Aqui, apresentamos um protocolo para detectar motilidade bacteriana baseado em uma reação de cor. As principais vantagens deste método são que é fácil de avaliar e mais preciso, e não requer equipamentos especializados.
A motilidade bacteriana é crucial para a patogenicidade bacteriana, formação de biofilme e resistência a drogas. A motilidade bacteriana é crucial para a invasão e/ou disseminação de muitas espécies patogênicas. Portanto, é importante detectar a motilidade bacteriana. Condições de crescimento bacteriano, como oxigênio, pH e temperatura, podem afetar o crescimento bacteriano e a expressão de flagelos bacterianos. Isso pode levar à redução da motilidade ou mesmo à perda da motilidade, resultando na avaliação imprecisa da motilidade bacteriana. Com base na reação de cor do cloreto de 2,3,5-trifenil tetrazólio (TTC) por desidrogenases intracelulares de bactérias vivas, o TTC foi adicionado ao ágar semissólido tradicional para detecção da motilidade bacteriana. Os resultados mostraram que este método de ágar semissólido TTC para detecção de motilidade bacteriana é simples, fácil de operar e não envolve instrumentos grandes e caros. Os resultados também mostraram que a maior motilidade foi observada em meio semissólido preparado com 0,3% de ágar. Em comparação com o meio semissólido tradicional, os resultados são mais fáceis de avaliar e mais precisos.
A motilidade bacteriana desempenha um papel crítico na patogenicidade bacteriana, na formação de biofilme e na resistência a drogas1. A motilidade bacteriana está intimamente associada à patogenicidade e é necessária para a colonização bacteriana durante a infecção precoce das células dohospedeiro2. A formação de biofilme está intimamente relacionada à motilidade bacteriana, onde as bactérias aderem à superfície do meio sólido através da motilidade. A motilidade bacteriana tem sido considerada positivamente correlacionada com a formação de biofilme. Um alto grau de resistência bacteriana a drogas devido ao biofilme pode levar a infecções persistentes que são uma ameaça à saúde humana 3,4,5. Portanto, é importante detectar a motilidade bacteriana. O teste de motilidade bacteriana é usado principalmente para examinar a motilidade de diferentes formas de bactérias no estado vivo, que podem determinar indiretamente a presença ou ausência de flagelos e, portanto, tem um papel importante na identificação de bactérias.
Existem métodos diretos e indiretos para detectar a motilidade bacteriana6. Como as bactérias com flagelos apresentam motilidade, é possível detectar se as bactérias são móveis indiretamente, detectando a presença ou ausência de flagelos. Por exemplo, é possível detectar a motilidade indiretamente por microscopia eletrônica e coloração flagelar para indicar que as bactérias são móveis. Também é possível detectar por métodos diretos, como queda de suspensão e punção semissólida.
O método de punção semissólido comumente utilizado em laboratórios de microbiologia de graduação para detectar motilidade bacteriana inocula a bactéria na punção em meio ágar semissólido contendo 0,4-0,8% de ágar, de acordo com a direção do crescimento bacteriano. Se a bactéria crescer ao longo da linha de punção para se espalhar, aparecem vestígios de crescimento semelhantes a nuvens (semelhantes a escovas), indicando a presença de flagelos e, portanto, motilidade. Se não houver vestígios de crescimento na linha de punção, a bactéria não é flagelada nem móvel.
No entanto, este método tem suas desvantagens: as bactérias são incolores e transparentes, a atividade flagelar é afetada pelas características fisiológicas das bactérias vivas e outros fatores, e a concentração de ágar e o pequeno diâmetro do tubo de ensaio. Além disso, bactérias aeróbias são adequadas apenas para o crescimento na superfície do ágar, afetando a observação da motilidade bacteriana. Assim, para aprimorar este experimento, o cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC) (incolor) foi adicionado ao meio para estabelecer um método mais confiável e intuitivo de determinação da motilidade bacteriana do que o método atual de punção direta, utilizando desidrogenases intracelulares para catalisar a formação de um produto vermelho do TTC 7,8,9,10.
A detecção da motilidade bacteriana pelo método do meio semissólido é afetada por váriosfatores13,14. Condições de crescimento bacteriano, como oxigênio (aeróbio na superfície do ágar, não aeróbio no fundo do tubo com o meio semissólido), pH e temperatura, podem afetar a viabilidade dos flagelos bacterianos, o que pode levar à redução da motilidade ou mesmo à perda da motilidade15. Além disso, algumas bactérias do tipo…
The authors have nothing to disclose.
Este estudo foi apoiado pelo Desenvolvimento do Programa Acadêmico Prioritário das Instituições de Ensino Superior de Jiangsu (PAPD) e pelo Projeto de Pesquisa de Reforma do Ensino da Universidade Farmacêutica da China (2019XJYB18).
Bacto Agar | Difco | ||
Escherichia coli | ATCC | ATCC25922 | Positive control |
Pseudomonas aeruginosa | ATCC | ATCC27853 | Positive control |
Salmonella typhimurium | ATCC | ATCC14028 | Positive control |
Staphylococcus aureus | ATCC | ATCC25923 | Negative nonmotile control |
Tryptose | OXOID | ||
TTC | Sigma | 298-96-4 | |
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