L’objectif de ce protocole est de caractériser un nouveau modèle de neurodégénérescence glaucomateuse basé sur une cautérisation thermique à 360° du plexus vasculaire limbique, induisant une hypertension oculaire subaiguë.
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Article de méthode
Cautérisation complète du plexus vasculaire limbique pour le glaucome induit chirurgicalement chez les rongeurs
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le glaucome, deuxième cause de cécité dans le monde, est un groupe hétérogène de troubles oculaires caractérisés par des lésions structurelles du nerf optique et une dégénérescence des cellules ganglionnaires de la rétine (CGR), entraînant un dysfonctionnement visuel en interrompant la transmission des informations visuelles de l’œil au cerveau. Une pression intraoculaire élevée est le facteur de risque le plus important ; Ainsi, plusieurs modèles d’hypertension oculaire ont été développés chez les rongeurs par des approches génétiques ou expérimentales pour étudier les causes et les effets de la maladie. Parmi celles-ci, certaines limites ont été signalées, telles que l’invasivité chirurgicale, l’évaluation fonctionnelle inadéquate, la nécessité d’une formation approfondie et l’extension très variable des lésions rétiniennes. Le présent travail caractérise une méthode simple, peu coûteuse et efficace pour induire l’hypertension oculaire chez les rongeurs, basée sur la cautérisation à basse température et en cercle complet du plexus vasculaire limbique, une composante majeure du drainage de l’humeur aqueuse. Le nouveau modèle fournit une hypertension oculaire subaiguë techniquement facile, non invasive et reproductible, associée à un CGR progressif et à une dégénérescence du nerf optique, ainsi qu’un taux de récupération clinique postopératoire unique qui permet des études fonctionnelles in vivo par des méthodes électrophysiologiques et comportementales.
Introduction
La littérature médicale considère le glaucome comme un groupe hétérogène de neuropathies optiques caractérisées par une dégénérescence progressive des cellules ganglionnaires de la rétine (CGR), des dendrites, du soma et des axones, entraînant une ventouse structurelle (excavation) du disque optique et une détérioration fonctionnelle du nerf optique, conduisant à l’amaurose dans les cas non contrôlés en interrompant la transmission des informations visuelles de l’œil au cerveau1. Le glaucome est actuellement la cause la plus fréquente de cécité irréversible dans le monde, et devrait toucher environ 111,8 millions de personnes en 2040
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Protocole
Toutes les procédures ont été effectuées conformément à la Déclaration sur l’utilisation d’animaux dans la recherche ophtalmique et visuelle de l’Association pour la recherche en vision et en ophtalmologie (ARVO) et approuvée par le Comité d’éthique sur l’utilisation des animaux dans l’expérimentation scientifique du Centre des sciences de la santé de l’Université fédérale de Rio de Janeiro (protocole 083/17). Dans le présent travail, des rats à capuchon Lister des deux sexes ont été utilisés, âgés de 2 à 3 mois et pesant entre 180 et 320 g. Cependant, la procédure peut être adaptée à différentes souches de rats de différentes tranches d’âge.
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Résultats
Les variables quantitatives sont exprimées en moyenne ± erreur type de la moyenne (SEM). À l’exception de la comparaison de la dynamique de la PIO entre le groupe OHT et le groupe témoin (figure 1F), l’analyse statistique a été effectuée à l’aide d’une ANOVA bidirectionnelle suivie du test de comparaisons multiples de Sidak. Une valeur de p < 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.
La figure 1 illustre les étapes.......
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Discussion
La cautérisation du plexus limbique (LPC) est un nouveau modèle post-trabéculaire qui présente l’avantage de cibler des structures vasculaires facilement accessibles ne nécessitant pas de dissection conjonctivale ou à tenon17,28. Contrairement au modèle de cautérisation des veines vortex, un modèle d’OHT renommé basé sur l’atteinte chirurgicale du drainage veineux choroïde, la congestion veineuse ne devrait pas influencer l’augmentation de la PIO dans le modèle L.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Nous remercions nos techniciens de laboratoire José ; Nilson dos Santos, Daianne Mandarino Torres, José Francisco Tibúrcio, Gildo Brito de Souza et Luciano Cavalcante Ferreira. Cette recherche a été financée par la FAPERJ, le CNPq et le CAPES.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Acétone | Isofar | 201 | Utilisé pour la préparation des tissus en microscopie électronique (étape 5) |
| Électrode active pour l’électrorétinographie | Hansol Medical | Co-Aiguille | en acier inoxydable 0,25 mm × ; 15 mm |
| Anestalcon | Novartis Biociê ; ncias S/A | MS-1.0068.1087 | Chlorhydrate de proxymétacaïne 0,5 % |
| Chlorure de calcium | Vetec | 560 | Utilisé pour la préparation des tissus en microscopie électronique (étape 5) |
| Cautérerie Low Temp Fine Tip 10/bx | Bovie Medical Corporation | AA00 | Cautérisation ophtalmique à basse température |
| Cetamin | Syntec do Brasil Ltda | 000200-3-000003 | Chlorhydrate de kétamine 10 % |
| DAKO | Dako North America | S3023 | Milieu de montage anti-décoloration |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific | 28718-90-3 | diamidino-2-phénylindole ; contre-coloration nucléaire fluorescente bleue ; émission à 452± ; 3 nm |
| Ecofilm | Cristá ; lia produtos quí ; micos Farmacê ; uticos Ltda | MS-1.0298.0487 | Carmellose sodique 0,5 % |
| EPON Resin | Polysciences, Inc. | - | Résine époxy utilisée pour la microscopie électronique, composée d’un mélange de quatre réactifs : Résine Poly/Bed 812 (CAT#08791) ; DDSA - Anhydride dodécénylsuccinique (CAT#00563) ; NMA - Anhydride de méthyle nadique (CAT#00886) ; DMP-30 - 2,4,6-tris(diméthylaminométhyl)phénol (CAT#00553) |
| Glutaraldéhyde | Microscopie électronique Sciences | 16110 | Utilisé pour la préparation des tissus en microscopie électronique (étape 5) |
| Hyabak | Uniã ; o Quí ; mica Farmacê ; utica Nacional S/A | MS-8042140002 | Hyaluronate de sodium 0,15 % |
| Icare Tonolab | Icare Finland Oy | TV02 (numéro de modèle) | Tonomètre portable à rebond |
| IgG âne anti-souris anticorps + Alexa Fluor 555 | Thermo Fisher Scientific | A31570 | Solution d’anticorps secondaire |
| Moniteur LCD 23 pouces | Samsung Electronics Co. Ltd. | S23B550 | Modèle LS23B550, pour l’enregistrement par électrorétinogramme |
| LSM 510 Meta | Carl Zeiss-Microscope | à épifluorescence confocal | |
| Maxiflox | Cristá ; lia produtos quí ; micos Farmacê ; uticos Ltda | MS-1.0298.0489 | Ciprofloxacine 3,5 mg/g |
| MEB-9400K | Nihon Kohden | Corporation-Système | pour l’enregistrement d’électrorétinogrammes |
| monoclonal IgG1 souris anti-Brn3a | MilliporeSigma | MAB-1585 | Brn3a Solution d’anticorps primaires |
| Neuropack Manager v08.33 | Nihon Kohden | Corporation-Logiciel | pour le traitement |
| du signal d’électrorétinogrammeOptomotrie | cérébraleMécanique | Système pour l’analyse de la réponse optomotrice | |
| Tétroxyde d’osmium | Microscopie électronique Sciences | 19100 | Utilisé pour la préparation des tissus en microscopie électronique (étape 5) |
| Ferrocyanure de potassium | Microscopie électronique Sciences | 20150 | Utilisé pour la préparation des tissus en microscopie électronique (étape 5) |
| Électrodes de référence et de masse pour l’électrorétinographie | Chalgren Enterprises | 110-63 | Aiguilles en acier inoxydable 0,4 mm & times ; 37 mm |
| Tampon de cacodylate de sodium | Microscopie électronique Sciences | 12300 | Utilisé pour la préparation des tissus en microscopie électronique (étape 5) |
| Ster MD | Uniã ; o Quí ; mica Farmacê ; utica Nacional S/A | MS-1.0497.1287 | Acétate de prednisolone 0,12 % |
| Terolac | Cristá ; lia produtos quí ; micos Farmacê ; uticos Ltda | MS-1.0497.1286 | Ketorolac trometamol 0.5 % |
| Terramicina | Laborató ; rios Pfizer Ltda | MS-1.0216.0024 | Chlorhydrate d’oxytétracycline 30 mg/g + polymyxine B 10 000 U/g |
| Tono-Pen XL | Reichert Technologies | 230635 | Tonomètre portatif à aplanation numérique |
| TO-PRO-3 | Thermo Fisher Scientific | T3605 | Contre-coloration nucléaire fluorescente rouge lointain ; émission à 661 nm |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | 9036-19-5 | Tensioactif non ionique |
| Acétate d’uranyle | Microscopie électronique Sciences | 22400 | Utilisé pour la préparation des tissus en microscopie électronique (étape 5) |
| Xilazin | Syntec do Brasil Ltda | 7899 | Chlorhydrate de xylazine 2 % |
| Carl Zeiss-Stéréomicroscope | pour la chirurgie et la dissection rétinienne |
Références
- Weinreb, R. N., Aung, T., Medeiros, F. A. The Pathophysiology and Treatment of Glaucoma A Review. JAMA. 311 (8), 1901-1911 (2014).
- Tham, Y. C., et al. Global prevalence of glaucoma and projections of glaucoma burden through 2040: A systematic ....
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Réimpressions et autorisations
