اختبار تنشيط basophil هو اختبار تشخيصي تكميلي في المختبر لتقييم تفاعلات الحساسية بوساطة IgE بناء على اكتشاف تنشيط basophil في وجود حافز محدد من خلال قياس علامات التنشيط عن طريق قياس التدفق الخلوي.
اختبار تنشيط الباسولفيل (BAT) هو اختبار تشخيصي تكميلي في المختبر يمكن استخدامه بالإضافة إلى التاريخ السريري واختبار الجلد (ST) وتحديد IgE (sIgE) المحدد في تقييم تفاعلات الحساسية بوساطة IgE تجاه الطعام وسم الحشرات والأدوية وكذلك بعض أشكال الشرى المزمن. ومع ذلك ، فإن دور هذه التقنية في خوارزميات التشخيص متغير للغاية وغير محدد جيدا.
يعتمد BAT على تحديد استجابة القاعدية لتنشيط IgE المتقاطع للحساسية / الدواء من خلال قياس علامات التنشيط (مثل CD63 ، CD203c) عن طريق قياس التدفق الخلوي. يمكن أن يكون هذا الاختبار أداة مفيدة ومكملة لتجنب اختبارات التحدي الخاضعة للرقابة لتأكيد تشخيص الحساسية ، خاصة في الأشخاص الذين يعانون من ردود فعل شديدة تهدد الحياة. بشكل عام ، ينبغي النظر في أداء BAT إذا i) تسبب مسببات الحساسية / الدواء في نتائج إيجابية خاطئة في ST ؛ ب) لا يوجد مصدر للحساسية / دواء لاستخدامه لتحديد ST أو sIgE ؛ ج) هناك خلاف بين تاريخ المريض وتحديد ST أو sIgE ؛ د) تشير الأعراض إلى أن ST قد يؤدي إلى استجابة نظامية ؛ v) قبل التفكير في CCT لتأكيد الجاني مسببات الحساسية / المخدرات. ترتبط القيود الرئيسية للاختبار بالحساسية غير المثلى ، خاصة في حساسية الأدوية ، والحاجة إلى إجراء الاختبار لمدة لا تزيد عن 24 ساعة بعد استخراج العينة ، وعدم وجود توحيد بين المختبرات من حيث الإجراءات والتركيزات وعلامات الخلايا.
يعتمد تشخيص الحساسية بوساطة IgE على التاريخ السريري ، واختبارات الجلد (STs) ، والقياس الكمي ل IgE الخاص بالمصل (sIgE) ، وإذا كان مطلوبا وموضحا ، اختبارات التحدي الخاضعة للرقابة (CCTs)1،2،3،4،5،6. ومع ذلك ، يمكن أن يكون التاريخ السريري غير موثوق به لأنه قد يكون هناك نقص في المعلومات الدقيقة ، و STs و CCTs ليست إجراءات خالية من المخاطر يمكن بطلانها في الأشخاص الذين يعانون من ردود فعل شديدة تهدد الحياة1،2،3،4،5،6 . هذه القضايا ، جنبا إلى جنب مع حقيقة أن تحديد sIgE عن طريق المقايسات المناعية للإنزيم الفلوري التجاري والتحقق من صحتها متاح فقط لعدد قليل من مسببات الحساسية والأدوية ، قد سلطت الضوء على الدور المهم للمقايسات الوظيفية الأخرى في المختبر مثل اختبار تنشيط القاعدية (BAT).
الخلايا القاعدية هي خلايا مستجيبة رئيسية تشارك في تفاعلات الحساسية بوساطة IgE والتي يتم تنشيطها عند الربط المتقاطع ل sIgE المجاورة المرتبطة بمستقبلات عالية التقارب (FcεRI) على سطح الخلية بعد التعرض للحساسية / المخدرات. يؤدي تنشيط Basophil إلى تحلل الخلايا وإطلاق وسطاء التهابيين تم تشكيلهم مسبقا وجديد وموجودين في حبيبات إفراز داخل الهيولى7،8،9. BAT هي طريقة في المختبر تحاول تقليد تنشيط basophil في وجود حافز (مسببات الحساسية أو المخدرات) وتحدد التغييرات في التعبير عن علامات تنشيط basophil عن طريق قياس التدفق الخلوي 7,10. هناك استراتيجيات مختلفة لتحديد الخلايا القاعدية (IgE + ، CCR3 + ، CRTH2 + ، CD203c +) وقياس تنشيط الخلايا (بشكل أساسي تنظيم CD63 و CD203c) باستخدام مجموعات من الأجسام المضادة الموسومة بالفلوروكروم 7,10. CD63 ، أفضل علامة تنشيط تم التحقق من صحتها سريريا 11،12،13،14 ، هو بروتين غشائي مثبت في حبيبات إفرازية تحتوي على الهيستامين الذي ، بعد تنشيط الخلايا واندماج الحبيبات مع الغشاء ، يتم التعبير عنه على سطح القاعدية 15،16،17،18،19،20،21 . CD203c هي علامة سطحية يتم التعبير عنها بشكل أساسي على الخلايا القاعدية ويتم تنظيمها بعد تحفيز FcεRI ، والتي أظهرت أيضا نتائج موثوقة في BAT15،22،23،24،25. إلى جانب ذلك ، يبدو أنه يعبر عن CD6326.
في العقود الماضية ، أظهرت BAT أنها مفيدة في تشخيص تفاعلات الحساسية بوساطة IgE التي تسببها محفزات مختلفة مثل الأدوية أو الطعام أو المستنشقات ، وكذلك في بعض أشكال الشرى المزمن ، كما هو موضح أدناه. ومع ذلك ، فإن موضع هذه التقنية في خوارزميات التشخيص متغير للغاية وغير محدد جيدا.
فرط الحساسية للأدوية
أظهرت BAT أنها مفيدة كاختبار تكميلي للأدوية والمرضى المختارين ، خاصة بالنسبة لأولئك الذين يعانون من ردود فعل شديدة بسبب حقيقة أن القيمة التشخيصية ل ST ليست راسخة لمعظم الأدوية ، حيث يتم التحقق من صحتها وتوحيدها لعدد محدود من الأدوية27،28،29،30. بالإضافة إلى ذلك ، لا يتوفر القياس الكمي ل sIgE إلا لعدد محدود من الأدوية ، مع حساسية أقل من ST27،28،29،30،31،32. لذلك ، يعتمد تشخيص فرط الحساسية للأدوية عادة على اختبار استفزاز الدواء ، والذي يمكن بطلانه في الأشخاص الذين يعانون من ردود فعل شديدة تهدد الحياة33.
تم الإبلاغ عن نتائج واعدة لاستخدام BAT في مرضى مختارين أبلغوا عن تفاعلات فرط الحساسية الفورية لأدوية مختلفة مثل betalactams (BLs) 20،34،35،36،37،38،39 ، عوامل حاصرات عصبية عضلية (NMBAs) 19،22،40،41،42 ، 43،44،45 ، الفلوروكينولونات (FQs) 46،47،48،49 ، بيرازولون 50،51،52 ، وسائط التباين الإشعاعي (RCM) 53،54،55،56 ، ومركبات البلاتين 57،58،59 . تم الإبلاغ عن أن أفضل التقنيات المتاحة لها حساسية ونوعية بين 51.7-66.9٪ و 89.2-97.8٪ على التوالي ؛ وتوصف القيم التنبؤية الإيجابية والسلبية بأنها تتراوح بين 93.4٪ و 66.3٪ على التوالي 27,31. علاوة على ذلك ، تم اقتراح BAT كعلامة حيوية تنبؤية لتفاعلات الاختراق أثناء إزالة الحساسية بمركبات البلاتين ، حيث يتم زيادة تعبير CD203c مقارنة ب CD63 في المرضى الذين يعانون من مخاطر عالية من ردود الفعل السلبية أثناء إزالة حساسية الدواء57.
من الجدير بالذكر أن BAT مفيد فقط في فرط الحساسية للأدوية عندما ينطوي التفاعل على تحلل القاعدية. لذلك ، فإنه ليس مفيدا في التفاعلات الناتجة عن تثبيط الأنزيمات الحلقية 142.
حساسية الطعام
برزت BAT كأداة تشخيصية محتملة لحساسية الطعام لأن تحديد مصل sIgE لمستخلص مسببات الحساسية بالكامل أو مسببات الحساسية الفردية غالبا ما يكون غامضا ، مما يتطلب تحدي الطعام عن طريق الفم لتأكيد التشخيص ، والذي ، على غرار فرط الحساسية للدواء ، هو إجراء مكلف وغير خال من المخاطر60. أظهرت العديد من الدراسات نتائج ذات صلة مع حليب البقر 61،62 ، البيض 61،63 ، القمح64،65،66،67،68 ، الفول السوداني 63،69،70،71،72 ، البندق73،74،75،76 ، 77 ، المحار78 ، الخوخ 79،80،81 ، التفاح 21 ، الكرفس ، والجزر82،83.
القيمة المضافة الرئيسية ل BAT في تشخيص حساسية الطعام مقارنة ب STs و sIgE في المصل هي أنها تظهر خصوصية أعلى وحساسية مماثلة. وبالتالي ، فإن BAT هي أداة مفيدة للتمييز بين مرضى الحساسية السريرية والأشخاص الذين لديهم حساسية ، ولكن متسامحة ، والذين لديهم خصوصية عالية (75-100٪) وحساسية (77-98٪)63،69،84. تعتمد قيم الحساسية والنوعية على مسببات الحساسية وعوامل أخرى مثل الأنماط الظاهرية (على سبيل المثال ، متلازمة حساسية الفم مقابل الحساسية المفرطة) ، والعمر ، وأنماط التحسس المتعلقة بالجغرافيا63,85.
يمكن أن يؤدي استخدام BAT لمكونات مسببة للحساسية المفردة إلى تحسين دقة التشخيص لبعض مسببات الحساسية الغذائية61,80. هناك دراسات تستخدم بروتينات تخزين البذور (على سبيل المثال ، Ara h 1 و Ara h 2 و Ara h 3 و Ara h 6 من الفول السوداني)86 ؛ بروتينات نقل الدهون (على سبيل المثال ، Pru p 3 من الخوخ و Ara h 9 من الفول السوداني) 80,86 ؛ و Bet v 1 متجانسات (على سبيل المثال ، Ara h 8 من الفول السوداني)87. ترتبط المرافق المحتملة الأخرى بتحديد مسببات الحساسية الجاني في حالات متلازمة حساسية حبوب اللقاح الغذائية21،87،88 ، أو الحساسية تجاه اللحوم الحمراء 89 ، أو الحساسية المفرطة التي يسببها التمرين المعتمد على الطعام66.
ومن المثير للاهتمام ، أن BAT يمكن أن توفر معلومات حول شدة وعتبة ردود الفعل التحسسية لأن المرضى الذين يعانون من ردود فعل أكثر حدة يظهرون نسبة أكبر من الخلايا القاعدية المنشطة ، كما لوحظ في دراسات مرضى الفول السوداني وحليب البقر84،90،91 ؛ والمرضى الذين يتفاعلون مع كميات ضئيلة من مسببات الحساسية يظهرون حساسية أكبرللباسوفيل 84،90،92. تشير هذه البيانات إلى أن BAT قد تكون مفيدة لتحديد مرضى الحساسية المعرضين لمخاطر عالية والذين يحتاجون إلى متابعة أوثق وتعليم أكثر كثافة93. علاوة على ذلك ، تم الإبلاغ عن أن أفضل التقنيات المتاحة يمكنها التنبؤ باستجابات التحدي الغذائي70،91،92،94 وعتبات التفاعل90،95 للمساعدة في تحديد متى يمكن (إعادة) إدخال الطعام بأمان 84. ومع ذلك ، فإن هذه النتائج مثيرة للجدل في بعض الدراسات63,96 وهناك حاجة إلى مزيد من البحث.
من ناحية أخرى ، تم استخدام BAT لمراقبة حل حساسية الطعام ، إما بشكل طبيعي أو تحت العلاجات المناعية ، بمرور الوقت ، والتي تم تقييمها حتى الآن فقط من خلال تحدي الطعام عن طريق الفم ، مع المخاطر والتكاليف المرتبطة بها84،97،98،99،100،101،102،103،104،105،106 ، 107,108. علاوة على ذلك ، فقد تم استخدامه أيضا لمراقبة تأثير أوماليزوماب في حساسية الطعام حيث ينخفض تنشيط القاعدية أثناء العلاج بأوماليزوماب ، لكنه يزداد بعد توقف العلاج109.
حساسية الاستنشاق
نادرا ما يكون BAT مفيدا في حساسية الاستنشاق حيث يمكن تحديد التشخيص بشكل روتيني عن طريق القياس الكمي sIgE و ST. ومع ذلك ، في حالات التهاب الأنف التحسسي الموضعي (مستويات لا يمكن اكتشافها من sIgE و STs السلبية مع اختبارات استفزاز الأنف الإيجابية) ، سمحت BAT بالتشخيص في 50٪ من الحالات110. وقد تم الإبلاغ كذلك عن وجود علاقة بين حساسية القاعدية والاستجابة لاختبارات استفزاز الأنف / الشعب الهوائية ، وكذلك بين شدة الربو وفعالية العلاج باستخدام أوماليزوماب111,112.
كما تم استخدام BAT لمراقبة العلاج المناعي للحساسية لعث غبار المنزل وحبوب اللقاح ، حيث تنخفض حساسية القاعدية أثناء العلاج المناعي ، ويرجع ذلك على الأرجح إلى تداخل الأجسام المضادة IgG 113،114،115،116،117.
حساسية سم غشائيات الأجنحة
يعتمد تشخيص حساسية سم غشاء البكارة بشكل روتيني على ST ومصل sIgE. أظهرت BAT حساسية عالية (85-100٪) وخصوصية (83-100٪) وقد تم الإبلاغ عن أنها مفيدة في الحالات التي تؤدي إلى نتائج ملتبسة أو في المرضى الذين لديهم تاريخ سريري موحي لحساسية السم ولكن لا يمكن اكتشافها sIgE و ST118,119 سلبي. ومع ذلك ، يبدو أن BAT لا تنبئ بشدة هذه التفاعلات120,121.
ما يصل إلى 60 ٪ من المرضى يظهرون sIgE لكل من سم الدبابير والنحل ، وتحديد مسببات الحساسية السائدة أمر بالغ الأهمية للعلاج المناعي المناسب. في هذه الحالات ، تم الإبلاغ عن أن BAT مفيد في تحديد مسببات الحساسية السائدة 119,122,123,124. على الرغم من أن sIgE إلى مسببات الحساسية الرئيسية لسموم النحل والدبابير قد يقلل من فائدة BAT في المرضى الذين يعانون من إيجابية مزدوجة لكلا السمين ، إلا أنه يوفر معلومات مفيدة بشكل رئيسي في الموضوعات ذات النتائج السلبية في تحديدات sIgE123.
تشير بعض الدراسات إلى أن BAT قد يكون مفيدا كمؤشر حيوي تنبؤي للآثار الجانبية خلال مرحلة تراكم العلاج المناعي للسم حيث تم الإبلاغ عن أن خيار العلاج هذا يقلل من حساسية القاعدية. ومع ذلك ، لا ينخفض التفاعل وهذه الأداة المساعدة BAT مثيرة للجدل في الوقت الحاضر 13,120,125,126,127,128,129,130.
الشرى والوذمة الوعائية
مجموعة فرعية من مرضى الشرى المزمن لديهم الفيزيولوجيا المرضية المناعية الذاتية ، بسبب الأجسام المضادة الذاتية IgE لمسببات الحساسية الذاتية والأجسام المضادة الذاتية IgG التي تستهدف مجمعات FcεRI أو IgE-FcεRI الموجودة على سطح الخلية البدينة131,132. في الممارسة السريرية ، اعتمد تشخيص هذا النوع من الشرى المزمن على المصل الذاتي الإيجابي ST ، الذي ينطوي على خطر الإصابة العرضية. تم اقتراح BAT كاختبار في المختبر لتشخيص ومراقبة المرضى الذين يعانون من الشرى المزمن المشتبه به. تم الإبلاغ عن زيادة تعبير CD63 و CD203c على سطح الخلايا القاعدية بعد التحفيز باستخدام الأمصال من مرضى الشرى المزمن ، مما يدل على اكتشاف الأجسام المضادة الذاتية النشطة 133،134،135،136،137. في الآونة الأخيرة ، تم الإبلاغ عن أن المرضى الذين يعانون من BAT الإيجابي غالبا ما يعانون من حالة المرض الأكثر نشاطا ، والتي يتم تقييمها من خلال درجة نشاط الشرى ، ويتطلبون جرعات أعلى من مضادات الهيستامين مع علاجات الخط الثالث (السيكلوسبورين A أو أوماليزوماب) ، مقارنة بأولئك الذين لديهم BAT138 سلبي.
BAT هو اختبار تشخيصي تكميلي في المختبر لتقييم تفاعلات الحساسية بوساطة IgE والتي أثبتت أنها مفيدة في تشخيص التفاعلات التي تسببها محفزات مختلفة مثل الأدوية أو الطعام أو المستنشقات ، وكذلك في بعض أشكال الشرى المزمن. بشكل عام ، يجب مراعاة أداء BAT إذا i) أنتجت مسببات الحساسية / الدواء نتائج إي?…
The authors have nothing to disclose.
نشكر كلوديا كورازا على دعمها الذي لا يقدر بثمن في اللغة الإنجليزية. وحظي هذا العمل بدعم من معهد الصحة ”Carlos III” (ISCIII) التابع ل MINECO (منحة يشترك في تمويلها صندوق ERDF: “Una manera de hacer Europa”؛ المنح رقم PI20/01715; PI18/00095; PI17/01410; PI17/01318; PI17/01237 و RETIC ARADYAL RD16/0006/0001 ؛ وزارة الصحة الأندلسية الإقليمية (المنحة رقم PI-0127-2020, PIO-0176-2018; PE-0172-2018 ؛ PE-0039-2018 ؛ PC-0098-2017 ؛ PI-0075-2017 ؛ PI-0241-2016). ID هو باحث إكلينيكي (B-0001-2017) و AA حاصل على عقد ما بعد الدكتوراه (RH-0099-2020) ، وكلاهما مدعوم من وزارة الصحة الإقليمية الأندلسية (بتمويل مشترك من ESF: “Andalucía se mueve con Europa”).
5 mL Round Bottom Polystyrene Test Tube, without Cap, Nonsterile | Corning | 352008 | |
APC anti-human CD193 (CCR3) Antibody | BioLegend | 310708 | |
BD FACSCalibur Flow Cytometer | BD Biosciences | ||
Calcium chloride | Sigma-Aldrich | C1016 | |
FITC anti-human CD63 Antibody | BioLegend | 353006 | |
HEPES (1 M) | Thermo-Fisher | 15630106 | |
Lysing Solution 10x concentrated | BD Biosciences | 349202 | |
Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | M8266 | |
N-Formyl-Met-Leu-Phe | Sigma-Aldrich | F3506 | |
PE anti-human CD203c (E-NPP3) Antibody | BioLegend | 324606 | |
Potassium chloride | Sigma-Aldrich | P9541 | |
Purified Mouse Anti-Human IgE | BD Biosciences | 555857 | |
Recombinant Human IL-3 | R&D Systems | 203-IL | |
Sheath Fluid | BD Biosciences | 342003 | |
Sodium chloride | Sigma-Aldrich | S3014 | |
TUBE 9 mL LH Lithium Heparin | Greiner Bio-One | 455084 | |
Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 |