Ici, nous avons utilisé la coloration rouge alizarine pour montrer que l’exposition à l’acétate de plomb provoque un changement de masse osseuse chez les larves de poisson zèbre. Cette méthode de coloration peut être adaptée à l’étude de la perte osseuse chez les larves de poisson zèbre induite par d’autres substances toxiques dangereuses.
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Article de méthode
Utilisation de la coloration rouge Alizarin pour détecter la perte osseuse induite chimiquement chez les larves de poisson zèbre
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Dans cet article
Résumé
Résumé
La perte osseuse induite chimiquement due à l’exposition au plomb (Pb) pourrait déclencher une série d’effets néfastes sur les systèmes squelettiques humains et animaux. Cependant, les effets et les mécanismes spécifiques chez le poisson zèbre restent flous. Le rouge d’alizarine a une forte affinité pour les ions calcium et peut aider à visualiser l’os et illustrer la masse minérale squelettique. Dans cette étude, nous avons cherché à détecter la perte osseuse induite par l’acétate de plomb (PbAc) chez les larves de poisson zèbre en utilisant la coloration rouge alizarine. Les embryons de poisson zèbre ont été traités avec une série de concentrations de PbAc (0, 5, 10, 20 mg / L) entre 2 et 120 h après la fécondation. Une coloration du squelette entier a été effectuée sur les larves 9 jours après la fécondation, et la surface totale colorée a été quantifiée à l’aide du logiciel ImageJ. Les résultats ont indiqué que les tissus minéralisés étaient colorés en rouge et que la zone colorée diminuait considérablement dans le groupe exposé au PbAc, avec un changement dose-dépendant de la minéralisation osseuse. Cet article présente un protocole de coloration pour étudier les changements squelettiques dans les défauts osseux induits par PbAc. La méthode peut également être utilisée chez les larves de poisson zèbre pour la détection de la perte osseuse induite par d’autres produits chimiques.
Introduction
Des études récentes ont confirmé que l’ostéoporose due aux glucocorticoïdes, aux inhibiteurs de l’aromatase et à la consommation excessive d’alcool est courante 1,2. Le plomb (Pb) est un métal toxique présent dans les plantes, le sol et les milieux aquatiques3. Bien que les effets néfastes du plomb sur le corps humain aient attiré beaucoup d’attention, son impact irréversible sur les os doit être étudié plus avant. L’intoxication au plomb provoque un large éventail de changements pathologiques dans le squelette en développement et chez l’adulte, affectant les activités normales de la vi....
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Protocole
Toutes les procédures animales décrites ici ont été examinées et approuvées par l’Animal Care Institute du comité d’éthique de l’Université Soochow.
1. Pisciculture et collecte d’embryons 14
- Nourrissez les poissons trois fois par jour; s’assurer que le poisson zèbre est maintenu à 28,5 ± 0,5 °C avec un cycle lumière/obscurité de 14:10 h.
- Séparer les poissons adultes mâles et femelles par des panneaux d’isolement dans des bassins de frai à un ratio mâle/femelle de 2:1 le soir.
- Le lendemain matin, retirez les planches d’isolement à 9h00 et récupérez les embryons 2 h plus t....
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Résultats
La coloration rouge alizarine est une méthode sensible et spécifique pour mesurer les changements dans la minéralisation osseuse chez les larves de poisson zèbre. Dans cette étude, nous avons observé que le PbAc avait des effets néfastes sur les larves de poisson zèbre, notamment la mort, la malformation, la diminution de la fréquence cardiaque et le raccourcissement de la longueur corporelle. De plus, les zones squelettiques minérales des larves de poisson zèbre ont été évaluées pour examiner la perte osseuse induite pa.......
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Discussion
Le poisson zèbre est un modèle approprié pour étudier les maladies métaboliques osseuses. Comparés aux modèles de rongeurs, les modèles de poisson zèbre sont relativement rapides à établir et la mesure de la gravité de la maladie est plus facile. Chez les larves de poisson-zèbre de type sauvage, la minéralisation du squelette de la tête se produit à 5 dpf et du squelette axial à 7 dpf15. Ainsi, les os crâniens tels que PS, OP, CB et NC sont bien développés à 9 dpf. Une fois les larves complètement.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (81872646; 81811540034; 81573173) et le développement du programme académique prioritaire des établissements d’enseignement supérieur du Jiangsu (PAPD).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 1 M Tris-HCl (pH = 7,5) | Solarbio, Pékin, Chine | 21 | pour retenir |
| 4 % de paraformaldéhyde Fix Solution | BBI, Shanghai, Chine | 14 | tissus fixateurs |
| 10x tampon PBS | BBI, Shanghai, Chine | 15 | pour fixer |
| 35 % H2< / sub>O2< / sub> | Yonghua, Jiangsu, Chine | 8 | enlever le pigment |
| 50 mL Tube centrifuge | AKX, Jiangsu, Chine | 4 | |
| 95 % Éthanol anhydre | Enox, Jiangsu, Chine | 2 | décoloration |
| rouge d’alizarine (pureté 99,5 %) | Solarbio, Pékin, Chine | 1 | coloration |
| Incubateur biochimique | Yiheng, Shanghai, Chine | 3 | élevage d’embryons de poisson-zèbre |
| Échelle électronique | Sartorius, Allemagne | 5 | pesée des matières premières solides |
| Glycérine (pureté 99,5 %) | BBI,Shanghai,Chine | 7 | stockage du poisson coloré |
| ImageJ (logiciel) | USA | 9 | analyse numérique |
| KOH (pureté 99,9 %) | Sigma,Amérique | 10 | solution de blanchiment |
| Acétate de plomb trihydraté (pureté 99,5 %) | Aladdin,Shanghai,Chine | 11 | |
| MgCl2 (Pureté 99,9 %) | Aladdin,Shanghai,Chine | 12 | solution de nettoyage |
| NIS-Elements F (logiciel) | Nikon, Japon | 13 | observation et prise de photos |
| Pipe | AKX, Jiangsu, Chine | 18 | enlèvement des embryons et des plaques de solution |
| (24 puits) | Corning, Amérique | 17 | récipient pour la coloration des plaques d’embryons |
| (6 puits) | Corning, Amérique | 16 | récipient pour la reproduction des embryons |
| Table vibrante | Beyotime, Chine | 19 | mélange de la solution |
| Stéréomicroscope | Nikon, Japon | 20 | observation et prise de photos |
| Poisson zèbre | Centre d’expérimentation du poisson zèbre de l’Université Soochow, Suzhou, Chine | 22 | animal expérimental |
Références
- Compston, J., et al. Recommendations for the registration of agents for prevention and treatment of glucocorticoid-induced osteoporosis: an update from the Group for the Respect of Ethics and Excellence in Science. Osteoporosis International. 19 (9), 1247-1250 (2008).
- Rachner, T. D., Gobel, A., Jaschke, N. P., Hofbau....
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Réimpressions et autorisations
