छोटे अणु यौगिकों के त्वरित और मात्रात्मक पता लगाने के लिए पार्श्व प्रवाह इम्यूनोक्रोमेग्राफिक स्ट्रिप का विकास
Abstract
झिल्ली आधारित पार्श्व प्रवाह इम्यूनोक्रोमेग्राफिक स्ट्रिप्स (आईसीएसएस) कम लागत वाले आत्म-निदान के लिए उपयोगी उपकरण हैं और इसे टॉक्सिन, शारीरिक सूचकांक और नैदानिक बायोमार्कर डिटेक्शन पर कुशलतापूर्वक लागू किया गया है। इस प्रोटोकॉल में, हम एक तेजी से, संवेदनशील और मात्रात्मक पार्श्व प्रवाह इम्यूनोसे (एक मार्कर और एक जांच के रूप में mAbs के रूप में AuNPs का उपयोग कर) विकसित करने के लिए कदम का एक विस्तृत विवरण प्रदान करते हैं । प्रक्रिया कोलाइडियल सोने की तैयारी और लक्षण वर्णन, AuNP-mAb conjugate के संश्लेषण, इम्यूनोक्रोमेग्राफिक पट्टी की विधानसभा, और परख की पद्धति जांच का वर्णन करता है। परिणामों से पता चला है कि अंतिम स्ट्रिप्स को एक छोटे अणु के तेजी से और सुविधाजनक आत्म-निदान के लिए आगे उपयोग किया जा सकता है, जो शारीरिक और जैविक सूचकांकों के तेजी से और सटीक विश्लेषण में एक वैकल्पिक उपकरण प्रदान कर सकता है।
Introduction
झिल्ली आधारित पार्श्व प्रवाह इम्यूनोक्रोमेग्राफिक स्ट्रिप्स (आईसीएसएस) कम लागत और तेजी से पता लगाने के लिए उपयोगी उपकरण हैं। रोगी क्रोमेटोग्राफी रैपिड डायग्नोस्टिक रिएजेंट्स के मार्कर के रूप में वाहक और कोलॉयडल गोल्ड के रूप में नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली पॉक्सोटी (देखभाल परीक्षण का बिंदु) विधि है, और परियोजना का परीक्षण दायरा व्यापक है। गर्भावस्था के दौरान निगरानी में उनके मूल आवेदन से, उनके उपयोग को रक्त जमावट राज्य1,2,मायोकार्डियल चोट3,पशु चिकित्सा4,कीटनाशक अवशेष5,संक्रामक रोग6 और नशीली दवाओं की सांद्रता की निगरानी के लिए बढ़ाया गया है। अधिक प्रकार के नमूनों का आकलन किया जा सकता है, जिसमें मूत्र, लार, पूरे रक्त, सीरम और शरीर के अन्य तरल पदार्थ7,8,9शामिल हैं।
हाल के वर्षों में, एचपीएलसी, यूपीएलसी, एलसी-एमएस और एलिसा सहित विकारों के निदान में बायोमार्कर का पता लगाने के लिए कई उपन्यास परख विकसित की गई हैं, जो संवेदनशील और सटीक, विश्वसनीय और विशिष्ट हैं। हालांकि, इन तरीकों के लिए परिष्कृत इंस्ट्रूमेंटेशन, जटिल प्रीप्रोसेसिंग और समय लेने वाले उपचार9की आवश्यकता होती है। इसलिए, औषधीय सक्रिय यौगिकों का आत्म-और वास्तविक समय का पता लगाने के लिए अधिक तेजी से और सुविधाजनक बिंदु-देखभाल नैदानिक रणनीति विकसित करना अत्यावश्यक10,11है।
आईसीएसएस की लोकप्रियता, विशेष रूप से सामान्य परीक्षणों के लिए, उनके उपयोग में आसानी से प्रेरित है, क्योंकि उन्हें पेशेवरों या विस्तृत वाद्य सेटअप12की आवश्यकता नहीं है। दूसरे शब्दों में, जिन लोगों के पास विशेष प्रशिक्षण नहीं है, वे स्ट्रिप्स या सेल्फ-टेस्ट13संचालित कर सकते हैं । परीक्षण के परिणाम 5 मिनट में प्राप्त किए जा सकते हैं, जिसका अर्थ है कि इसका उपयोग साइट निरीक्षण14के लिए किया जा सकता है। इसके अलावा, हमारी गणना के अनुसार, स्ट्रिप्स की लागत 1 आरएमबी15से कम हो सकती है, जिसका अर्थ है कि परीक्षण16को बढ़ावा देने के लिए सस्ती हैं। इसलिए, आईसीएस एक अपेक्षाकृत सटीक, सरल और सस्ती डिस्पोजेबल डिवाइस है। कोलाइडियल गोल्ड17, 18पर आधारित आईसीएसएस भी रैपिड कोवीड-19 डिटेक्शन में लागू किया जाता है।
आईसीएस के सिद्धांत को सैंडविच आईसीएस और प्रतिस्पर्धी आईसीएस में बांटा जा सकता है। चित्रा 1A सैंडविच आईसीएस का एक योजनाबद्ध आरेख है, जिसका उपयोग मुख्य रूप से प्रोटीन जैसे मैक्रोमॉलिकुलर पदार्थों का पता लगाने के लिए किया जाता है, जिसमें ट्यूमर मार्कर, भड़काऊ कारक और मानव कोरियोनिक गोंडोट्रोपिन (एचसीजी, अर्ली प्रेगनेंसी एंटीजन) शामिल हैं। इस विधि में, एंटीजन के विभिन्न एपिटोप पर लक्षित एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है, और कैप्चर एंटीबॉडी को परीक्षण लाइन के रूप में एनसी झिल्ली पर सुखाया जाता है। लेबल एंटीबॉडी को कंजूगेट पैड पर सुखाया जाता है, और माध्यमिक एंटीबॉडी का उपयोग नियंत्रण रेखा के रूप में किया जाता है।
चित्रा 1B प्रतिस्पर्धी आईसीएस का एक योजनाबद्ध आरेख है, जिसका उपयोग मुख्य रूप से छोटे अणु पदार्थों (MWCO < 2000 डीए) का पता लगाने के लिए किया जाता है। कोटिंग एंटीजन एक परीक्षण लाइन के रूप में नेकां झिल्ली पर तय किया जाता है, और लेबल एंटीबॉडी conjugate पैड पर सूख जाता है । पता लगाने के दौरान, नमूना और लेबल एंटीबॉडी प्रवाह केशिका कार्रवाई के तहत पता लगाने लाइन के माध्यम से, और लेपित एंटीजन प्रतिस्पर्धी नमूने में मुफ्त एंटीजन बांधता है और पता लगाने की रेखा पर एक लाल रंग विकसित करता है ।
हाल ही में, हमने प्राकृतिक उत्पादों के खिलाफ मोनोक्लोनल एंटीबॉडी उत्पादन की प्रक्रिया19वर्णित की है। इस काम में, हमने तेजी से, साइट पर पता लगाने के लिए तैयार एंटी-एसएसडी एमए20 के आधार पर एक उपन्यास पार्श्व प्रवाह इम्यूनोसे विकसित किया। परिणामों से संकेत मिलता है कि इम्यूनोक्रोमेटोग्राफी परख प्राकृतिक उत्पाद-व्युत्पन्न यौगिकों का पता लगाने के लिए एक अनिवार्य और सुविधाजनक उपकरण है।
इम्यूनोक्रोमेटोग्राफी परख का चित्र 1 योजनाबद्ध आरेख(ए)सैंडविच इम्यूनोक्रोमेटोग्राफिक टेस्ट स्ट्रिप्स। (ख)अप्रत्यक्ष प्रतिस्पर्धी प्रतिरक्षा क्रोमेग्राफिक टेस्ट स्ट्रिप्स। इस आंकड़े को झांग एट अलसे संशोधित किया गया है . , २०१८21। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस काम में, हम प्राकृतिक उत्पाद-व्युत्पन्न छोटे अणुओं के खिलाफ एमएबी की तैयारी के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। आवश्यक कदम और प्रक्रिया में ध्यान देने की जरूरत मामलों को रेखांकित किया गया है, और ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को केंद्रीय विभागों से संबद्ध उच्च शिक्षा संस्थानों के मौलिक अनुसंधान कोषों के लिए विशेष कोष द्वारा समर्थित किया गया था । हम चीनी चिकित्सा के बीजिंग विश्वविद्यालय के शास्त्रीय पर्चे बुनियादी अनुसंधान टीम के समर्थन की सराहना करते हैं ।
Materials
| Chloroauric acid solution (HAuCl4) | Tianjin Fu Chen Chemical Reagents Factory | JY-SJ102 | |
| bovine serum albumin | AMRESCO | 332 | |
| centrifuge tube 15 mL | Corning | 430645 | |
| centrifuge tube 50 mL | Corning | 430828 | |
| ELISA plates, 96 well | NUNC | 655101 | |
| Filter paper | Sinopharm | H5072 | |
| Glass fibre membranes | Jieyi | XQ-Y6 | |
| goat-anti-mouse IgG antibody | applygen | C1308 | |
| Nitrocellulose membranes | Millipore | millipore 180 | |
| ovalbumin | Beijing BIODEE | 5008-25g | |
| PEG20000 | Sigma Aldrich | RNBC6325 | |
| Pipette 10mL | COSTAR | 4488 | |
| Pipette 25mL | FALCON | 357525 | |
| semi-rigid PVC sheets | Jieyi | JY-C104 | |
| Sodium citrate | Beijing Chemical Works | C1034 | |
| sodium periodate | Sinopharm Chemical | BW-G0008 | |
| Sulfo-GMBS | Perbio Science Germany | 22324 | |
| TipOne Tips 1,000 µL | Starlab | S1111-2021 | |
| Tris-HCl | Solarbio | 77-86-1 | |
| TWEEN 20 | Solarbio | 9005-64-5 |
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