Здесь мы представляем протокол почечной симпатической денервации (RDN) у мышей с гипертонией, вызванной инфузией ангиотензина II. Процедура повторяема, удобна и позволяет изучить регуляторные механизмы РДН при гипертонии и гипертрофии сердца.
Преимущества почечной симпатической денервации (RDN) на артериальное давление были доказаны в большом количестве клинических испытаний в последние годы. Однако регуляторный механизм RDN по гипертонии остается неуловимым. Таким образом, важно установить более простую модель RDN на мышах. В этом исследовании осмотические мини-насосы, заполненные ангиотензином II, были имплантированы 14-недельным мышам C57BL/6. Через неделю после имплантации мини-осмотического насоса на двусторонних почечных артериях мышей с использованием фенола была проведена модифицированная процедура RDN. Мышам, соответствующим половому признаку, давали физиологический раствор и служили в качестве фиктивной группы. Артериальное давление измеряли на исходном уровне и каждую неделю впоследствии в течение 21 дня. Затем почечная артерия, брюшная аорта и сердце были собраны для гистологического исследования с использованием окрашивания H&E и Masson. В этом исследовании мы представляем простую, практичную, повторяемую и стандартизированную модель RDN, которая может контролировать гипертонию и облегчать гипертрофию сердца. Методика позволяет денервировать периферические почечные симпатические нервы без повреждения почечной артерии. По сравнению с предыдущими моделями, модифицированный RDN облегчает изучение патобиологии и патофизиологии гипертонии.
Гипертония является основным хроническим сердечно-сосудистым заболеванием во всем мире. Неконтролируемая гипертония может повредить органы-мишени и способствовать сердечной недостаточности, инсульту и хроническим заболеваниям почек 1,2,3. Распространенность гипертонии увеличилась с 20% до 31% в период с 1991 по 2007 год в Китае. Число взрослых с гипертонией в Китае может удвоиться после недавнего пересмотра диагностических критериев гипертонии (130/80 мм рт.ст.)4. Гипертонию можно контролировать медикаментозно, однако примерно 20% пациентов не в состоянии контролировать свою гипертензию даже при приеме не менее трех гипотензивных препаратов (в том числе одного мочегонного) в максимально переносимой дозе, что может привести к развитию лекарственно-устойчивой гипертензии5.
Было доказано, что почечная симпатическая денервация (RDN) является потенциальным средством лечения гипертонии. В 2009 году Крум и его коллеги впервые сообщили о лечении резистентной гипертонии с использованием RDN. Установлено, что чрескожная абляция почечной артерии может эффективно вызывать стойкое снижение артериального давления у пациентов6. Однако неудача исследования Symplicity Hypertension 3 (HTN-3) препятствовала применению RDN7, превращая RDN в спорную терапию. Тем не менее, перспектива РДН пока не исключена. Недавние клинические испытания, в том числе RADIANCE-HTN SOLO, SPYRAL HTN-OFF MED/ON MED и SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal подтвердили эффективность RDN при гипертонии 8,9,10,11,12. Таким образом, необходимо провести более подробные механистические исследования для изучения эффектов RDN.
Общая цель этого исследования состоит в том, чтобы продемонстрировать, как RDN у мышей может быть модифицирован для получения более простой и стабильной операции. В большом количестве экспериментов изучались различные подходы РДН, такие как внутрисосудистая криоабляция, экстракорпоральное ультразвуковое исследование и местное применение химического вещества или нейротоксина на разных животных моделях 13,14,15,16,17. Модель RDN, сгенерированная с использованием химической абляции фенолом, является хорошо зарекомендовавшей себя экспериментальной моделью для изучения патогенеза симпатической активации при гипертонии. Данная модель генерируется химической коррозией почечных симпатических нервов 10% раствором фенола/этанола с использованием ватного тампона18. С одной стороны, обычный RDN потенциально ингибирует симпатическую активность почек, что затем уменьшает секрецию ренина и реабсорбцию натрия, а также увеличивает почечный кровоток. С другой стороны, он подавляет ренин-ангиотензин-альдостероновую систему19. Таким образом, РДН благотворно влияет на гипертонию. Однако в модели RDN, генерируемой химической абляцией, отсутствуют критерии абляции и время абляции, а детали экспериментальной процедуры пока неясны. Кроме того, отсутствуют технические отчеты. В этом отчете мы описываем хирургический протокол для генерации модели RDN с фенолом с использованием весовой бумаги в ангиотензине II (Ang II), индуцированной гипертонией у мышей C57BL/6. Мы оборачиваем почечную артерию бумагой для взвешивания, содержащей фенол, и унифицируем время абляции, что помогает установить более воспроизводимую, надежную модель RDN. Данная экспериментальная модель направлена на оценку влияния RDN на гипертонию.
Вопрос о том, может ли RDN снизить артериальное давление, стал спорным с момента публикации отрицательного результата исследования симплицитности HTN-3 7,25. Тем не менее, несколько клинических испытаний и экспериментов на животных продемонстрировали положи…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (81770420), Комиссией по науке и технике муниципалитета Шанхая (20140900600), Шанхайской ключевой лабораторией клинической гериатрической медицины (13dz2260700), Шанхайской муниципальной ключевой клинической специальностью (shslczdzk02801) и Центром гериатрической болезни коронарной артерии больницы Хуадун, аффилированной с Фуданьским университетом.
Angiotensin II | Sangon Biotech | CAS:4474-91-3 | To make a hypertensive animol model |
Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody | Abcam | ab137869 | To evaluate the expression of TH of renal nerves |
Blood Pressure Analysis | Visitech Systems | BP-2000 | Measure the blood pressure of mice |
Mini-osmotic pump | DURECT Corporation | CA 95014 | To fill with Angiotensin II |
Norepinephrine ELISA Kit | Abcam | ab287789 | to measure renal norepinephrine levels |
Phenol | Sangon Biotech | CAS:108-95-2 | Damage the renal sympathetic nerve |
Weighing paper | Sangon Biotech | F512112 | To destroy renal nerve with weighing paper immersed with phenol; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112. |