Creación de dos aneurismas digeridos por elastasa sacular con diferente hemodinámica en un conejo
Summary
Este protocolo describe los pasos para la creación de un modelo de conejo con dos aneurismas digeridos por elastasa con diferente hemodinámica (muñón y constelación de bifurcación). Esto permite probar nuevos dispositivos endovasculares en aneurismas con diferentes condiciones angioarquitectónicas y hemodinámicas dentro de un solo animal.
Abstract
Los modelos animales preclínicos con características hemodinámicas, morfológicas e histológicas cercanas a los aneurismas intracraneales humanos desempeñan un papel clave en la comprensión de los procesos fisiopatológicos y en el desarrollo y prueba de nuevas estrategias terapéuticas. Este estudio tiene como objetivo describir un nuevo modelo de aneurisma de conejo que permite la creación de dos aneurismas saculares digeridos por elastasa con diferentes condiciones hemodinámicas dentro del mismo animal.
Cinco conejos blancos hembras de Nueva Zelanda con un peso medio de 4,0 (± 0,3) kg y una edad media de 25 (±5) semanas se sometieron a la creación de un muñón microquirúrgico y un aneurisma de bifurcación. Un aneurisma (muñón) fue creado por la exposición a la arteria carótida común derecha (CCA) en su origen en el tronco braquiocefálico. Se aplicó un clip temporal en el origen CCA y otro, 2 cm por encima. Este segmento fue tratado con una inyección local de 100 U de elastasa durante 20 min. Se creó un segundo aneurisma (bifurcación) mediante la sutura de una bolsa arterial tratada con elastasa en la anastomosis de extremo a lado del CCA derecho al CCA izquierdo. La permeabilidad se controló mediante angiografía de fluorescencia inmediatamente después de la creación.
La duración promedio de la cirugía fue de 221 min. La creación de dos aneurismas en el mismo animal fue exitosa en todos los conejos sin complicaciones. Todos los aneurismas fueron patentes inmediatamente después de la cirugía, excepto un aneurisma de bifurcación, que mostró una reacción tisular extrema debido a la incubación de elastasa y una trombosis intraluminal inmediata. No se observó mortalidad durante la cirugía y hasta un mes de seguimiento. La morbilidad se limitó a un síndrome vestibular transitorio (un conejo), que se recuperó espontáneamente en un día.
Aquí se demuestra por primera vez la viabilidad de crear un modelo de conejo de dos aneurismas con características hemodinámicas de muñón y bifurcación y condiciones de pared altamente degeneradas. Este modelo permite el estudio del curso natural y las posibles estrategias de tratamiento sobre la base de la biología del aneurisma en diferentes condiciones de flujo.
Introduction
El aneurisma intracraneal es una afección grave con una tasa de mortalidad después de la rotura que alcanza el 50% y discapacidad a largo plazo en el 10-20% de los pacientes1. La última década ha visto un rápido desarrollo de las opciones de tratamiento endovascular pero, al mismo tiempo, también una tasa creciente de recurrencia con hasta un 33% de recanalización del aneurisma después de enrollar 2,3. Para comprender mejor la fisiopatología subyacente a la oclusión y recanalización del aneurisma, así como para el desarrollo y prueba de nuevos dispositivos endovasculares, actualmente existe la necesidad de modelos preclínicos confiables cuyas características hemodinámicas, morfológicas e histológicas imiten las de los aneurismas intracraneales humanos 4,5,6 . A partir de hoy, no existe un modelo definido como estándar para el ensayo preclínico, y una amplia gama de especies y técnicas están disponibles para los investigadores 7,8.
Sin embargo, el conejo es una especie de particular interés debido al tamaño y las similitudes hemodinámicas entre sus arterias del cuello y los vasos cerebrales humanos, así como sus perfiles similares de coagulación y trombólisis. Varios modelos con aneurismas saculares digeridos por elastasa en las arterias carótidas comunes (CCA) han mostrado similitudes cualitativas y cuantitativas con los aneurismas intracraneales humanos en términos de condiciones de flujo, características geométricas y características de la pared 9,10,11,12. Este estudio tiene como objetivo describir una técnica para crear un nuevo modelo de aneurisma de conejo con aneurismas digeridos por elastasa de muñón y bifurcación en el mismo animal. Las técnicas quirúrgicas están inspiradas en las de Hoh et al.13 y Wanderer et al.14 con ligeras modificaciones para proporcionar una buena estandarización y reproducibilidad y asegurar una baja mortalidad y morbilidad.
Protocol
Representative Results
Discussion
La técnica más común para la creación de aneurismas implica la creación de un aneurisma de muñón en el origen del CCA derecho, ya sea a través de un método abierto o endovascular. El modelo ha sido validado para ser un aneurisma estable no creciente que permanece abierto con el tiempo20,21. La segunda técnica posible consiste en la creación microquirúrgica de un aneurisma de bifurcación arterial mediante la anastomosación del CCA derecho en el izqui…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores agradecen al profesor Hans Rudolf Widmer, al Dr. Luca Remonda y al profesor Javier Fandino por su apoyo científico y contribución técnica a este trabajo. Un agradecimiento especial a Olgica Beslac por sus consejos durante los procedimientos y a Kay Nettelbeck por su ayuda. Además, agradecemos a Daniela Casoni DVM, PhD y med. vet. Luisana García, PD Dra. Alessandra Bergadano y Dra. Carlotta Detotto por su dedicado apoyo veterinario.
Materials
| 4-0 resorbable suture | Ethicon Inc., USA | VCP292ZH | |
| 4-0 resorbable suture | Ethicon Inc., USA | VCP304H | |
| 6-0 non absorbable suture | B. Braun, Germany | C0766070 | |
| 9-0 non absorbable suture | B. Braun, Germany | G1111140 | |
| Adrenaline | Amino AG | 1445419 | any generic |
| Amiodarone | Helvepharm AG | 5078567 | any generic |
| Anesthesia machine | Dräger | any other | |
| Aspirin | Sanofi-Aventis (Suisse) SA | 622693 | any generic |
| Atropine | Labatec Pharma SA | 6577083 | any generic |
| Bandpass filter blue | Thorlabs | FD1B | any other |
| Bandpass filter green | Thorlabs | FGV9 | any other |
| Biemer vessel clip (2x) | B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland | FD560R | any other |
| Bipolar forceps | any other | ||
| Bispectral index (neonatal) | any other | ||
| Blood pressure cuff (neonatal) | any other | ||
| Bycilces spotlight | any other | ||
| Clamoxyl | GlaxoSmithKline AG | 758808 | any generic |
| Dexmedetomidine | Ever Pharma | 136740-1 | any generic |
| Elastase | Sigma Aldrich | E7885 | |
| Electrocardiogram electrodes | |||
| Ephedrine | Amino AG | 1435734 | |
| Esmolol | OrPha Swiss GmbH | 3284044 | |
| Fentanyl (intravenous use) | Janssen-Cilag AG | 98683 | |
| Fentanyl (transdermal) | Mepha Pharma AG | 4008286 | |
| Fluoresceine | Curatis AG | 5030376 | |
| Fragmin | Pfizer PFE Switzerland GmbH | 1906725 | |
| Heating pad or heating forced-air warming system | |||
| Isotonic sodium chloride solution (0.9%) | Fresenius KABI | 336769 | |
| Ketamine | Pfizer PFE Switzerland GmbH | 342261 | |
| lid retractor | Approach | ||
| Lidocaine | Streuli Pharma AG | 747466 | |
| Longuettes | |||
| Metacam | Boehringer Ingelheim | P7626406 | Medication |
| Methadone | Streuli Pharma AG | 1084546 | Sedaton |
| Micro-forceps curved | Ulrich Swiss, Switzerland | U52-015-15 | |
| Micro-forceps straight 2x | Ulrich Swiss, Switzerland | U52-010-15 | |
| Microscissors | Ulrich Swiss , Switzerland | U52-327-15 | |
| Midazolam | Accord Healthcare AG | 7752484 | |
| Needle 23 G | arteriotomy | ||
| Needle holder | |||
| O2-Face mask | |||
| Operation microscope | Wild Heerbrugg | ||
| Papaverin | Bichsel | topical application | |
| Povidone iodine | Mundipharma Medical Company | any generic | |
| Prilocaine-lidocaine creme | Emla | ||
| Propofol | B. Braun Medical AG, Switzerland | General anesthesia | |
| Pulse oxymeter | |||
| Rectal temperature probe (neonatal) | |||
| Ringer Lactate | Bioren Sintetica SA | Infusion | |
| Ropivacain | Aspen Pharma Schweiz GmbH | 1882249 | Local anesthesia |
| Scalpell | Swann-Morton | 210 | |
| Small animal shaver | |||
| Soft tissue forceps | |||
| Soft tissue spreader | |||
| Stainless steel sponge bowls | |||
| Sterile micro swabs | |||
| Stethoscope | |||
| Surgery drape | |||
| Surgical scissors | |||
| Syringes 1 mL, 2 mL, and 5 mL | |||
| Tris-Buffer | Sigma Aldrich | 93302 | Elastase solution |
| Vascular clip applicator | B. Braun, Germany | FT495T | |
| Vein and arterial catheter 22 G | |||
| vessel loop | Approach | ||
| video camera or smartphone | |||
| Vitarubin | Streuli Pharma AG | 6847559 | |
| Yasargil titan standard clip (2x) | B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland | FT242T |
References
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