Ici, nous présentons un protocole pour fracturer iatrogène la tige du fémur des rats albinos Wistar et suivre le développement du callus. Ce modèle d’ostéotomie du fémur peut aider les chercheurs à évaluer le processus de guérison des fractures et à étudier comment un médicament pourrait influencer la guérison des fractures.
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Article de méthode
Protocole pour le développement d’un modèle d’ostéotomie fémure chez le rat albinos Wistar
Dans cet article
Résumé
Résumé
La cicatrisation des fractures est un processus physiologique entraînant la régénération des défauts osseux par l’action coordonnée des ostéoblastes et des ostéoclastes. Les médicaments ostéoanabolisants ont le potentiel d’augmenter la réparation des fractures, mais ont des contraintes telles que des coûts élevés ou des effets secondaires indésirables. Le potentiel de guérison osseuse d’un médicament peut initialement être déterminé par des études in vitro , mais des études in vivo sont nécessaires pour la preuve de concept finale. Notre objectif était de développer un modèle d’ostéotomie du fémur chez les rongeurs qui pourrait aider les chercheurs à comprendre le développement de la formation de cals à la suite d’une fracture de la tige du fémur et qui pourrait aider à établir si un médicament potentiel a des propriétés de guérison osseuse. Des rats adultes Wistar albinos mâles ont été utilisés après l’autorisation du Comité d’éthique animale de l’établissement. Les rongeurs ont été anesthésiés et, dans des conditions aseptiques, des fractures transversales complètes au milieu du tiers des tiges des fémurs ont été créées par ostéotomie ouverte. Les fractures ont été réduites et fixées à l’intérieur à l’aide de fils K intramédullaires, et la cicatrisation secondaire des fractures a été autorisée. Après la chirurgie, des analgésiques intrapéritonéaux et des antibiotiques ont été administrés pendant 5 jours. Des radiographies hebdomadaires séquentielles ont évalué la formation de callosités. Les rats ont été sacrifiés en fonction de points temporels radiologiquement prédéterminés, et le développement du cal de fracture a été analysé radiologiquement et en utilisant l’immunohistochimie.
Introduction
L’os est un tissu conjonctif dense composé de cellules formant des os, les ostéoblastes, et de cellules résorbant les os, les ostéoclastes. La cicatrisation des fractures est un processus physiologique aboutissant à la régénération des défauts osseux par l’action coordonnée des ostéoblastes et des ostéoclastes1. Lorsqu’il y a une fracture, l’activité ostéoblastique et ostéoclastique au site de la fracture sont quelques-uns des facteurs importants qui déterminent la guérison osseuse2. Lorsque la guérison des fractures s’écarte de son cours normal, il en résulte une union retardée, une malunion ou une non-union. Une fractu....
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Protocole
Les expériences sur les animaux ont été réalisées après avoir obtenu l’approbation éthique du Comité institutionnel d’éthique animale (IAEC), AIIMS, New Delhi, Inde (286/IAF-1/2021).
1. Procédure préopératoire
- Hébergez des rats albinos Wistar mâles âgés de 6 à 8 semaines, pesant entre 150 et 200 g chacun, dans une animalerie centrale (CAF) dans des cages individuelles séparées. Cela garantit qu’il n’y a pas de blessure chirurgicale ou au site de fracture lorsque plusieurs rats partagent des cages.
- Maintenir les rats à une température de 23 °C ± 2 °C dans un environnement à humidité contrôlée avec une hum....
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Résultats
Cette étude a été entreprise pour développer un modèle d’ostéotomie du fémur chez des rats albinos Wistar. Ce modèle peut être utilisé pour évaluer la guérison osseuse, ainsi que l’effet ostéogénique d’un médicament ostéoanabolisant prometteur dans la guérison osseuse. Les précautions et protocoles chirurgicaux standard ont été suivis. Des blouses stériles, des champs et du matériel chirurgical ont été utilisés pour l’intervention (figure 1). L’équipement (tableau 1) a été s.......
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Discussion
Cette méthode décrit avec lucidité les détails nécessaires pour développer un modèle d’ostéotomie de fracture chez les rats albinos Wistar. Ce modèle peut être utilisé pour évaluer l’effet ostéogénique d’un médicament ostéoanabolisant prometteur dans la guérison des fractures, ainsi que pour comprendre les subtilités de la guérison osseuse. La caractéristique principale de cette méthode est qu’elle est simple et ne nécessite pas trop de temps ou d’équipement sophistiqué. Dans cette méthode, des rats albinos Wistar mâles .......
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Déclarations de divulgation
Aucun des auteurs n’a de conflit d’intérêts ou d’autres divulgations financières.
Remerciements
Les auteurs tiennent à remercier le Conseil central pour la recherche en homéopathie (CCRH), Ministère de l’AYUSH, Gouvernement de l’Inde, pour le financement de la recherche. Les auteurs sont reconnaissants pour l’aide et le soutien de Central Animal Facility, AIIMS, New Delhi, pour leur aide et leur soutien avec les expériences animales et CMET, AIIMS, New Delhi, pour leur aide et leur soutien en photographie et vidéographie.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Alcool | Raman & Weil Pvt. Ltd, Mumbai, Maharashtra, Inde | MFG/MD/2019/000189 | Désinfectant pour les mains Sterillium |
| Pince à artères ; | Nébuleuse chirurgicale, Gujarat, Inde | G.105.05S | 5", |
| poignée droite Bard-Parker ; | Nébuleuse chirurgicale, Gujarat, Inde | G.103.03 | Taille numéro 3 |
| Solution de bétadine | Win-medicare New Delhi, Inde | UP14250000001 | 10 % p/v Povidone solution iodée |
| écarteur de peau de patte de chat ; | Nebula chirgical, Gujarat, Inde | 908.S | Petits |
| EDTA | Sisco Pvt. Ltd, Maharashtra, Inde | 43272 | Sel disodique |
| Eosin | Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, Inde | 115935 | Pour préparer la solution de coloration ; |
| Pince (simple) | Nébuleuse chirurgicale, Gujarat, Inde | 115.06 | 6 », lisse |
| Pince (dentée) | Nébuleuse chirurgicale, Gujarat, Inde | 117.06 | 6 », dentée |
| Formaldéhyde | Sisco research laboratories Pvt. Ltd, Maharashtra, Inde | 84439 | Pour la préparation du formol tamponné neutre ; |
| Haematoxylin | Sigma Aldrich, Merck Life Sciences Pvt Ltd, Mumbai, Maharashtra, Inde | 104302 | Pour préparer la solution de coloration ; |
| Hammer | Nebula chirurgical, Gujarat, Inde | 401.M | |
| Injection Cefuroxime | Akumentis Healthcare Ltd, Thane, Maharashtra, Inde | 48/UA/SC/P-2013 | Cefuroxime sodium IP, 1,5 g/flacon ; |
| Injection de kétamine | Baxter Pharmaceuticals India Private Limited, Gujarat, Inde | G/28-B/6 | Chlorhydrate de kétamine IP, 50 mg/mL ; |
| Injection Xylazine | Indian Immunologicals Limited, Hyderabad, Telangana, Inde | 28/RR/AP/2009/F/G | Chlorhydrate de xylazine USP, 20 mg/mL |
| Injection Lignocaine | Jackson laboratories Pvt Limited, Pendjab, Inde ; | 1308-B | Chlorhydrate de lignocaïne à 2 % IP, 21,3 mg/mL |
| Tramadol injectable ; | Intas Pharmaceuticals Limited, Ahmedabad, Gujarat, Inde | MB/07/500 | Chlorhydrate de tramadol IP, 50 mg/mL |
| K-wire ; | Nébuleuse chirurgicale, Gujarat, Inde | 166 (1mm) | 12", perceuse mécanique à double extrémité |
| pour l’insertion de fil K& | lrm ; Bosch, Allemagne ; | 06019F70K4 | GSR 120-LI |
| Ciseaux de coupe professionnels Metzenbaum ; | Nébuleuse chirurgicale, Gujarat, Inde | G.121.06S | 6 », droit |
| Porte-aiguille | Nébuleuse chirurgicale, Gujarat, Inde | G.108.06 | 6 », |
| droit Pommade ophtalmique ; | GlaxoSmithKline Pharmaceutical Limited, Bangalore, Karnataka, Inde | KTK/28a/467/2001 | Néomycine, polymixine B sulfate et bacitracine zinc pommade ophtalmique USP |
| Ostéotome (ciseau) | Nébuleuse chirurgicale, Gujarat, Inde | 1001.S.10 | 10 mm, |
| élévateur périosté droit ; | Nébuleuse chirurgicale, Gujarat, Inde | 918.10.S | 10 mm, droite |
| Pince coupante | Nébuleuse chirurgicale, Gujarat, Inde | 604.65 | |
| Reynold' s ciseaux | Nebula chirgical, Gujarat, Inde | G.110.06S | 6", droit |
| Régime semi-synthétique standard ; | Ashirvad Industries, Chandigarh, Inde | Aucun numéro de catalogue disponible Composition | détaillée fournie dans les matériaux utilisés |
| Tasse en acier pour conserver la bétadine pour l’application | Achat local | Aucun numéro de catalogue disponible | |
| Plateau en acier avec couvercle pour instruments d’autoclave | Achat local | Aucun numéro de catalogue disponible | |
| Gaze stérile | Ideal Healthcare Industries, Delhi, Inde& nbsp ; | E(0047)/14/MNB/7951 | Stérile, 5cmx5cm, 12 plis |
| Bloc de marbre stérile pour support Achat | local | Aucun numéro de catalogue disponible | Fabriqué localement ; |
| seringue et aiguille autoclavables (1 mL) ; | Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, Inde | REF 303060 | Seringue stérile de 1 mL avec aiguille de 26 G x 1/2 (0,45 mm x 13 mm) |
| Seringue et aiguille (2 mL) ; | Becton Dickinson India Pvt. Ltd., Haryana, Inde | REF 307749 | Seringue stérile de 2 mL avec aiguille de 24 g x 1 po (0,55 mm x 25 mm) |
| et aiguille (10 mL) ; | Seringues Hindustan & Medical Devices Ltd. Faridabad, Inde ; | Seringue stérile 334-B(H) | 10 mL avec aiguille de 21 G x 1,5" (0,80 mm x 38 mm) |
| Lames chirurgicales (taille n°15) | Paramount Surgimed Ltd, New Delhi, Inde pour Medline Industries Inc, IL, USA | REF | Stérile à usage unique |
| Lames chirurgicales (taille n°24) | Paramount Surgimed Ltd, New Delhi, Inde pour Medline Industries Inc, IL, USA | REF | Stérile, |
| Sutures | Healthium Medtech Pvt Ltd, Bangalore, Karnataka, Inde | SN 3318 | 4-0, 16 mm, aiguille coupante circulaire 3/8, suture monofilament polyamide ; |
| Bloc de cire dans un plateau en aluminium ; | Fabriqué localement | Aucun numéro de catalogue disponible | Plateau en aluminium de 30 cm x 30 cm x 4 cm contenant de la cire (pour éviter que l’animal ne glisse) |
| Appareil à rayons X | Philips India Ltd, Gurugram, Haryana | SN19861013 | Modèle : Philips Digital Diagnost R 4.2 ; |
Références
- Wang, T., Zhang, X., Bikle, D. D. Osteogenic differentiation of periosteal cells during fracture healing. Journal of Cellular Physiology. 232 (5), 913-921 (2017).
- Fakhry, M., Hamade, E., Badran, B., Buchet, R., Magne, D. Molecular me....
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Réimpressions et autorisations
