Les colonies fongiques entomopathogènes sont isolées à partir d’échantillons de sol tropical à l’aide d’appâts Tenebrio , d’appâts Galleria , ainsi que de milieux artificiels sélectifs, c’est-à-dire de gélose de dextrose de pomme de terre enrichie en extrait de levure complété par du chloramphénicol, du thiabendazole et du cycloheximide (milieu CTC).
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Article de méthode
Comparaison des méthodes d’isolement des champignons entomopathogènes à partir d’échantillons de sol
Dans cet article
Résumé
Résumé
L’objectif de la présente étude est de comparer l’efficacité de l’utilisation d’appâts à insectes par rapport à un milieu sélectif artificiel pour isoler les champignons entomopathogènes (EPF) à partir d’échantillons de sol. Le sol est un habitat riche pour les micro-organismes, y compris l’EPF appartenant en particulier aux genres Metarhizium et Beauveria, qui peuvent réguler les arthropodes nuisibles. Les produits biologiques à base de champignons sont disponibles sur le marché principalement pour la lutte antiparasitaire des arthropodes agricoles. Néanmoins, malgré la grande biodiversité endémique, seules quelques souches sont utilisées dans les bioproduits commerciaux dans le monde entier. Dans la présente étude, 524 échantillons de sol ont été cultivés sur de la gélose de dextrose de pomme de terre enrichie d’extrait de levure complété par du chloramphénicol, du thiabendazole et du cycloheximide (milieu CTC). La croissance des colonies fongiques a été observée pendant 3 semaines. Tous les Metarhizium et Beauveria EPF ont été identifiés morphologiquement au niveau du genre. De plus, certains isolats ont été identifiés moléculairement au niveau de l’espèce. Vingt-quatre de ces 524 échantillons de sol ont également été étudiés pour la présence de FPE à l’aide de la méthode des appâts à insectes (Galleria mellonella et Tenebrio molitor). Au total, 51 souches d’EPF ont été isolées (41 Metarhizium spp. et 10 Beauveria spp.) à partir des 524 échantillons de sol. Toutes les souches fongiques ont été isolées dans des terres cultivées ou des prairies. Sur les 24 échantillons sélectionnés à des fins de comparaison, 91,7 % étaient positifs pour l’EPF utilisant l’appât Galleria , 62,5 % utilisant l’appât Tenebrio et 41,7 % utilisant le CTC. Nos résultats suggèrent que l’utilisation d’appâts à insectes pour isoler le FPE du sol est plus efficace que l’utilisation du milieu CTC. La comparaison des méthodes d’isolement en plus de l’identification et de la conservation du FPE a un impact positif sur les connaissances sur la biodiversité. L’amélioration de la collecte du FPE soutient le développement scientifique et l’innovation technologique.
Introduction
Le sol est la source de plusieurs micro-organismes, dont les champignons entomopathogènes (EPF). Ce groupe particulier de champignons est reconnu par leur capacité à coloniser et souvent à tuer les hôtes arthropodes, en particulier les insectes1. Après isolement, caractérisation, sélection de souches virulentes et enregistrement, les EPF sont produits en masse pour la lutte contre les arthropodes nuisibles, ce qui confirme leur pertinence économique2. En conséquence, l’isolement du FPE est considéré comme la première étape du développement d’un biopesticide. Beauveria spp. (Hypocreales: Cordycipitaceae) et M....
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Protocole
Comme la présente étude a accédé au patrimoine génétique brésilien, la recherche a été enregistrée auprès du Système national de gestion du patrimoine génétique et des connaissances traditionnelles associées (Sisgen) sous le code AA47CB6.
1. Échantillonnage du sol
- Prélever 800 g de terre (avec ou sans racines secondaires incidentes) à une profondeur de 10 cm à l’aide d’une petite pelle. Conservez-les dans des sacs en polypropylène à température ambiante jusqu’au début de l’expérience.
REMARQUE: Les petites racines peuvent également être collectées car les FPE auraient une compétence en matière de rhizosphère. P....
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Résultats
Au total, 524 échantillons de sol ont été prélevés dans des prairies : pâturages pour le bétail (165 échantillons), forêts tropicales indigènes (90 échantillons), lacs (42 échantillons) et terres cultivées/cultivées (227 échantillons) entre 2015 et 2018 dans l’État de Rio de Janeiro, au Brésil. Les coordonnées géographiques des échantillons positifs pour le FPE sont donnés dans le tableau supplémentaire 1.
Sur les 524 échantillons de sol, 500 échantillons ont été analysés uniq.......
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Discussion
Les habitats naturels et agricoles des sols sont des environnements typiques de l’EPF22 et constituent un excellent réservoir naturel. Dans la présente étude, deux méthodes d’isolement de la FPE à l’aide d’appâts à insectes par rapport à un milieu sélectif ont été abordées. La première étape de l’isolement est la collecte des échantillons de sol. Un stockage et une identification appropriés des échantillons de sol sont essentiels. L’information sur la latitude, la longitude, le type de sol et le b.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts.
Remerciements
Cette étude a été financée en partie par la Coordenacão de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) du Brésil, code financier 001, fundação Carlos Chagas Filho de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ) (numéro de projet E-26/010.001993/2015), et Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) du Brésil.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Autoclave | Phoenix Luferco | 9451 | |
| Armoire de biosécurité | Airstream ESCO | AC2-4E3 | |
| Chloramphénicol | Sigma-Aldrich | C0378 | |
| Chambres climatiques | Eletrolab | EL212/3 | |
| Coverslip | RBR | 3871 | |
| Cycloheximide | Sigma-Aldrich | C7698 | |
| Spatule Drigalski | Marienfeld | 1800024 | |
| Application GPS | géolocalisation | 2.1.2005 | |
| Solution de bleu de lactophénol | Sigma-Aldrich | 61335 | |
| Microscope | Zeiss Axio star plus | 1169 149 | |
| Caméra microscope | Zeiss Axiocam 105 couleur | 426555-0000-000 | |
| Microscope softwere | Zen lite Zeiss 3.0 | ||
| Lame de microscope | Olen | k5-7105-1 | |
| Microtube | BRAND | Z336769-1PAK | |
| Plaques de Petri | Kasvi | K30-6015 | |
| Pointe de pipette | Vatten | VT-230-200C/VT-230-1000C | |
| Pippette | HTL - Labmatepro | LMP 200 / LMP 1000 | |
| Pots en plastique | Prafesta descartá ; veis | 8314 | |
| Sacs en polypropylène | Extrusa | 38034273/5561 | |
| Gélose au dextrose de pomme de terre | Kasvi | K25-1022 | |
| Prism software 9.1.2 | Pelle à tampon | ||
| Tramontina | 77907009 | ||
| Tenebrio mollitor | Safari | QP98DLZ36 | |
| Thiabendazole | Sigma-Aldrich | T8904 | |
| Tween 80 | Vetec | 60REAVET003662 | |
| Vortex Biomixer | QL-901 | ||
| Extrait de levure | Kasvi | K25-1702 |
Références
- Roberts, D. W., St. Leger, R. J. Metarhizium spp., cosmopolitan insect-pathogenic fungi: Mycological aspects. Advances in Applied Microbiology. 54, 1-70 (2004).
- do Nascimento Silva, J., et al.
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Réimpressions et autorisations
