मिट्टी के नमूनों से एंटोमोपैथोजेनिक कवक को अलग करने के तरीकों की तुलना
Summary
एंटोमोपैथोजेनिक कवक कालोनियों को उष्णकटिबंधीय मिट्टी के नमूनों से अलग किया जाता है, जो टेनेब्रियो चारा, गैलेरिया चारा, साथ ही साथ चयनात्मक कृत्रिम माध्यम का उपयोग करते हैं, यानी, क्लोराम्फेनिकोल, थियाबेन्डाजोल और साइक्लोहेक्सिमाइड (सीटीसी माध्यम) के साथ पूरक खमीर निकालने से समृद्ध आलू डेक्सट्रोज आगर।
Abstract
वर्तमान अध्ययन का लक्ष्य मिट्टी के नमूनों से एंटोमोपैथोजेनिक कवक (ईपीएफ) को अलग करने के लिए कीट चारा बनाम कृत्रिम चयनात्मक माध्यम का उपयोग करने की प्रभावशीलता की तुलना करना है। मिट्टी सूक्ष्मजीवों के लिए एक समृद्ध आवास है, जिसमें ईपीएफ विशेष रूप से जेनेरा मेटारिज़ियम और ब्यूवेरिया से संबंधित है, जो आर्थ्रोपोड कीटों को विनियमित कर सकता है। कवक पर आधारित जैविक उत्पाद मुख्य रूप से कृषि आर्थ्रोपोड कीट नियंत्रण के लिए बाजार में उपलब्ध हैं। फिर भी, उच्च स्थानिक जैव विविधता के बावजूद, दुनिया भर में वाणिज्यिक जैव उत्पादों में केवल कुछ उपभेदों का उपयोग किया जाता है। वर्तमान अध्ययन में, 524 मिट्टी के नमूनों को आलू डेक्सट्रोज आगर पर सुसंस्कृत किया गया था, जो क्लोरैम्फेनिकोल, थियाबेन्डाज़ोल और साइक्लोहेक्सिमाइड (सीटीसी माध्यम) के साथ पूरक खमीर निकालने से समृद्ध था। कवक उपनिवेशों की वृद्धि 3 सप्ताह के लिए देखी गई थी। सभी मेटाराइज़ियम और ब्यूवेरिया ईपीएफ को जीनस स्तर पर रूपात्मक रूप से पहचाना गया था। इसके अतिरिक्त, प्रजातियों के स्तर पर कुछ आइसोलेट्स को आणविक रूप से पहचाना गया था। इन 524 मिट्टी के नमूनों में से 24 का भी कीट चारा विधि (गैलेरिया मेलोनेला और टेनेब्रियो मोलिटर) का उपयोग करके ईपीएफ घटना के लिए सर्वेक्षण किया गया था। कुल 51 ईपीएफ उपभेदों को 524 मिट्टी के नमूनों से अलग किया गया था (41 मेटारिज़ियम एसपीपी और 10 ब्यूवेरिया एसपीपी)। सभी कवक उपभेदों को या तो क्रॉपलैंड्स या घास के मैदानों से अलग किया गया था। तुलना के लिए चुने गए 24 नमूनों में से, 91.7% गैलेरिया चारा का उपयोग करके ईपीएफ के लिए सकारात्मक थे, 62.5% टेनेब्रियो चारा का उपयोग कर रहे थे, और 41.7% सीटीसी का उपयोग कर रहे थे। हमारे परिणामों ने सुझाव दिया कि मिट्टी से ईपीएफ को अलग करने के लिए कीट चारा का उपयोग करना सीटीसी माध्यम का उपयोग करने की तुलना में अधिक कुशल है। ईपीएफ की पहचान और संरक्षण के अलावा अलगाव विधियों की तुलना का जैव विविधता के बारे में ज्ञान पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है। ईपीएफ संग्रह में सुधार वैज्ञानिक विकास और तकनीकी नवाचार का समर्थन करता है।
Introduction
मिट्टी कई सूक्ष्मजीवों का स्रोत है, जिसमें एंटोमोपैथोजेनिक कवक (ईपीएफ) शामिल है। कवक के इस विशेष समूह को उपनिवेश बनाने और अक्सर आर्थ्रोपोड मेजबानों को मारने की उनकी क्षमता से पहचाना जाता है, विशेष रूप से कीड़े1। अलगाव, लक्षण वर्णन, विषैले उपभेदों के चयन, और पंजीकरण के बाद, ईपीएफ को आर्थ्रोपोड-कीट नियंत्रण के लिए बड़े पैमाने पर उत्पादित किया जाता है, जो उनकी किफायती प्रासंगिकता का समर्थन करताहै 2। तदनुसार, ईपीएफ के अलगाव को बायोपेस्टीसाइड के विकास के लिए पहला कदम माना जाता है। Beauveria spp. (Hypocreales: Cordycipitaceae) और Metarhizium spp. (Hypocreales: Clavicipitaceae) आर्थ्रोपोड-कीट नियंत्रण3 के लिए उपयोग किए जाने वाले सबसे आम कवक हैं। ईपीएफ को मिट्टी से सफलतापूर्वक अलग किया गया है, दिखाई देने वाले माइकोसिस के साथ आर्थ्रोपोड्स, उपनिवेशित पौधे, और पौधे राइजोस्फीयर 4,5।
ईपीएफ का अलगाव इस विशेष समूह की विविधता, वितरण और पारिस्थितिकी का अध्ययन करने के लिए भी उपयोगी हो सकता है। हाल के साहित्य ने बताया कि ईपीएफ के उपयोग को कम करके आंका गया है, ईपीएफ के कई अपरंपरागत अनुप्रयोगों का हवाला देते हुए, जैसे कि पौधे के विकास में सुधार करने की उनकी क्षमता4, मिट्टी से विषाक्त संदूषकों को हटाने के लिए, और दवा6 में उपयोग किया जाना है। वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य कीट चारा बनाम कृत्रिम संस्कृति माध्यम 7,8,9 का उपयोग करके मिट्टी से ईपीएफ को अलग करने की दक्षता की तुलना करना है। ईपीएफ अलगाव के संदर्भ में एक कीट चारा के रूप में गैलेरिया मेलोनेला एल (लेपिडोप्टेरा: Phyralidae) का उपयोग अच्छी तरह से स्वीकार किया गया है। इन लार्वा का उपयोग वैज्ञानिक समुदाय द्वारा मेजबान-रोगज़नक़ इंटरैक्शन10,11 का अध्ययन करने के लिए एक प्रयोगात्मक मॉडल के रूप में दुनिया भर में किया जाता है। Tenebrio molitor L. (Coleoptera: Tenebrionidae) लार्वा को वायरस से जुड़े अध्ययनों के लिए और ईपीएफ के अलगाव के लिए एक और कीट मॉडल माना जाता है क्योंकि यह कीट प्रयोगशाला में कम लागत 7,12 पर दुर्लभ होना आसान है।
संस्कृति-स्वतंत्र तरीकों जैसे कि विभिन्न प्रकार की पीसीआर तकनीकों का उपयोग करने के लिए उनके सब्सट्रेट पर ईपीएफ का पता लगाने और मापने के लिए लागू किया जा सकता है, जिसमें मिट्टी13,14 भी शामिल है। फिर भी, इन कवक उपनिवेशों को ठीक से अलग करने के लिए, उनके सब्सट्रेट को एक चयनात्मक कृत्रिम माध्यम9 पर सुसंस्कृत किया जाना चाहिए, या नमूनों में मौजूद कवक को संवेदनशील कीड़ोंका उपयोग करके चारा दिया जा सकता है। एक तरफ, सीटीसी एक डोडीन-मुक्त कृत्रिम माध्यम है जिसमें क्लोरैम्फेनिकोल, थियाबेन्डाज़ोल और साइक्लोहेक्सिमाइड के साथ पूरक खमीर निकालने के साथ समृद्ध आलू डेक्सट्रोज अगर होता है। इस माध्यम को फर्नांडिस एट अल द्वारा विकसित किया गया था। 9 मिट्टी से स्वाभाविक रूप से होने वाले Beauveria spp. और Metarhizium spp. की वसूली को अधिकतम करने के लिए। दूसरी ओर, जी मेलोनेला और टी मोलिटर लार्वा को भी मिट्टी से ईपीएफ आइसोलेट्स प्राप्त करने के लिए चारा के रूप में सफलतापूर्वक उपयोग किया जा सकता है। फिर भी, शर्मा एट अल.15 के अनुसार, कम अध्ययनों ने इन दो चारा कीटों के सहवर्ती उपयोग और तुलना की सूचना दी। पुर्तगाली दाख की बारियां मिट्टी Metarhizium robertsii (Metscn. टी का उपयोग करके सोरोकिन। जी मेलोनेला लार्वा की तुलना में मोलिटर लार्वा; इसके विपरीत, Beauveria basiana (Bals. -Criv.) Vuill अलगाव जी mellonella चारा15 के उपयोग से जुड़ा हुआ था. इसलिए, यह निर्णय कि ईपीएफ अलगाव विधि का उपयोग करने के लिए किस (यानी, जी मेलोनेला-चारा, टी मोलिटर-चारा या सीटीसी माध्यम) पर अध्ययन के लक्ष्य और प्रयोगशाला बुनियादी ढांचे के अनुसार विचार किया जाना चाहिए। वर्तमान अध्ययन का लक्ष्य मिट्टी के नमूनों से ईपीएफ को अलग करने के लिए कीट चारा बनाम कृत्रिम चयनात्मक माध्यम का उपयोग करने की प्रभावशीलता की तुलना करना है।
Protocol
Representative Results
Discussion
प्राकृतिक और कृषि मिट्टी के आवास ईपीएफ22 और एक उत्कृष्ट प्राकृतिक जलाशय के लिए विशिष्ट वातावरण हैं। वर्तमान अध्ययन में, कीट चारा बनाम चयनात्मक माध्यम का उपयोग करके ईपीएफ अलगाव के दो तरीकों को …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस अध्ययन को ब्राजील से Coordenacão de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), वित्त कोड 001, Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ) (परियोजना संख्या E-26/010.001993/2015) द्वारा भाग में वित्त पोषित किया गया था, और Conselho Nacional de DeSnolgico (Conselho Nacional de DeSnogico)
Materials
| Autoclave | Phoenix Luferco | 9451 | |
| Biosafety cabinet | Airstream ESCO | AC2-4E3 | |
| Chloramphenicol | Sigma-Aldrich | C0378 | |
| Climate chambers | Eletrolab | EL212/3 | |
| Coverslip | RBR | 3871 | |
| Cycloheximide | Sigma-Aldrich | C7698 | |
| Drigalski spatula | Marienfeld | 1800024 | |
| GPS app | Geolocation app | 2.1.2005 | |
| Lactophenol blue solution | Sigma-Aldrich | 61335 | |
| Microscope | Zeiss Axio star plus | 1169 149 | |
| Microscope camera | Zeiss Axiocam 105 color | 426555-0000-000 | |
| Microscope softwere | Zen lite Zeiss 3.0 | ||
| Microscope slide | Olen | k5-7105-1 | |
| Microtube | BRAND | Z336769-1PAK | |
| Petri plates | Kasvi | K30-6015 | |
| Pipette tip | Vatten | VT-230-200C/VT-230-1000C | |
| Pippette | HTL – Labmatepro | LMP 200 / LMP 1000 | |
| Plastic pots | Prafesta descartáveis | 8314 | |
| Polypropylene bags | Extrusa | 38034273/5561 | |
| Potato dextrose agar | Kasvi | K25-1022 | |
| Prism software 9.1.2 | Graph Pad | ||
| Shovel | Tramontina | 77907009 | |
| Tenebrio mollitor | Safari | QP98DLZ36 | |
| Thiabendazole | Sigma-Aldrich | T8904 | |
| Tween 80 | Vetec | 60REAVET003662 | |
| Vortex | Biomixer | QL-901 | |
| Yeast extract | Kasvi | K25-1702 |
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