Enregistrement du courant de jonction de l’espace des ovocytes Xenopus

Yuan Shui; Zhao-Wen Wang

doi:10.3791/63361

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Article de méthode

Enregistrement du courant de jonction de l’espace des ovocytes Xenopus

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DOI :

10.3791/63361

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21 janvier 2022

Yuan Shui¹ , Zhao-Wen Wang¹

¹Department of Neuroscience, University of Connecticut School of Medicine

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici un protocole pour exprimer les protéines de jonction lacunaire dans les ovocytes Xenopus et enregistrer le courant jonctionnel entre deux ovocytes apposés à l’aide d’un amplificateur commercial conçu pour les enregistrements à double tension ovocytaire dans un mode de mesure à courant latéral élevé.

Résumé

L’expression hétérologue des connexines et des innexines dans les ovocytes xenopus est une approche puissante pour étudier les propriétés biophysiques des jonctions lacunaires (GJ). Cependant, cette approche est techniquement difficile car elle nécessite une pince de tension différentielle de deux ovocytes opposés partageant un terrain d’entente. Bien qu’un petit nombre de laboratoires aient réussi à exécuter cette technique, pratiquement tous ont utilisé des amplificateurs faits maison ou des amplificateurs commerciaux conçus pour les enregistrements à un seul ovocyte. Il est souvent difficile pour d’autres laboratoires de mettre en œuvre cette technique. Bien qu’un mode de mesure de courant latéral élevé ait été incorporé dans un amplificateur commercial pour les enregistrements à double tension ovocytaire, il n’y avait eu aucun rapport pour son application jusqu’à notre étude récente. Nous avons rendu l’approche de mesure du courant latéral élevé plus pratique et pratique en introduisant plusieurs modifications techniques, notamment la construction d’une plate-forme d’enregistrement magnétique qui permet un placement précis des ovocytes et de diverses électrodes, l’utilisation de la solution de bain comme conducteur dans les électrodes différentielles de tension, l’adoption d’une électrode KCl commerciale à faible fuite comme électrode de référence, fabrication d’électrodes de courant et de tension à partir de capillaires en verre à paroi mince et positionnement de toutes les électrodes à l’aide de dispositifs magnétiques. La méthode décrite ici permet des enregistrements pratiques et robustes du courant jonctionnel (I_j) entre deux ovocytes Xenopus opposés.

Introduction

Les GJ sont des canaux intercellulaires qui peuvent permettre le flux de courant et l’échange de petites molécules cytosoliques entre les cellules voisines. Ils existent dans de nombreux types de cellules et remplissent diverses fonctions physiologiques. Les GJ chez les vertébrés sont formés par les connexines, tandis que ceux chez les invertébrés par les innexines. Chaque GJ se compose de deux hémicanaux juxtaposés avec 6 ou 8 sous-unités par hémicanal, selon qu’il s’agit de connexines ou d’innexines ^1,2,3. Les humains ont 21 gènes^de connexine 4, tand....