Uma técnica cirúrgica modificada para transplante de rim em camundongos
Summary
Este protocolo apresenta uma nova técnica cirúrgica de transplante de rim de camundongos com foco em uma estratégia de anastomose arterial modificada. Uma técnica de sutura vascular, incluindo um método simples e mais seguro de anastomose ureter-bexiga também é apresentada. Essas modificações reduzem o tempo de operação e melhoram a taxa de sucesso do procedimento de transplante renal do camundongo.
Abstract
O transplante de rim em camundongos é um procedimento cirúrgico complicado e desafiador. Há muito poucas publicações demonstrando os principais passos desta operação. Por isso, este artigo introduz a técnica e aponta as ressalvas cirúrgicas associadas a esta operação. Além disso, modificações importantes em relação ao procedimento convencional são demonstradas. Em primeiro lugar, um pedaço da aorta abdominal é cortado e preparado para que as bifurcações proximais da artéria renal, incluindo a artéria ureteral sejam transectadas juntamente com o rim doador em bloco. Isso reduz o risco de necrose ureter e evita o desenvolvimento de uma oclusão do trato urinário. Em segundo lugar, demonstra-se um novo método de anastomose vascular que permite ao operador aumentar ou diminuir flexívelmente o tamanho da anastomose após a reinfusão do transplante renal. Isso evita o desenvolvimento de restrições de vasos e sangramento intraabdominal. Em terceiro lugar, é mostrada uma técnica que possibilite a anastomose do delicado doador e da bexiga receptora que não causa um trauma. A adoção deste protocolo pode reduzir o tempo de operação e reduzir os danos à bexiga do receptor, aumentando significativamente a taxa de sucesso da operação para os camundongos receptores.
Introduction
Desde que Sakowitz et al. desenvolveram modelos de transplante de rim em 1973 pela primeira vez1, provou-se como uma importante ferramenta experimental para estudar os mecanismos de lesão isquêmica de transplante e rejeição aoimune, bem como para o desenvolvimento de novos tratamentos destinados a prolongar a sobrevivência do aléxico e possivelmente para alcançar a tolerância imunológica. No entanto, a técnica cirúrgica tem se mostrado complexa e muito exigente, às vezes tendo complicações como restrições anastomóticas vasculares que levam à insuficiência pré-renal não imunológica2, falha pós-renal causada por isquemia e necrose subsequente do ureter transplantado, restrições da anastomose do ureter transplantado e/ou bexiga de urina do receptor levando a uma interrupção do fluxo urinário. Todas essas são as razões pelas quais o transplante renal em camundongos não foi desenvolvido e, portanto, não é amplamente utilizado. Estabelecer um modelo eficaz e de longo prazo de transplante de rim de camundongos estáveis sem complicações vasculares e do trato urinário ainda tem significado insubstituível para muitos estudos no campo do transplante com foco nas doenças imunológicas renais mediadas, mas também infecciosas3. Além disso, em comparação com outros transplantes de órgãos em modelos murinos como transplante de pulmão, coração e intestinal 4,5, o modelo de transplante de rim de camundongos oferece uma chance de estudar a sobrevivência a longo prazo mesmo no cenário de grande disparidade de antígenos de histocompatibilidade 3,6. Também foi demonstrado que no mesmo cenário de combinações de cepas doador-receptores diferentes transplantes de órgãos, como coração ou rim, são caracterizados por diferentes dinâmicas e inícios de rejeição de alusores3. Além disso, do ponto de vista nefrológico, é um modelo mais adequado para estudar mecanismos de regulação imunológica mediados parênquim no contexto de eventos de rejeição aguda e crônica do que simples experimentos de transplante de pele.
Com base em relatórios anteriores sobre a técnica cirúrgica de transplante de rim em camundongos 3,7,8,9, demonstramos aqui as seguintes melhorias confiáveis que foram aplicadas com sucesso nos últimos 10 anos dentro do nosso grupo 10,11,12: Em primeiro lugar, a artéria ureteral é conservada com segurança à medida que a artéria renal é resseccionada en bloc juntamente com a respectiva parte da aorta abdominal. Em segundo lugar, uma técnica nova, simples e rápida de uma anastomose vascular sem nó em que o ponto final da anastomose não está amarrado com a extremidade da gravata superior como a abordagem tradicional, mas permanece livre. Esta técnica permite aumentar ou diminuir o tamanho da anastomose após a reperfusão renal para evitar a rigidridade do vaso e sangramento intraabdominal. Em terceiro lugar, agulhas de seringa de 21 G e 30 G foram utilizadas como ferramenta auxiliar de orientação de punção para implantar o ureter doador na parede da bexiga do receptor, reduzindo os danos à bexiga do receptor e facilitando a formação de anastomose livre de estritos.
Neste relatório, também comparamos a técnica tradicional e amplamente utilizada com a modificada que está estabelecida em nosso laboratório e não encontrou diferença significativa no grau de atrofia tubular renal e fibrose intersticial de tecido renal. Em estudos anteriores, também comparamos os resultados desta nova técnica com o método convencional em termos de sangramento local, trombose, tempo para a realização da anastomose do vaso e taxa de sobrevivência. Foram encontradas melhorias como reduções significativas de eventos locais de trombose (1,1% versus 6,6%), tempo reduzido para o procedimento de anstomose e sobrevida sintética de enxerto renal altamente reprodutível a longo prazo (95% versus 84% com a abordagem clássica)10.
Protocol
Representative Results
Discussion
Embora o modelo de transplante de pele em camundongos seja simples e fácil de realizar para estudar eventos de rejeição aoimune, as técnicas cirúrgicas para investigar mais especificamente as alterações inflamatórias relacionadas ao aoimune após o coração16 e o transplante de rim10 tem se mostrado complexo e muito exigente. Do ponto de vista do nefrologista transplantado, o estabelecimento de um modelo de transplante renal de camundongos estável eficaz e de long…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradecemos à equipe do Dr. Tiantian Bai pela ajuda com a voz, Srta. Mian Pao por sua ajuda na ilustração médica. Este trabalho foi apoiado em parte pela Fundação Alemã de Pesquisa (DFG) para promover colaborações internacionais (HO2581/4-1 para AH) e pela Fundação Nacional de Ciência da China (NSFC; #81760291 para a FJ).
Materials
| 30G-needles | Braun | 456300 | – |
| acepromazine | CP Pharma | Tranquisol P | – |
| Bepanthen eye ointment | Haus-Apotheke | PZN 01578675 | – |
| Bonn Micro Forceps | FST | 11083-07 | – |
| Box for insulation and oxygen supply device | RUSKINN | INVIV | – |
| C57BL/6J mice | Charles River. Germany | no catalog number | – |
| Carprofen | Zoetis | Rimadyl 50 mg/ml | – |
| CATHETER-FEP 26G | TERUMO | Surflo-W | – |
| Clip Applicator Forceps Style | FST | 18057-14 | – |
| Curved forceps | WPI | 14114-G | – |
| Cutasept skin disinfection | VWR | BODL980365 | – |
| Dehydrator | DIAPATH | Donatello | – |
| electrosurgical pen | Bovie | CHANGE-A-TIP | – |
| Embedding machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | – |
| Ethanol | Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD | 100092683 | – |
| Frozen platform | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | – |
| gauze pads, cotton swabs | Lohmann-Rauscher | 13353 | – |
| Glass slide | Servicebio | G6004 | – |
| HE dye solution set | Servicebio | G1003 | – |
| Heating mat | THERMO MAT PRO 30W | HTP-30 | – |
| hemostatic sponge | CuraSpon | J1276A | – |
| heparine-solution | Haus-Apotheke | PZN 03029820 | – |
| ice box | PETZ | No Catalog Number available | – |
| Imaging system | Nikon | Nikon DS-U3 | – |
| Inhalation anesthesia device | GROPPLER | BKGM 0616 | – |
| isoflurane | CP Pharma | Isofluran CP 1 ml/ml | – |
| ketamine | Zoetis | no catalog numer | – |
| Masson dye solution set | Servicebio | G1006 | – |
| metamizole | WDT | no catalog numer | – |
| Micro scissors | FST | 15000-00,15000-10 | – |
| Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm | FST | 18055-06 | – |
| Microscope | Leica | LEICAMZ6 | – |
| Microscope light | SCHOTT | KL2500LED | – |
| Neutral gum | SCRC | 10004160 | – |
| Oven | Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., Ltd | GFL-230 | – |
| Pathology slicer | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | – |
| Saline solution (NaCl 0.9 %) | Haus-Apotheke | PZN 06178437 | – |
| scissors | Peha Instruments | 991083/4 | – |
| Slides | Servicebio | – | |
| small Petri dish | Sarstedt | 8,33,900 | – |
| straight forceps | WPI | 14113-G | – |
| surgical tape | BSN | 4120 | – |
| Suture Tying Forceps – 10 cm | FST | 18025-10 | – |
| Sutures(10-0) | Medtronic | N2540 | – |
| Sutures(4-0) | ETHILON | V4940H | – |
| Sutures(7-0) | ETHILON | 1647H | – |
| Syringe (0,3 mL) | BD | 324826 | – |
| Syringe (1 mL) | BD | 320801 | – |
| Tissue spreader | Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd | KD-P | – |
| Upright optical microscope | Nikon | Nikon Eclipse E100 | – |
| xylazine | Bayer | Rompun | – |
| Xylene | Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD | 10023418 | – |
References
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