यह प्रोटोकॉल एक सक्रिय रूप से अनुबंध कार्डियक ट्रैबेकुला एक्स वीवोसे सारकोमेरे, कैल्शियम और स्थूल ज्यामितीय डेटा का संग्रह प्रस्तुत करता है। ये एक साथ माप तीन इमेजिंग तौर-तरीकों के एकीकरण से संभव होते हैं।
हृदय की मांसपेशी में, इंट्रासेलुलर सीए2 + क्षणिक संकुचन माइफलामेंट को सक्रिय करते हैं, जिससे संकुचन, स्थूल छोटा और ज्यामितीय विरूपण होता है। इन घटनाओं के बीच आंतरिक संबंधों की हमारी समझ सीमित रही है क्योंकि हम मांसपेशियों के अंदर न तो ‘देख’ सकते हैं और न ही उत्तेजना-संकुचन गतिशीलता की स्थानिक-लौकिक प्रकृति को ठीक से ट्रैक कर सकते हैं। इन समस्याओं को हल करने के लिए, हमने एक उपकरण का निर्माण किया है जो इमेजिंग तौर-तरीकों के एक सूट को जोड़ती है। विशेष रूप से, यह सारकोमरे लंबाई और ऊतक तनाव के स्थानीय परिवर्तनों को मापने के लिए एक उज्ज्वल क्षेत्र माइक्रोस्कोप को एकीकृत करता है, सीए2 + क्षणिक कल्पना करने के लिए फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप, और कार्डियक चक्र के समय-पाठ्यक्रम में ऊतक के ज्यामितीय परिवर्तनों को पकड़ने के लिए एक ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफ। हम यहां इमेजिंग इंफ्रास्ट्रक्चर और संबद्ध डेटा संग्रह फ्रेमवर्क पेश करते हैं। डेटा अलग रॉड की तरह ऊतक संरचनाओं से एकत्र कर रहे है trabeculae कार्नियाई के रूप में जाना जाता है । हमारे साधन में, स्थिति नियंत्रित प्लेटिनम हुक की एक जोड़ी एक पूर्व वीवो मांसपेशी नमूने के प्रत्येक छोर पकड़ जबकि यह लगातार पोषक तत्वों से भरपूर खारा समाधान के साथ superfused है । हुक स्वतंत्र नियंत्रण में हैं, मांसपेशियों की लंबाई और बल के वास्तविक समय नियंत्रण की अनुमति देते हैं। लंबाई के लिहाज से अनुवाद माइक्रोस्कोप इमेजिंग विंडो (540 माइक्रोन बाय 540 माइक्रोन) के सापेक्ष आकार से जुड़ी सीमाओं पर काबू पाने और एक ठेठ ट्राबेकुला (>2000 माइक्रोन) की लंबाई, नमूने की टुकड़े-टुकड़ी स्कैनिंग को सक्षम बनाता है। मांसपेशी कक्ष के दोनों छोर पर प्लेटिनम इलेक्ट्रोड उपयोगकर्ता-परिभाषित दर पर ट्राबेकुला को उत्तेजित करते हैं। हम स्थिर-राज्य स्थितियों के तहत पूरे नमूना हिल पुनर्निर्माण के लिए प्रत्येक इमेजिंग विंडो से डेटा को सिंक्रोनाइज़ करने के लिए एक ट्रिगर के रूप में उत्तेजना संकेत का फायदा उठाते हैं। इन ब्राइटफील्ड इमेजिंग डेटा के लिए छवि प्रसंस्करण तकनीकों को लागू करना ऊतक विस्थापन और सारकोमेरे लंबाई नक्शे प्रदान करता है। डेटा का ऐसा संग्रह, जब एक प्रयोग-मॉडलिंग पाइपलाइन में शामिल किया जाता है, तो शरीर विज्ञान और रोगविज्ञान में मांसपेशियों के संकुचन एकरूपता और विषमता की गहरी समझ प्रदान करेगा।
अलग – अलग हृदय की मांसपेशी ऊतकों की तैयारी का सुपरफ्यूजन कार्डियक आयनिक सक्रियण औरयांत्रिकी 1का अध्ययन करने के लिए एक मानक और व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला प्रोटोकॉल है। विशेष रूप से, वेंट्रिकुलर दीवारों से ट्राबेकुला, रॉड जैसी संरचनाओं के अलगाव ने संकुचन 2 की लंबाई-निर्भर सक्रियण, संकुचन3,4,और हृदय ऊतक के डायस्टोलिक चिपचिपाहट5 की लंबाई-निर्भर सक्रियता सहित घटनाओं का आकलन करने में सक्षम बनाया है। अलग-थलग ट्रैबेकुले को सुपरफ्यूज करने की इस तकनीक के सर्जक टेर कीर्स ने शुरू में सारकोमरे लंबाई2,5निर्धारितकरने के लिए सीए2 + माप और लेजर विवर्तन के लिए फ्लोरेसेंस इमेजिंग के संयोजन का उपयोग किया। इन शुरुआती अध्ययनों के बाद से, ब्राइटफील्ड माइक्रोस्कोपी छवियोंपर 2डी फास्ट फोरियर ट्रांसफॉर्म (एफएफटी) आधारित तकनीकों का उपयोग करके अधिक स्थानिक संकल्प के साथ सारकोमेरे लंबाई जानकारी निकालना तेजी से आम हो गया है। दो इमेजिंग सिस्टम सीए2 + रिलीज और सारकोमेरे लंबाई पर निर्भर बल उत्पादन के बीच अंतर्निहित संबंधों का आंशिक आकलन करने की अनुमति देते हैं।
कार्डियक मांसपेशी को फितीर्ण किया जाता है, जिसमें मोटी और मोटी तंतुओं से मिलकर संकुचन इकाइयों की अंतर्निहित श्रृंखला से जुड़े दृश्यमान बैंडिंग होती है। इन घटक फिलामेंट्स की बातचीत जो सारकोमर को बनाती है, बल उत्पादन को रेखांकित करती है, जो इस प्रकार शुरू होती है: एक डीपोलराइजिंग इलेक्ट्रिकल सिग्नल, या एक्शन क्षमता, कोशिका झिल्ली में वोल्टेज-निर्भर एल-टाइप सीए2 + चैनलों को खोलने का कारण बनती है; सीए2 + की आगामी सेलुलर आमद सीए2 + रिलीज 7 के रूप में जानी जाने वाली प्रक्रिया में एक इंट्रासेल्युलर सीए2 + स्टोर, सरकोप्लाज्मिक रेटिकुलम (एसआर) से सीए2+ की रिहाई को प्रेरित करतीहै; नैनोमोलर से माइक्रोमोलर रेंज तक इंट्रासेलुलर सीए2 + एकाग्रता में यह अचानक वृद्धि बल उत्पादन को सक्षम बनाती है; सीए2 + पंप लगातार सीए2 + को साइटोसोल से वापस एसआर और बाह्य कोशिकीय डिब्बे में बाहर निकालते हैं; जब इंट्रासेलर सीए2 + एकाग्रता नैनोमोलर रेंज में लौटती है, तो बल उत्पादन समाप्त हो जाता है, और मांसपेशियों में आराम मिलता है। बल उत्पादन के दौरान, घटक मोटी और पतली तंतुओं एक दूसरे पर स्लाइड । सारकोमेरे लंबाई ओवरलैप की सापेक्ष सीमा तय करती है और इसलिए, मांसपेशियों के बल उत्पादन की क्षमता मैक्रोस्कोपिक रूप से।
इस पेपर में, हम ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (OCT) को शामिल करने के लिए इन फ्लोरेसेंस-ब्राइटफील्ड इमेजिंग तकनीकों का विस्तार करते हैं। OCT हस्तक्षेप के भौतिक सिद्धांत का उपयोग करता है और मांसपेशियों के संकुचन विषमता को समझने के लिए ऊतक के ज्यामितीय विरूपण को जुटाने में सक्षम है8. हमारा डिवाइस(चित्रा 1)एक स्पेक्ट्रल-डोमेन OCT (एसडी-OCT) सिस्टम का उपयोग करता है। एसडी-OCT में, एक बीम स्प्लिटर एक ब्रॉडबैंड शॉर्ट जुटना-लंबाई सुपरल्यूमिनेसेंट डायोड से प्रकाश को संदर्भ और माप हथियारों में विभाजित करता है। संदर्भ शाखा में एक निश्चित दर्पण होता है, और माप शाखा में प्रकाश को चलाने के लिए 2डी-गैलेवनोमीटर होता है। नमूने से प्रकाश बैकस्कैटर एकत्र किया जाता है और हस्तक्षेप पैटर्न बनाने के लिए संदर्भ शाखा में परावर्तित प्रकाश के साथ हस्तक्षेप करता है। स्पेक्ट्रल फ्रिंज की आवृत्ति में गहराई की जानकारी एन्कोड की जाती है। जानकारी निकालने के लिए, सिग्नल को स्पेक्ट्रोमीटर से गुजरना पड़ता है और परिणाम पर एक इनवर्स एफएफटी लागू होता है। इसी 1D सिग्नल विभिन्न गहराई पर संरचनाओं का प्रतिनिधित्व करता है, जो अपवर्तक सूचकांक9 (ए-स्कैन) में परिवर्तन के अनुरूप है। एक ही धुरी में लेजर स्टीयरिंग करके, एक ब्याज के नमूने (बी स्कैन) के एक पार अनुभाग का निर्माण कर सकते है और, इसी तरह, शेष धुरी में एक कदम वार पैटर्न में प्रक्रिया को दोहराने के द्वारा, एक त्रि-आयामी छवि (सी-स्कैन) उत्पन्न किया जा सकता है । विस्तार से, कोई भी बाहरी ट्रिगर के आधार पर दोहराने वाले समय-अलग विषय के लिए एक टुकड़े पर बी-स्कैन की एक श्रृंखला एकत्र कर सकता है और एक त्रि-आयामी स्कैन उत्पन्न करने के लिए दोहरा सकता है, जो एक समय-अलग प्लानर छवि10का प्रतिनिधित्व करता है।
तीन इमेजिंग सिस्टम को एकीकृत करने में, हमने निम्नलिखित दो सिद्धांतों पर विचार किया है। सबसे पहले, इमेजिंग सेंसर एक वैकल्पिक इमेजिंग मोडलिटी से प्रकाश का पता नहीं लगाना चाहिए, और दूसरा, भौतिक डिजाइन में कम से कम तीन एक साथ इमेजिंग विमानों के लिए मुफ्त जगह होनी चाहिए। पहली आवश्यकता को संबोधित करने के लिए, ब्राइटफील्ड माइक्रोस्कोप एक उल्टे विन्यास में नमूना रोशन करने के लिए एक 660 एनएम तरंग दैर्ध्य एलईडी का उपयोग करता है। फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप एक एपिफ्लोरेसेंस कॉन्फ़िगरेशन में है जहां उत्सर्जित प्रकाश के उत्तेजन और संग्रह दोनों के लिए एक ही उद्देश्य लेंस का उपयोग किया जाता है। उत्तेजन प्रकाश में 340 एनएम और 380 एनएम के बीच की तरंगदैर्ध्य होती है, और एक फोटोमल्टीपीयर ट्यूब (पीएमटी) 510 एनएम की तरंगदैर्ध्य पर उत्सर्जित प्रकाश को मापता है। डिक्रोइक मिरर की एक जोड़ी इन दो ऑप्टिकल रास्तों को विपरीत माप(चित्रा 2)के साथ हस्तक्षेप किए बिना एक ही भौतिक पदचिह्न साझा करने में सक्षम करती है। अंत में, OCT 840 एनएम की केंद्रीय तरंगदैर्ध्य के साथ ब्रॉडबैंड (100 एनएम स्पेक्ट्रल चौड़ाई) प्रकाश का उपयोग करता है, जो अन्य दो तौर-तरीकों से अलग है। अक्टूबर के लिए उपयोग किए जाने वाले प्रकाश की कम सामंजस्य प्रकृति के कारण, ब्राइटफील्ड-फ्लोरेसेंस स्रोतों से कोई भी बिखरे हुए प्रकाश हस्तक्षेप पैटर्न में योगदान नहीं देगा जो गहराई से जानकारी को एन्कोड करता है। दूसरी आवश्यकता के लिए, केशिका ट्यूब के लिए आवास डिजाइन में नमूने के पूर्वकाल, अवर और बेहतर विमानों के लिए सुलभ ऑप्टिकल रास्ते हैं। प्रयोगों के दौरान, दो प्लेटिनम हुक ऑक्सीजनयुक्त क्रेब्स-हेन्सेलिट (केएच) समाधान के साथ एक केशिका ट्यूब के भीतर एक ट्रैबेकुला पकड़ते हैं। अक्टूबर का गैलेवनोमीटर हेड तीसरे ऑर्थोगोनल ऑप्टिकल प्लेन(चित्रा 3)का लाभ उठाने के लिए ब्राइटफील्ड-फ्लोरेसेंस इमेजिंग पाथवे के लिए ऑर्थोगोनली उन्मुख है।
यह पेपर कैल्शियम, सारकोमेरे लंबाई और मांसपेशियों की ज्यामिति को एक साथ इमेजिंग करने में सक्षम डिवाइस के निर्माण के लिए डिजाइन विचारों को रेखांकित करता है। इन माप क्षमताओं को प्रदर्शित करने के लिए, हम एक वेंट्रिकुलर ट्रैबेकुला को अलग करने की प्रक्रिया का वर्णन करते हैं, आवश्यक बफर समाधानों की तैयारी, एक पूर्व वीवो ट्राबेकुला की हैंडलिंग और फ्लोरेसेंस लोडिंग में शामिल महत्वपूर्ण कदमों के साथ। अंत में, यह पेपर डेटासेट को अधिक उपयोगी दृश्यों में अनुवाद करने के लिए आवश्यक प्रक्रियाओं को रेखांकित करता है।
इस अध्ययन में, हम एक विन्यास पेश करते हैं जो ब्राइटफील्ड, फ्लोरेसेंस और ऑक्ट इमेजिंग के संयोजन वाले तीन ऑप्टिकल सिस्टम की असेंबली को सक्रिय रूप से अनुबंधित पूर्व वीवो कार्डियक ट्राबेकुला(चित्रा 1 और चित्रा 2)से डेटा इकट्ठा करने में सक्षम बनाता है। इस तरह के एक करवाया एकीकरण माप कक्ष(चित्रा 3)के डिजाइन के कारण संभव है ताकि ऑकक्ट की ऑर्थोगोनल व्यवस्था को ब्राइटफील्ड-फ्लोरेसेंस एक्सिस में सक्षम बनाया जा सके। मांसपेशियों में बढ़ते सिस्टम हृदय की मांसपेशी उत्तेजना-संकुचन गतिशीलता की विशेषता में प्रमुख सूचकांकों के एक साथ मात्रा की सफलता में एक समान रूप से महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। इसकी नवीनता मांसपेशियों के यांत्रिक प्रदर्शन(चित्र 6)के लिए कोई स्पष्ट अशांति के साथ मांसपेशियों की स्कैनिंग प्रक्रियाओं को सक्षम करने में रहता है । बल माप के लिए संयुक्त इमेजिंग विन्यास और मोटराइज्ड-हुक सिस्टम के साथ, यह प्रणाली सीए2 + क्षणिक, विस्थापन और सारकोमेरे लंबाई में क्षेत्रीय विषमता का मूल्यांकन कर सकती है, साथ ही चिकोटी(आंकड़े 7 और चित्र 8)के समय पाठ्यक्रम में एक करार ट्राबेकुला की स्थूल ज्यामितीय जानकारी के साथ।
कार्डियक अनुसंधान प्रयोगशालाओं के भीतर ब्राइटफील्ड-एपिफ्लोरेसेंस इमेजिंग सिस्टम की सर्वव्यापकता को देखते हुए, इन परिणामों का प्रजनन कुछ मामूली हार्डवेयर विचारों के साथ प्राप्त किया जा सकता है। यहां, हम ब्राइटफील्ड-एपिफ्लोरेसेंस और अक्टूबर के संयोजन के लिए इमेज-प्रोसेसिंग टूलकिट पेश करते हैं, जो अंतर्निहित संकुचन विषमता का विश्लेषण करने में आवश्यक है। अक्टूबर के एकीकरण के लिए एक अबाधित ऑप्टिकल पथ की आवश्यकता होती है, जबकि गेटेड इमेजिंग को उत्तेजना और अक्टूबर और ब्राइटफील्ड इमेजिंग कैमरा दोनों के बीच एक बाहरी ट्रिगर लाइन की आवश्यकता होती है, और मांसपेशियों के बढ़ते हुक जो माप कक्ष में नमूना ले जाने में सक्षम हैं। आवश्यक पोस्ट-प्रोसेसिंग सॉफ्टवेयर और विधियां स्वतंत्र रूप से उपलब्ध हैं। विशेष रूप से, उपयोग किया जाने वाला सेगमेंटेशन सॉफ्टवेयर, WEKA14,ओपन-सोर्स है। सामग्री अंक8,सारकोमेरे लंबाई, गेटेड वॉल्यूमेट्रिक इमेजिंग10,और जाल पीढ़ी कोड की मार्करलेस ट्रैकिंग की तकनीक इसी तरह सुलभ है और इसी लेखक के अनुरोध पर उपलब्ध कराई जा सकती है।
मांसपेशियों की व्यवहार्यता, फुरा-2 की इष्टतम लोडिंग, और छवि फोकस तीन स्तंभ हैं जो एक सफल प्रयोग की नींव बनाते हैं। संकुचन को रोकने के लिए बीडीएम युक्त विच्छेदन समाधान का उपयोग करना, सिरिंज में मांसपेशियों का परिवहन, समाधान का निरंतर ऑक्सीजन, और प्रयोग के दिन नए प्रयोगात्मक समाधान तैयार करना, सभी उच्च मांसपेशियों की व्यवहार्यता दर में योगदान देते हैं। फ्यूरा-2 AM के साथ ट्राबेकुला लोड करने से पहले, प्रत्येक स्थिति के लिए ऑटोफ्लोरेसेंस एकत्र किया जाना चाहिए क्योंकि यह मापा Ca2 + क्षणिक15पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव डाल सकता है। फुरा-2एएम लोडिंग समाधान का ऑक्सीजन डाई लोडिंग सहायता करने के लिए सर्फेक्टेंट प्लेओरोनिक-एफ 127 के आवश्यक समावेश से जटिल है। इस सर्फेक्टेंट की वजह से परिणामी अतिरिक्त बुलबुला गठन का मुकाबला करने के लिए, लोडिंग समाधान में एंटी-फोम की एक छोटी सी बूंद उपयोगकर्ता को ऑक्सीजन दर बढ़ाने की अनुमति देती है, जिससे इस संभावना में सुधार होता है कि ट्रैबेकुला लोडिंग प्रक्रिया में कार्यात्मक व्यवहार्यता बनाए रखता है। अंत में, इमेजिंग फोकस उज्ज्वल क्षेत्र और फ्लोरेसेंस जानकारी के शोर अनुपात के संकेत को अधिकतम करने के लिए मांसपेशियों की लंबाई के साथ एक समान होना चाहिए।
यहां प्रस्तुत तरीकों के साथ विचार करने के लिए दो सीमाएं हैं। सबसे पहले फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप का स्थानिक संकल्प है। जबकि अक्टूबर और ब्राइटफील्ड इमेजिंग के स्थानिक संकल्प अधिक हैं, फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप का संकल्प 540 माइक्रोन इमेजिंग विंडो द्वारा 540 माइक्रोन के भीतर कैप्चर की गई मात्रा से फ्लोरेसेंस के अभिन्न अंग तक सीमित है। पीएमटी के बजाय पीएमटी के बजाय फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप के स्थानिक संकल्प को बढ़ाने की गुंजाइश है, ताकि सिग्नल टू शोर रेशियो16की कीमत पर फ्लोरेसेंस सिग्नल पर कब्जा किया जा सके । दूसरा ट्राबेकुला का व्यास है जिसका अध्ययन मापने योग्य सारकोमेरे लंबाई और ज्यामितीय गहराई के संदर्भ में किया जा सकता है। कंप्यूटिंग सारकोमेरे लंबाई के लिए खिड़की-FFT दृष्टिकोण बेहतर स्थानिक संकल्प के लाभ का फायदा उठाता है, लेकिन कम मजबूती(चित्रा 8 डी)के साथ जुड़ा हुआ है । ऐसे मामलों में जहां टर्बिड या बड़े व्यास वाले ट्रैबेकुले का अध्ययन किया जाना है, बड़े ऊतक नमूनों में सारकोमरिक बैंडिंग से जुड़े कम विपरीत के कारण एफएफटी की समाधानशीलता बहुत कम हो जाएगी। इसी तरह, अक्टूबर के भीतर, ३०० माइक्रोन से अधिक की इमेजिंग गहराई से बैक-रिफ्लेक्शन विभाजन चरण के दौरान हल करने के लिए बहुत कमजोर होंगे । इसलिए, हमारी तकनीक 300 माइक्रोन से कम व्यास के ट्राबेकुला तक सीमित है। हालांकि, बड़े व्यास के नमूनों का अध्ययन करने की सिफारिश नहीं की जाती है क्योंकि उत्तेजना17की उच्च दरों के दौरान मांसपेशियों के कोर के प्रसार ऑक्सीजन के साथ समस्या हो सकती है।
हमारी विधि स्वस्थ और रोगग्रस्त मांसपेशियों में मांसपेशियों की ज्यामिति के सहयोग से आयनिक यांत्रिक कार्य के मूल्यांकन को सक्षम बनाती है, जो हृदय की मांसपेशी फिजियोलॉजी, रोगविज्ञान और फार्माकोलॉजी को समझने के लिए एक शक्तिशाली दृष्टिकोण प्रदान करता है। यहां उल्लिखित छवि-प्रसंस्करण पाइपलाइन डेटा निकालती है जो संकुचन विषमता की गहरी समझ जुटाने के लिए निर्णायक होगी। इस तरह के एक समृद्ध डेटासेट की क्षमता को पूरी तरह से महसूस करने का एक अवसर गणितीय मॉडलों के निर्माण में है जो इन डेटा को एकीकृत और व्याख्या करते हैं, और भविष्यवाणियों को बनाने के लिए जो हमारे डिवाइस का उपयोग करके प्रयोगात्मक रूप से परीक्षण किया जा सकता है।
The authors have nothing to disclose.
इस अध्ययन को ऑकलैंड विश्वविद्यालय (जेडी और एमसी को सम्मानित) से डॉक्टरेट छात्रवृत्ति द्वारा वित्त पोषित किया गया था, सर चार्ल्स हर्कस हेल्थ रिसर्च फैलोशिप (20/011 और 21/116) न्यूजीलैंड के स्वास्थ्य अनुसंधान परिषद से (केटी को जे-सीएच को सम्मानित किया गया, क्रमशः), नेशनल हार्ट फाउंडेशन द्वारा प्रदान की गई एक डॉक्टरेट छात्रवृत्ति (ए. ए. को सम्मानित), मार्सडन फास्ट-स्टार्ट अनुदान (UOA1504 और UOA1703) रॉयल सोसायटी ऑफ न्यूजीलैंड से (जे-सीएच और केटी को सम्मानित किया गया, क्रमशः), और न्यूजीलैंड के रॉयल सोसायटी से एक जेम्स कुक रिसर्च फैलोशिप (एटी को सम्मानित) । इस उपकरण का मूल विकास न्यूजीलैंड के रॉयल सोसायटी (एटी और पीएन को सम्मानित) से मार्सडन ग्रांट (11-यूओए-199) द्वारा वित्त पोषित किया गया था।
2,3-Butanedione monoxime | Acros Organics | 150375000 | |
20× microscope lens | Nikon | CFI Super Fluor 20× | NA 0.75 |
2D Galvanometer | Thorlabs | GVSM002/M | |
50-50 beam splitter | Thorlabs | FC850-40-50-APC | |
90-10 beam-splitter | Thorlabs | TW850R2A2 | |
Analogue input module | National Instruments | NI-9205 | Records the PMT signal at 200 kHz |
Brightfield imaging light source | CoolLED | PE-2 | 660 nm LAM |
Broadband light source | Superlum | Broadlighter-840 | |
CaCl2 | Sigma-Aldrich | C4901 | |
Cameralink card | National Instruments | NI-1429 | Brightfield imaging frame grabber |
Carbogen 5 | BOC | Gas code: 181 | |
Condensor lens | Nikon | LWD 0.52 | |
D(+)-Glucose | Merck | 108337 | |
DAQ | National Instruments | NI-6259 | Triggers the galvanometer movement |
Dichroic mirror 1 | Semrock | FF409-Di03 | |
Dichroic mirror 2 | Semrock | FF552-Di02 | |
Diffraction grating | Wasatch Photonics | 1200 lines/mm @840 nm | |
Dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | 276855 | |
Direct-Q 3 UV System | Merck Millipore | ZRQSVR3WW | Distilled water machine |
Dry bath | Corning | 6875-SB | LSE digital dry bath |
FIJI | ImageJ | Open-source image processing software | |
Fura-2AM pentapotassium salt | Thermofisher | F14186 | |
Hardware FPGA card | National Instruments | NI-7813R | Also controls the triggering of the brightfield capture |
Heparin | Pfizer | 61024 | |
HEPES | PanReac AppliChem | A1069 | |
Inverted microscope | Nikon | TI-DH illumination pillar | |
Isofluorane | MedSource | VAPDRUGISO250 | |
KCl | Sigma-Aldrich | P9541 | |
KH2PO4 | Sigma-Aldrich | P5655 | |
Line-scan camera | Basler | spL2048-70km | Spectrometer camera |
Magnetic stirrer | IKA | 3810000 | RCT basic |
Matlab | Mathworks | Data processing code | |
MgCl2 | Sigma-Aldrich | M8266 | |
MgSO4.7H2O | Sigma-Aldrich | M1880 | |
NaCl | Sigma-Aldrich | 71376 | |
NaH2PO4.2H2O | Sigma-Aldrich | 71505 | |
NaHCO3 | Sigma-Aldrich | S6014 | |
OCT FPGA card | National Instruments | NI-1483R | |
Oxygen tank | BOC | Gas code: 100D | |
pH meter | Mettler Toledo | MP220 | |
Photomultiplier tube | Hamamatsu | H7422-20 | |
Powerload | Thermofisher | P10020 | |
Superluminescent diode | Broadlighter | D-840 | |
Transimpedance amplifier | Custom | ||
Tris(hydroxymethyl)amino-methane | Sigma-Aldrich | 252859 | |
Wistar rat | Vernon Jansen Unit | 8 – 10 weeks | |
Xenon arc lamp | Sutter Instrument | DG-4 | Lambda DG-4 |