椎動物の発生に関する基本的な理解につながっています。このモデルシステムの強みの1つは、キメラ胚における組織の効果と組織間の相互作用を直接評価できることです。我々はこれまでに、前脳からのシグナルが前鼻外胚葉帯(FEZ)におけるソニックハリネズミ(SHH)の発現ドメインの形状を制御することによって顔面形態形成に寄与することを示した。本稿では、前脳キメラの生成方法と、これらの実験の結果の実例について説明します。
Introduction
発生生物学における現代の研究の多くは、胚の形成における遺伝子の役割に焦点を当てています。遺伝的観点から発生メカニズムを調べるための優れたツールがあります。しかしながら、胚は組み立てられ、組織相互作用に応答して形態形成を受ける。鳥類系は、発生学がよく理解されていること、胚に容易にアクセスできること、鳥類系の分析のためのツールが十分に発達していること、胚が安価であることなどの理由で発生を調節するさまざまな組織相互作用を評価するために使用される古典的なツールです。
鳥類移植システムは、系統の追跡や発生中の組織相互作用の評価に、ほぼ1世紀にわたって広く採用されてきました1,2,3,4。このシステムは、上顎の形態形成を制御するシグナル伝達中枢である前鼻外胚葉帯(FEZ)を調べるために使用され5、以前にその技術を説明するビデオが公開されました6。ウズラのひよこに加えて、他の種も組織相互作用の分析のためのキメラを生産するために使用されてきました。例えば、野生型7および変異マウス8から移植されたマウスFEZおよびその他は、顔の骨格をパターン化する際の神経堤の役割を評価するためにアヒル、ウズラおよびニワトリ系を使用した9、10、11、12。
本研究では、ウズラ、アヒル、ヒナの胚の間で腹側前脳を相互に移植することにより、FEZにおける遺伝子発現パターンを制御する前脳の役割を評価した。前脳移植はこの分野では珍しいことではありません。これらの移植は、ウズラおよびアヒルの胚13における運動性の発達を評価するために使用されたが、これらの実験では、非神経誘導体に寄与する組織も移植された。他の研究では、鳥の聴覚回路は前脳移植14によって評価されていますが、これらの移植には、顔の形9,10に寄与し、FEZ15のSHH発現の調節に関与する推定神経堤細胞が含まれていました。そこで、神経管を閉じる前に、ある鳥種から別の鳥類に腹側前脳だけを移植するシステムを考案し、顔の形における脳の役割を評価しました16(図1A、B)。この方法は、移植片の神経堤汚染を欠いていた。本稿では、その方法を示し、期待される結果について説明し、直面する課題について説明します。
Protocol
Representative Results
Discussion
記載された方法は、基底前脳と隣接する外胚葉との間の組織相互作用の検査を可能にする。このアプローチは、ドナー組織が腹側前脳に限定されていたため、以前の前脳移植方法とは異なります。これにより、顔面形態のパターン化に関与することが示されている神経堤細胞の移植が排除されます9,10。したがって、移植片を基底前脳に制限するこ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この出版物で報告された研究は、国立衛生研究所の国立歯科頭蓋顔面研究所によって、賞番号R01DE019648、R01DE018234、およびR01DE019638でサポートされました。
Materials
| 1x PBS | TEK | TEKZR114 | |
| 35×10 mm Petri dish | Falcon | 1008 | |
| DMEM | Thermofisher | 11965084 | |
| Needle holder | Fine Science Tools | 26016-12 | |
| Neutral Red | Sigma | 553-24-2 | |
| No. 5 Dumont forceps | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Pasteur Pipets | Thermofisher | 13-678-6B | |
| QCPN antibody | Developmental Studies Hybridoma bank, Iowa University, Iowa, USA | ||
| Scissors | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Tungsten Needle | Fine Science Tools | 26000 |
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