Analyse par microscopie vidéo à grande vitesse pour le diagnostic de première ligne de la dyskinésie ciliaire primaire

Summary

L’analyse par microscopie vidéo à haute vitesse est un outil relativement facile à réaliser, rapide, rentable et, entre des mains expérimentées, un outil considérablement fiable pour le diagnostic de première ligne de la dyskinésie ciliaire primaire, qui devrait être disponible dans tous les centres impliqués dans le diagnostic et le traitement des maladies pulmonaires graves.

Abstract

La dyskinésie ciliaire primitive (DCP) est un trouble congénital principalement hérité d’un trait autosomique récessif. Le trouble provoque une perturbation du mouvement des cils, entraînant une altération grave de la clairance mucociliaire (MCC). Si elle n’est pas diagnostiquée ou diagnostiquée trop tard, la maladie entraîne le développement d’une bronchectasie et de graves dommages aux poumons plus tard dans la vie. La plupart des méthodes de diagnostic de la PCD prennent beaucoup de temps et nécessitent des ressources économiques considérables pour les établir. L’analyse par microscopie vidéo à grande vitesse (HSVMA) est le seul outil de diagnostic permettant de visualiser et d’analyser les cellules respiratoires vivantes avec des cils battants in vitro. Il est rapide, rentable et, entre des mains expérimentées, très fiable en tant qu’outil de diagnostic pour PCD. En outre, les mesures diagnostiques classiques telles que la microscopie électronique à transmission (TEM) ne sont pas applicables à certaines mutations car les changements morphologiques sont absents.

Cet article décrit le processus de collecte des cellules épithéliales respiratoires, la préparation ultérieure de l’échantillon et le processus de HSVMA. Nous décrivons également comment les cellules brossées peuvent être maintenues indemnes et battues avec succès en les gardant dans un milieu nourrissant pour le stockage et le transport vers le site d’investigation dans les cas où une clinique ne possède pas l’équipement nécessaire pour effectuer l’HSVMA. Sont également montrées des vidéos avec des schémas de battement pathologiques de patients présentant une mutation du gène de la chaîne lourde 11 du bras dynéine (DNAH11), qui ne peut pas être diagnostiqué avec TEM; le résultat d’un HSVMA non concluant dû à une infection des voies respiratoires supérieures, ainsi que d’un brossage infructueux avec superposition de globules rouges. Avec cet article, nous aimerions encourager toutes les unités traitant des patients en pneumologie et des maladies pulmonaires rares à effectuer L’HSVMA dans le cadre de leurs diagnostics quotidiens de routine pour la PCD ou à envoyer les échantillons à un centre spécialisé dans la réalisation de HSVMA.

Introduction

La dyskinésie ciliaire primitive (DCP) est une maladie génétique héréditaire rare qui provoque des perturbations dans le mouvement des cils battants. S’il n’est pas diagnostiqué, il entraîne de graves lésions pulmonaires plus tard dans la vie en raison d’une altération grave du MCC. Dans le passé, sa prévalence a été estimée entre 1:4 000 et 50 000. En raison de l’amélioration constante des diagnostics et d’une prise de conscience croissante de la maladie, les mises à jour sur la prévalence de la PCD suggèrent qu’elle pourrait être beaucoup plus courante et probablement comprise entre 1: 4 000 et 20 000 au lieu de ^1,2

Protocol

Énoncé d’éthique :

Cette étude a été approuvée par le comité d’éthique local (69/2017) et a été menée conformément à la déclaration d’Helsinki.

1. Collecte et transport des cellules épithéliales respiratoires

1. Brossage
   1. Avant le brossage, administrer un traitement de deux semaines d’acide amoxicilline-clavulanique par voie orale au patient pour éradiquer les biofilms interférant avec la fonction des cils. Assurez-vous que l’antibiotique est arrêté 2 jours avant la procédure.
   2. Pour diminuer une superposition de matière muqueuse sur les bandelettes de cellules épithéliales....

Results

La vidéo 1 et la vidéo 2 montrent un contrôle normal où le CBF et le CBP se situent dans la plage normale (voir la figure 1). La vidéo 3, la vidéo 4, la vidéo 5 et la vidéo 6 représentent deux cas de patients atteints de PCD présentant une mutation homozygote du gène DNAH11 (c.2341G > A; p. Glu781Lys)³. Ces vidéos représentatives ont été c.......

Discussion

Ici, le processus de diagnostic de la PCD à l’aide de HSVMA est décrit et discuté à la lumière des diagnostics de première ligne. Bien qu’il soit relativement facile à établir, rentable¹¹ et qu’il s’agisse d’une méthode fiable entre des mains expérimentées¹², le HSVMA n’est pas une mesure diagnostique sans pièges. Un CBF et un CBP anormaux peuvent être dus à une infection secondaire, entraînant une inflammation de l’épithélium broncho-respiratoire¹⁵,.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Amoxiciline-acide clavulanique	Orion Oyj		40 mg/kg divisé en 2 prises/jour, pour les adultes 875/125 mg 1 comprimé x2/jour
Logiciel de l’appareil photo	Hamamatsu		HCI Image
Compresse froide	n’importe quelle		pour la conservation et le transport
Microscope interférentiel	différentiel Carl Zeiss		Microscope inversé, observateur cellulaire
Numérique Élevé Caméra vidéo de vitesse	Hamamatsu		Orca Flash 4.0, appareil photo numérique type C11440
Dulbecco´ ; s Milieu Eagle modifié	Thermo Fisher	10565018	milieu de culture basocellulaire
Tube Eppendorf Tube	Eppendorf	30120086	1,5 mL
Plat à micropuits à fond en verre Cuvette	MatTek	P35G-1.5-14-C	pour la microscopie
Unité de chauffage	Carl Zeiss/PeCon	810-450001	Éléments d’incubation Carl Zeiss avec contrôle
de température PeCon TempModule S1Brossette interdentaire 0,6 mm	Doft	872267	Brossette interdentaire sur un long fil avec poignée réutilisable et capuchon dans un sac zipbag
Objectif	Carl Zeiss		100x/1.46, &alpha ; Objectif Plan-Apochromat DIC
Petite boîte en polystyrène avec couvercle	pour le		transport