Å forstå de unike fysiologiske og anatomiske strukturene til blekksprut kan i stor grad påvirke biomedisinsk forskning. Denne veiledningen demonstrerer hvordan man setter opp og vedlikeholder et marint miljø for å imøtekomme denne arten og inkluderer toppmoderne avbildning og analytiske tilnærminger for å visualisere blekkspruts nervesystemanatomi og funksjon.
Mange utviklinger innen biomedisinsk forskning har blitt inspirert av å oppdage anatomiske og cellulære mekanismer som støtter spesifikke funksjoner i forskjellige arter. Blekksprut er et av disse eksepsjonelle dyrene som har gitt forskere ny innsikt i nevrovitenskap, robotikk, regenerativ medisin og proteser. Forskning med denne arten av blæksprutte krever oppsett av komplekse fasiliteter og intensivbehandling for både blekksprut og økosystem som er avgjørende for prosjektets suksess. Dette systemet krever flere mekaniske og biologiske filtreringssystemer for å gi et trygt og rent miljø for dyret. Sammen med kontrollsystemet er det nødvendig med spesialisert rutinemessig vedlikehold og rengjøring for å effektivt holde anlegget i drift på lang sikt. Det anbefales å gi et beriket miljø til disse intelligente dyrene ved å endre tankens landskap, innlemme en rekke byttedyr og introdusere utfordrende oppgaver for dem å jobbe gjennom. Våre resultater inkluderer MR og en autofluorescence-avbildning av hele kroppen, samt atferdsstudier for bedre å forstå nervesystemet. Blekksprut har unik fysiologi som kan påvirke mange områder av biomedisinsk forskning. Å gi dem et bærekraftig økosystem er det første avgjørende skrittet for å avdekke deres distinkte evner.
Nye konsepter innen biomedisinsk forskning og biomedisinsk ingeniørfag er ofte inspirert av å identifisere spesifikke strategier som biologiske arter har for å møte miljømessige og fysiologiske forhold og utfordringer. For eksempel har forståelse av fluorescensegenskapene i ildfluer ført til utvikling av nye fluorescerende sensorer som kan rapportere cellulær aktivitet i andre modellorganismer1; identifisere ionkanaler aktivert av lys i alger har ført til utvikling av cellulær og tidsspesifikk lysbasert nevromodulering2,3,4,5; oppdage proteiner i glass steinbit som navigerer i henhold til jordens magnetfelt har ført til utvikling av magnetisk-basert-nevromodulering6,7,8,9,10,11; forstå sifonrefleksen i Aplysia har vært medvirkende til å forstå det cellulære grunnlaget for atferd12,13,14.
Forskere fortsetter å utvide den nåværende bioingeniør- og fylogenetiske verktøykassen ved å dra nytte av de unike styrkene og nye perspektivene på fysiologiske funksjoner som ikke-konvensjonelle laboratoriearter har. Føderale etater begynner å støtte disse studielinjene ved å finansiere nytt arbeid utført på forskjellige arter.
En slekt av dyr med unik anatomi og regenerering evner samt adaptiv kontroll av hver av sine armer, fascinerende biologer og ingeniører, og fengslende publikum fra alle deler av samfunnet er Octopus17. Faktisk har mange aspekter av blekksprutens fysiologi og oppførsel blitt studert de siste tiårene15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26 . Den siste utviklingen innen molekylær og evolusjonsbiologi, robotikk, bevegelsesopptak, avbildning, maskinlæring og elektrofysiologi akselererer imidlertid funn relatert til blekksprutfysiologi og atferd og oversetter dem til innovative bioingeniørstrategier27,28,29,30,31,32,33,34,35 ,36,37,38,39.
Her beskriver vi hvordan man setter opp og vedlikeholder blekkspruthold, noe som vil være av interesse og relevans for forskere og ingeniører med ulik bakgrunn, vitenskapelige interesser og mål. Likevel fokuserer våre resultater på anvendelse av blekksprut i nevrovitenskap og nevroengineering forskning. Blekksprut har et høyt utviklet nervesystem med 45 millioner nevroner i sentralhjernen, 180 millioner nevroner i optiske lober og ytterligere 350 millioner nevroner i de åtte aksiale ledningene og perifere gangliaene; Til sammenligning har en hund et lignende antall nevroner og en katt bare halvparten av den40. I motsetning til virveldyrnervesystemet, er det bare 32K sprudlende og 140K afferente fibre som forbinder millioner av nevroner i blekksprutens hjerne til millioner av nevroner i hver av armens aksiale ledninger40,41,42. Disse relativt få sammenkoblede fibrene antyder at de fleste detaljene for utførelsen av motorprogrammene utføres i selve aksialledningen, og understreker den unikt distribuerte nevronkontrollen blekksprutene har. Blekksprutens armer har ekstraordinær fin motorisk kontroll som gjør dem manipulasjon ferdigheter som å åpne krukke lokk, selv når de er inne i beholderen. Denne høyt utviklede prehensile motorkapasiteten er unik for klassen av Cephalopods (blekksprut, blekksprut og blekksprut)43.
Faktisk, gjennom hundrevis av millioner år med evolusjon, har blekksprut utviklet et bemerkelsesverdig og sofistikert genom og fysiologisk system43,44 som har inspirert ny utvikling og fremgang på tvers av vitenskapelige og tekniske felt. For eksempel kan en vannavstøtende limplaster basert på den anatomiske strukturen til blekkspruts suckers holde seg til våte og tørre overflater45; et syntetisk kamufleringsmateriale inspirert av blekksprutens kamuflasjehud kan forvandle en flat, 2D-overflate til en tredimensjonal en med støt og groper46. Miniatyr myke og autonome roboter (dvs. Octobots) som i fremtiden kan tjene som kirurgiske verktøy inne i kroppen47; og en arm (dvs. OctoArm) festet til en tanklignende robot48 er også utviklet. Mange arter av blekksprut brukes i biomedisinsk forskning, for eksempel Blekksprut vulgaris, Blekksprut sinensis, Octopus variabilis og Octopus bimaculoides (O. bimaculoides); O. vulgaris og O. bimaculoides er de vanligste34,49,50. Den nylige sekvenseringen av forskjellige blekksprutgenomer gjør denne slekten av spesiell interesse og åpner nye grenser i blekksprutforskning34,43,51,52.
O. bimakuloider som brukes i vårt oppsett er en mellomstor art av blekksprut, først oppdaget i 1949, som finnes i grunt vann utenfor nordøst-Stillehavskysten fra sentrale California til sør for Baja California-halvøya17. Det kan gjenkjennes av de falske øynene på mantelen under øynene. Sammenlignet med Giant Pacific Octopus (Enteroctopus dofleini) og Common Octopus (O. vulgaris), er California Two-Spot Octopus (O. bimaculoides) relativt liten i størrelse, og starter mindre enn noen få centimeter, vokser raskt som en ungdom. Når den heves i et laboratorium, kan den voksne mantelstørrelsen vokse til en gjennomsnittlig størrelse på 100 cm og veie opp til 800 g53,54. Blekksprut har en rask vekstperiode i løpet av de første 200 dagene; Da regnes de som voksne og fortsetter å vokse gjennom resten av livet55,56,57. Blekksprut kan være kannibalistiske, spesielt når begge kjønn er plassert sammen i en tank; Derfor må de plasseres individuelt i separate tanker58.
Systemoppsett:
Akvariet økosystemet er utviklet på en måte som både mekaniske og biologiske metoder for filtrering og oksygenering av vannet brukes. Filtreringselementene i systemet bruker sokkefiltre, proteinskummer og regelmessig rengjøring for å opprettholde nitrogen- og oksygennivåer. Enda viktigere er det at vi også er avhengige av marine mikroorganismer for å konsumere de farlige nitrogenholdige forbindelsene og annet biologisk avfall, samt aerere vannet gjennom prosesser for fotosyntes…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet ble støttet av NIH UF1NS115817 (G.P.). G.P. støttes delvis av NIH-tilskudd R01NS072171 og R01NS098231. Vi vil takke Patrick Zakrzewki og Mohammed Farhoud fra Emit Imaging for hjelp og støtte til å samle inn og visualisere dataene på Xerra Imaging Platform. MSU har en forskningsavtale med Bruker Biospin.
1-3/4 in. Drill Bit | Home Depot | 204074205 | Glass cutting tool Part number:1 |
1" flow sensors | Neptune Systems | Local Dealer | Pipe with sensor to measure water flow Part number:2 |
1" Slip Bulkhead Strainer | Bulk Reef Supply | 207113 | Strainer for water leaving tank Part number:3 |
10 gallon tank | Pruss Pets | Local Dealer | Fiddler crab holding tank Part number:4 |
4 inch X 12 inch 200 Micron Nylon Monofiliment Mesh Filter Sock w/ Plastic Ring | AQUAMAXX | UJ41171 | Filter for large organic matter in sump Part number:5 |
40 gallon aquarium | Pruss Pets | Local Dealer | 4 Food aquarium tanks Part number:6 |
60g poly tanks – rectangle | Pruss Pets | Local Dealer | 2 Water Storage (salt and freshwater) Part number:7 |
Active Aqua 1/10th HP Hydroponic or Aquarium Chiller 2018 Model | WayWe | 719574198463 | For cooling water continuously Part number:8 |
ALAZCO 2 Soft-Grip Handle Heavy-Duty Tile Grout Brush | ALAZCO | B06W2FT5V5 | Tank Cleaning Part number:9 |
Ammonia Testing Kit | Aquarium Pharmaceuticals | 33D | For water testing Part number:10 |
Apex system WiFi | Neptune Systems | Local Dealer | System connection for off site monitoring Part number:11 |
API Aquarium Test Kit | Amazon | B001EUE808 | For water testing Part number:12 |
API Copper Test Kit | Amazon | B0006JDWH8 | For water testing Part number:13 |
Aqua Ultraviolet Classic UV 25 Watt Series Units | Aqua Ultraviolet | A00028 | For removing bacteria leaving sump system Part number:14 |
AquaClear 50 Foam Filter Inserts, 3 pack | Aquaclear | A1394 | Food Tank Carbon Filter Inserts Part number:15 |
Aqueon QuietFlow LED PRO Aquarium Power Filter 30 | Aqueon | 100106082 | Food tank filtering units Part number:16 |
Auto Top Off Kit (ATK) (Each includes 1 FMM module, 2 optical sensors and 1 float) | Neptune Systems | Local Dealer | For freshwater tank Part number:17 |
Automatic top off from RODI (LLC) | Neptune Systems | Local Dealer | From water storage to octopus tanks Part number:18 |
Banded Trochus Snail | LiveAquaria | CN-112080 | For algae bin Part number:19 |
Chaetomorpha Algae, Aquacultured | LiveAquaria | BVJ-76354 | For algae bin Part number:20 |
Clams – Live, Hard Shell, Cherrystone, Wild, USA Dozen | Fulton Fish Market | N/A | Live food Part number:21 |
Classic Sea Salt Mix – Tropic Marin | Bulk Reef Supply | 211813 | Salt for tank water Part number:22 |
Clear Masterkleer Soft PVC Plastic Tubing, for Air and Water, 3/4" ID, 1" OD | McMaster | 5233K71 | Cleaning tool Part number:23 |
Continuum Aquablade-P Acrylic Safe Algae Scraper W/ Plastic Blade – 15 Inch | Marine Depot | 4C31001 | Cleaning tool Part number:24 |
Copper Testing Kit | Aquarium Pharmaceuticals | 65L | For water testing Part number:25 |
Curve Refugium CREE LED Aquarium Light | Eshopps | 6500K | Algae bin light Part number:26 |
Eheim 1262 return pumps | EHEIM | 1250219 | Pump for storage tanks Part number:27 |
Eshopps R-100 Refugium Sump GEN 3 | Eshopps | 15000 | Sump system Part number:28 |
Ethyl Alcohol, 200 Proof | Sigma-Aldrich | 64-17-5 | Anesthesia Part number:29 |
Extech DO600 ExStik II Dissolved Oxygen Meter | Extech | DO600 | Oxygen measurment Part number:30 |
Fiddler Crabs; live; dozen | NORTHEAST BRINE SHRIMP | N/A | Live food Part number:31 |
Filter Cartrages | Aqueon | 100106087 | Food tank filters Part number:32 |
Florida Crushed Coral Dry Sand – CaribSea | Bulk Reef Supply | 212959 | Sedimate for bottom of tank Part number:33 |
FMM module | Neptune Systems | Local Dealer | Controller for apex system Part number:34 |
Fritz-Zyme TurboStart 900 – Fritz | Bulk Reef Supply | 213036 | Bacteria start Part number:35 |
Hand Operated Drum Pump, Siphon, Basic Pump with Spout, For Container Type Bucket, Pail | Granger | 38Y789 | Water Hand Pump Part number:36 |
High pH Testing Kit | Aquarium Pharmaceuticals | 27 | For water testing Part number:37 |
Imagitarium Fine Mesh Net for Shrimp | Petco | 2580993 | Shrimp and fish transfer net Part number:38 |
Leak Detection Kit (LDK) – Includes FMM module plus 2 ALD sensors | Neptune Systems | Local Dealer | Placed on floor to detect water Part number:39 |
Lee`S Algae Scrubber Pad Jumbo – Glass | Marine Depot | LE12007 | Cleaning tool Part number:40 |
Live rocks | Pruss Pets | Local Dealer | Habitat for octopus Part number:41 |
Long Bottle Cleaning Brush 17" Extra Long | Haomaomao | B07FS7J7PN | Tank Cleaning Part number:42 |
Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | M1028-100ML | Euthanasia Part number:43 |
Magnetic Probe Rack | Neptune Systems | Local Dealer | For holding apex sensor probes Part number:44 |
Marine Ghost Shrimp | NORTHEAST BRINE SHRIMP | N/A | Live food Part number:45 |
Marineland C-Series Canister Carbon Bags Filter Media, 2 count | Chewy | 98331 | For elevated copper levels Part number:46 |
Nitra-Zorb Bag | Aquarium Pharmaceuticals | AP2213 | Absorbes nirtogen compounds Part number:47 |
Nitrate Testing Kit | Aquarium Pharmaceuticals | LR1800 | For water testing Part number:48 |
Nitrite Testing Kit | Aquarium Pharmaceuticals | 26 | For water testing Part number:49 |
Pawfly 2 Inch Air Stones Cylinder 6 PCS Bubble Diffuser Airstones for Aquarium Fish Tank Pump Blue | Amazon | B076S56XWX | Aierating water Part number:50 |
Penn Plax Airline Tubing for Aquariums –Clear and Flexible Resists Kinking, 8 Feet Standard | Amazon | B0002563MM | Tubing for connecting air pump to air stone Part number:51 |
Plumbing with unions/valves plus 3/4" flex hose | Pruss Pets | Local Dealer | Water transport Part number:52 |
PM1 module | Neptune Systems | Local Dealer | Power control module for apex Part number:53 |
Protein skimmer | Reef Octopus | AC20284 | Removes biowaste from system Part number:54 |
PVC Apex Mounting board, grommets, wire mounts | Neptune Systems | Local Dealer | Helps ensure organization for wires and tubing within system Part number:55 |
PVC Regular Cement and 4-Ounce NSF Purple Primer | Amazon | Oatey – 30246 | For connecting PVC pipes Part number:56 |
RODI unit | Neptune Systems | Local Dealer | RO Water Part number:57 |
Salinity Probes | HANNA probes | HI98319 | Measures salinity of water Part number:58 |
Seachem Pristine Aquarium Treatment | Sea Chem | 1438 | Provides bacteria that break down excess food, waste and detritus Part number:59 |
Seachem Stability Fish Tank Stabilizer | Sea Chem | 116012607 | Seachem Stability will rapidly and safely establish the aquarium biofilter in freshwater and marine systems Part number:60 |
Set of lexan tops | Pruss Pets | Local Dealer | Aquarium tank lids Part number:61 |
Set of Various extended length aquabus cables | Neptune Systems | Local Dealer | Cables for Apex system Part number:62 |
SLSON Aquarium Algae Scraper Double Sided Sponge Brush Cleaner Long Handle Fish Tank Scrubber for Glass Aquariums | Amazon | B07DC2TZCJ | Cleaning tool Part number:63 |
Standard-Wall PVC Pipe Fitting for Water, 45 Degree Elbow Adapter, 3/4 Socket Female x 3/4 Socket Male | McMaster | 4880K189 | PVC pipe Part number:64 |
Standard-Wall PVC Pipe Fitting for Water, 90 Degree Elbow Adapter, 1 Socket Female x 1 Socket Male | McMaster | 4880K773 | PVC pipe Part number:65 |
Standard-Wall PVC Pipe Fitting for Water, Adapter, 1 Socket-Connect Female x 1 Barbed Male | McMaster | 4880K415 | PVC pipe Part number:66 |
Standard-Wall PVC Pipe Fitting for Water, Straight Reducer, 2 Socket Female x 3/4 Socket Female | McMaster | 4880K008 | PVC pipe Part number:67 |
Standard-Wall PVC Pipe Fitting for Water, Tee Connector, White, 1 Size Socket-Connect Female | McMaster | 4880K43 | PVC pipe Part number:68 |
Standard-Wall Unthreaded Rigid PVC Pipe for Water, 1 Pipe Size, 10 Feet Long | McMaster | 48925K13 | PVC pipe Part number:69 |
Standard-Wall Unthreaded Rigid PVC Pipe for Water, 3/4 Pipe Size, 5 Feet Long | McMaster | 48925K92 | PVC pipe Part number:70 |
Structural FRP Fiberglass Sheet, 48" Wide x 96" Long, 1/4" Thick | McMaster | 8537K15 | Table top material Part number:71 |
Structural FRP Fiberglass Square Tube, 10 Feet Long, 2" Wide x 2" High Outside, 1/8" Wall Thickness | McMaster | 8548K33 | Structural table materal Part number:72 |
Tank Sediment | TopDawg Pet Supply | 8479001207 | Sediment for bottom of fiddler crab tank Part number:73 |
Temperature probe | Neptune Systems | Local Dealer | Temperature probe for tanks Part number:74 |
Tetra TetraMarine Large Saltwater Flakes for all Marine Fish | Amazon | B00025K0US | Fish, shrimp, and crab food Part number:75 |
Tetra Whisper Aquarium Air Pump for 10 gallon Aquariums | Petco | 2335234 | Air pump for smaller tanks Part number:76 |
Thick-Wall Through-Wall Pipe Fitting, for Water, PVC Connector, 1 Socket-Connect Female | McMaster | 36895K843 | PVC pipe Part number:77 |
Vectra s2 pump | Bulk Reef Supply | 212141 | Aquarium Pump Part number:78 |
Water Pump | TACKLIFE | GHWP1A | Pump for cleaning tanks Part number:79 |
Wyze Cam v2 1080p HD Indoor WiFi Smart Home Camera with Night Vision | Amazon | B076H3SRXG | DeepLabCut Recording Part number:80 |