Dissociation mécanique et enzymatique combinée du tissu hippocampique du cerveau de la souris

Madison Trujillo; Taylor McElroy; Taurean Brown; Pilar Simmons; Fabio Ntagwabira; Antiño R. Allen

doi:10.3791/63007

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Article de méthode

Dissociation mécanique et enzymatique combinée du tissu hippocampique du cerveau de la souris

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DOI :

10.3791/63007

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21 octobre 2021

Madison Trujillo¹^,²^,³ , Taylor McElroy¹^,²^,³ , Taurean Brown¹^,²^,³ , Pilar Simmons¹^,² , Fabio Ntagwabira¹^,²^,³ , Antiño R. Allen¹^,²^,³

¹Division of Radiation Health, University of Arkansas for Medical Sciences, ²Department of Pharmaceutical Sciences, University of Arkansas for Medical Sciences, ³Neurobiology & Developmental Sciences, University of Arkansas for Medical Sciences

Dans cet article

Résumé

Ce protocole de dissociation des cellules neurales est destiné aux échantillons avec une faible quantité de matière première et donne une suspension unicellulaire hautement viable pour l’analyse en aval, avec des étapes de fixation et de coloration facultatives.

Résumé

Ce protocole de dissociation neuronale (une adaptation du protocole accompagnant un kit commercial de dissociation du cerveau adulte) optimise le traitement des tissus en préparation d’une analyse détaillée en aval telle que la cytométrie en flux ou le séquençage unicellulaire. La dissociation neuronale peut être réalisée par dissociation mécanique (comme l’utilisation de filtres, de techniques de hachage ou de trituration par pipette), la digestion enzymatique ou une combinaison de ceux-ci. La nature délicate des cellules neuronales peut compliquer les efforts pour obtenir la véritable suspension unicellulaire hautement viable avec un minimum de débris cellulaires nécessaires à l’analyse unicellulaire. Les données démontrent que cette combinaison de dissociation mécanique automatisée et de digestion enzymatique donne systématiquement une suspension unicellulaire hautement viable (>90%), surmontant les difficultés susmentionnées. Bien que quelques-unes des étapes nécessitent une dextérité manuelle, ces étapes réduisent la manipulation des échantillons et la perte potentielle de cellules. Ce manuscrit détaille chaque étape du processus pour équiper d’autres laboratoires afin de dissocier avec succès de petites quantités de tissu neural en préparation d’une analyse en aval.

Introduction

L’hippocampe a été décrit pour la première fois par un anatomiste bolognais, Giulio Cesare Aranzio, dans les années 1500¹. En nommant cette nouvelle structure, Aranzio s’est probablement inspiré de sa ressemblance étrange avec l’hippocampe du genre Hippocampe¹. L’hippocampe est impliqué dans les réponses au stress, mais est largement connu pour son rôle dans l’apprentissage et la mémoire. Plus précisément, l’hippocampe est responsable de l’encodage et de la récupération de la mémoire déclarative et spatiale¹.

L’hippocampe, ou hippocampe proprement dit, est divi....