가을 육군벌레, 스포드옵테라 검소한에서 활동적인 피기박 트랜스포사스 중재 된 세균라인 변환
Summary
가을 군벌레, 스포드옵테라 검거르다에서성공적인 생식선 변환은, 활동적인 돼지박 트랜스포사제의 mRNA를 사용하여 달성되었다.
Abstract
유전적 화물을 변형 가능한 원소를 사용하여 곤충 게놈에 안정적으로 삽입하는 것은 기능성 게놈 연구및 유전자 해충 관리 전략을 개발하기 위한 강력한 도구입니다. 곤충 변환에서 가장 많이 사용되는 형질 전환 요소는 돼지 박이며, 돼지 박기반 의 생식선 변환은 성공적으로 모델 곤충에서 수행되었습니다. 그러나, 농업 해충을 포함 하는 비 모델 곤충에이 기술을 채택 하는 여전히 도전. 이 논문은 전 세계 농업 해충, 가을 군벌레 (FAW), 스포드 옵테라 검거르다,활동적인 돼지 박 트랜스포사아제 (hyPBase)를 사용하여 생식선 변환에 보고합니다.
이 작품에서 hyPBase mRNA는 배아 미세 주입에서 도우미 플라스미드 대신 에 생산및 사용되었습니다. 이러한 변화는 트랜스제닉 FAW의 성공적인 세대로 이어졌습니다. 더욱이, 형질전환동물의 선별 방법, PCR 계의 신속한 트랜스진 삽입 및 열 비대칭 인터레이스 PCR(TAIL-PCR) 기반의 통합 부위의 결정도 설명된다. 따라서, 이 논문은 FAW 및 그밖 lepidopteran 곤충에 있는 돼지박기지를 둔 전염을 촉진할 환생 FAW를 생성하는 프로토콜을 제시합니다.
Introduction
가을 군벌레 (FAW), Spodoptera 검소한다,미국의 열대 및 아열대 지역 출신이다. 현재, 이것은 전 세계 100 개 이상의 국가에서 파괴적인 곤충 초식동물입니다 1. FAW 애벌레는 몇 가지 중요한 주식 작물 을 포함하여 350 개 이상의 호스트 식물에 사료2. FAW 성인의 강력한 이주 능력은 최근 미대륙에서 다른 장소로 급속한 확산에 기여1,2. 그 결과, 이 곤충은 현재 국제적으로 식량 안보를 위협하고 있습니다. 새로운 기술을 적용하면 FAW의 고급 연구를 용이하게하고이 해충을 관리하는 새로운 전략을 제공 할 수 있습니다.
곤충 생식선 변환유전자 기능을 연구하고 유전자 제어3,4에사용하기 위해 형질전환 곤충을 생성하는 데 사용되어 왔다. 곤충의 유전적 변화를 달성하는 데 사용되는 다양한 방법 중, 돼지박 원소 기반 방법은 가장 많이 사용되는 방법5이다. 그러나, 전치의 낮은 비율로 인해, 비 모델 곤충에서 전염을 수행하는 것은 여전히 도전이다. 최근에는 피기박 트랜스포사아제(hyPBase)의 활동적인 버전이6,7로개발되었다. Germline 변환은 최근 FAW에서 달성되었다8,이는 lepidopteran 곤충에 hyPBase를 사용하는 첫 번째 보고서입니다. 본 보고서에서, 형질전환 FAW 생성에 hyPBase mRNA를 채용에 대한 자세한 정보가 설명된다. 여기에 설명된 방법은 다른 lepidopteran 곤충의 변환을 달성하기 위해 적용될 수 있었다.
Protocol
Representative Results
Discussion
트랜스제닉 성분을 신선한 배아로 전달하는 낮은 비율과 트랜스제너란을 신선한 배아로 전달하는 어려움은 많은 비모델 곤충, 특히 질서, Lepidoptera의 생식선 변환의 성공을 제한합니다. 세균선 변환 속도를 높이기 위해 가장 널리 사용되는 피기박 트랜스포사아제(hyPBase)의 활동적인 버전이7,10을개발하였다. 현재까지, lepidopteran 곤충의 성공적인 ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
보고된 연구는 국립 과학 재단 I/UCRC에 의해 지원됩니다, 자지동물 관리 기술 센터, 그랜트 No IIP-1821936에 따라 및 산업 파트너에 의해, 농업 및 식품 연구 이니셔티브 경쟁 보조금 번호 2019-67013-29351 및 국립 식품 농업 연구소, 미국 농업의 부(2019-67019)와 미국 농농업부 (2019-67019)와 미국 농무부 (2019-67013)와 2353057000 미국 농무부 (2019-67013).
Materials
| 1.5" Dental Cotton Rolls | PlastCare USA | 8542025591 | REARING |
| 1 oz Souffle Cup Lids | DART | PL1N | |
| 1 oz Souffle Cups | DART | P100N | REARING |
| 48 oz Plastic Deli Containers | Genpack | AD48 | REARING |
| Add-on Filter Set (Green) | NightSea LLC | SFA-BLFS-GR | SCREENING |
| Borosilicate Glass | Sutter Instruments | BF100-50-10 | INJECTION |
| Borosilicate Glass | SUTTER INSTRUMENT | BF-100-50-10 | |
| Dissecting Scope | Nikon | SMZ745T | SCREENING |
| Featherweight Forceps | BioQuip | 4750 | REARING |
| Gutter Guard | ThermWell Products | VX620 | REARING |
| Inverted Microscope | Olympus | IX71 | INJECTION |
| Microinjector | Narishige | IM-300 | INJECTION |
| Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-1000 | INJECTION |
| Microscope Slides | VWR | 16004-22 | INJECTION |
| NightSea Full System | NightSea LLC | SFA-RB-DIM | SCREENING |
| Nitrogen Gas | AWG/Scott-Gross | NI 225 | INJECTION |
| Paper Towels | Bounty | 43217-45074 | REARING |
| Spodoptera frugiperda Artificial Diet | Southland Products, Inc | N/A [Request Species/Quantity] | REARING |
| Spodoptera frugiperda Eggs | Benzon Research, Inc | N/A [Request Species/Quantity] | REARING |
| Taq MasterMix | polymerase mixture |
References
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