प्रायोगिक ऑटोम्यून्यून एन्सेफलोमाइलाइटिस के प्रेरण और विविध मूल्यांकन संकेतक

Summary

वर्तमान प्रोटोकॉल माइलिन ऑलिगोडेंड्रोसाइट ग्लाइकोप्रोटीन का उपयोग करके माउस मॉडल में प्रयोगात्मक ऑटोइम्यून एन्सेफैलोमाइलाइटिस के प्रेरण का वर्णन करता है और नैदानिक स्कोरिंग सिस्टम का उपयोग करके रोग प्रक्रिया की निगरानी करता है। प्रयोगात्मक ऑटोम्यून्यून एन्सेफैलोमाइलाइटिस से संबंधित लक्षणों का विश्लेषण माउस फीमर माइक्रो-कंप्यूटेड टोमोग्राफी विश्लेषण और रोग प्रक्रिया का व्यापक रूप से आकलन करने के लिए ओपन फील्ड टेस्ट का उपयोग करके किया जाता है।

Abstract

मल्टीपल स्केलेरोसिस (एमएस) केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) की एक विशिष्ट ऑटोइम्यून बीमारी है जो भड़काऊ घुसपैठ, डिमाइलिनेशन और अक्षीय क्षति की विशेषता है। वर्तमान में, एमएस को पूरी तरह से ठीक करने के लिए कोई उपाय नहीं हैं, लेकिन रोग की प्रगति को नियंत्रित करने और कम करने के लिए कई रोग-संशोधित उपचार (डीएमटी) उपलब्ध हैं। प्रयोगात्मक ऑटोम्यून्यून एन्सेफैलोमाइलाइटिस (ईएई) और एमएस रोगियों की सीएनएस पैथोलॉजिकल विशेषताओं के बीच महत्वपूर्ण समानताएं हैं। ईएई का व्यापक रूप से एमएस दवाओं की प्रभावकारिता निर्धारित करने और एमएस रोग के लिए नए उपचारों के विकास का पता लगाने के लिए एक प्रतिनिधि मॉडल के रूप में उपयोग किया गया है। चूहों में ईएई के सक्रिय प्रेरण का एक स्थिर और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रभाव होता है और ऑटोइम्यून न्यूरोइन्फ्लेमेशन पर दवाओं या जीन के प्रभावों का अध्ययन करने के लिए विशेष रूप से उपयुक्त होता है। माइलिन ऑलिगोडेंड्रोसाइट ग्लाइकोप्रोटीन (एमओजी_35-55) के साथ सी 57बीएल / 6 जे चूहों को प्रतिरक्षित करने की विधि और नैदानिक स्कोरिंग प्रणाली का उपयोग करके रोग के लक्षणों का दैनिक मूल्यांकन मुख्य रूप से साझा किया जाता है। विभिन्न नैदानिक अभिव्यक्तियों के साथ एमएस के जटिल एटियलजि को देखते हुए, मौजूदा नैदानिक स्कोरिंग प्रणाली रोग उपचार के मूल्यांकन को संतुष्ट नहीं कर सकती है। एकल हस्तक्षेप की कमियों से बचने के लिए, एमएस रोगियों में चिंता जैसे मूड और ऑस्टियोपोरोसिस की नैदानिक अभिव्यक्तियों के आधार पर ईएई का आकलन करने के लिए नए संकेतक एमएस उपचार का अधिक व्यापक मूल्यांकन प्रदान करने के लिए बनाए गए हैं।

Introduction

ऑटोइम्यून रोग अपने स्वयं के एंटीजन के लिए प्रतिरक्षा प्रणाली की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के कारण होने वाले विकारों का एक स्पेक्ट्रम है जिसके परिणामस्वरूप ऊतक क्षति या शिथिलता^होती है। मल्टीपल स्केलेरोसिस (एमएस) केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) में पॉलीन्यूरोपैथी की एक पुरानी ऑटोइम्यून बीमारी है, जो भड़काऊ घुसपैठ, डिमाइलिनेशन और न्यूरोनल अक्षीय अध: पतन ^2,3 की विशेषता है। वर्तमान में, एमएस ने दुनिया भर में 2.5 मिलियन लोगों को प्रभावित किया है, ज्यादातर 20-40 वर्ष की आयु के युवा और मध्यम आयु वर्ग के लोग, जो अक्सर अपने परिवारों और समाज की रीढ़ होते हैं। इसने परिवारों^{और समाज को} काफी प्रभाव और नुकसान ^{पहुंचाया है}।

एमएस विविध और जटिल नैदानिक अभिव्यक्तियों के साथ एक बहुक्रियात्मक बीमारी है। भड़काऊ घुसपैठ और डिमाइलिनेशन की विशेषता वाले क्लासिक न्यूरोलॉजिकल विकारों के अलावा, एमएस अक्सर दृश्य हानि, अंग डिस्केनेसिया और संज्ञानात्मक और भावनात्मक विकार ^5,6,7 दिखाता ^है। यदि एमएस रोगियों को उचित और सही उपचार नहीं मिलता है, तो उनमें से आधे 20 वर्षों के बाद व्हीलचेयर में रहेंगे, और उनमें से लगभग आधे अवसादग्रस्तता और चिंता के लक्षणों का अनुभव करेंगे, जिससे सामान्य आबादी ^8,9 की तुलना में आत्मघाती विचारधारा का स्तर बहुत अधिक होगा।

एक लंबी शोध अवधि के बावजूद, एमएस का एटियलजि मायावी बना हुआ है, और एमएस के रोगजनन को अभी तक स्पष्ट नहीं किया गया है। एमएस के पशु मॉडल ने कृंतक और मानव प्रतिरक्षा प्रणाली के बीच महत्वपूर्ण अंतर के बावजूद, रोग के विकास और नए चिकित्सीय दृष्टिकोणों का पता लगाने के लिए परीक्षण उपकरण के रूप में सेवा करने की अनुमति दी है, जबकि एक ही समय में कुछ बुनियादी सिद्धांतों को साझा किया है। प्रायोगिक ऑटोम्यून्यून एन्सेफैलोमाइलाइटिस (ईएई) वर्तमान में एमएस का अध्ययन करने के लिए आदर्श पशु मॉडल है, जो अतिसंवेदनशील चूहों में सीएनएस घटकों को ऑटोइम्यूनिटी को प्रेरित करने के लिए माइलिन प्रोटीन से ऑटोएंटीजन प्रतिरक्षा का उपयोग करता है, जिसमें ह्यूमरल प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को बढ़ाने के लिए पूर्ण फ्रायंड के सहायक (सीएफए) और पर्टुसिस टॉक्सिन (पीटीएक्स) को जोड़ा जाता है। आनुवंशिक पृष्ठभूमि और प्रतिरक्षा एंटीजन के आधार पर, एमएस^10,11,12 के विभिन्न नैदानिक रूपों की नकल करने के लिए तीव्र, रिलैप्सिंग-रेमिटिंग, या क्रोनिक सहित विभिन्न रोग प्रक्रियाएं प्राप्त की जाती हैं। ईएई मॉडल के निर्माण में आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले प्रासंगिक इम्यूनोजेनस्व-सीएनएस प्रोटीन से आते हैं, जैसे माइलिन बेसिक प्रोटीन (एमबीपी), प्रोटिओलिपिड प्रोटीन (पीएलपी), या माइलिन ऑलिगोडेंड्रोसाइट ग्लाइकोप्रोटीन (एमओजी)। एमबीपी- या पीएलपी-प्रतिरक्षित एसजेएल / एल चूहों में रिलैप्सिंग-रेमिटिंग कोर्स विकसित होता है, और एमओजी सी 57बीएल / 6 चूहों ^11,12,13 में क्रोनिक प्रगतिशील ईएई को ट्रिगर करता है।

रोग-संशोधित चिकित्सा (डीएमटी) का मुख्य उद्देश्य रोग के लक्षणों को कम करना और कार्य⁶ में सुधार करना है। एमएस को कम करने के लिए कई दवाओं का चिकित्सकीय रूप से उपयोग किया जाता है, लेकिन इसे पूरी तरह से ठीक करने के लिए अभी तक किसी भी दवा का उपयोग नहीं किया गया है, जिससे सहक्रियात्मक उपचार की आवश्यकता का पता चलता है। C57BL/6 चूहों को वर्तमान में ट्रांसजेनिक चूहों के निर्माण के लिए सबसे अधिक उपयोग किया जाता है, और इस काम में, रोग की प्रगति की निगरानी के लिए_{5-बिंदु} पैमाने के साथ C57BL / 6J चूहों में MOG 35-55 द्वारा प्रेरित एक EAE मॉडल का उपयोग किया गया था। ईएई मॉडल भी चिंता जैसे मूड और हड्डी के नुकसान से पीड़ित हैं, और व्यापक रूप से ज्ञात डिमाइलेटिंग घाव। यहां, ओपन-फील्ड टेस्ट और माइक्रो-कंप्यूटेड टोमोग्राफी (माइक्रो-सीटी) विश्लेषण का उपयोग करके कई दृष्टिकोणों से ईएई के लक्षणों का आकलन करने की विधि भी वर्णित है।

Protocol

टोंगजी विश्वविद्यालय की पशु देखभाल समिति ने वर्तमान कार्य को मंजूरी दे दी, और सभी पशु देखभाल दिशानिर्देशों का पालन किया गया। प्रयोगों के लिए 8-12 सप्ताह की उम्र के बीच नर या मादा C57BL / 6J चूहों का उपयोग किया ग?…

Representative Results

चूहों के टीकाकरण के बाद, चूहों के शरीर का वजन दैनिक दर्ज किया जाता है, और उनके नैदानिक लक्षणों का मूल्यांकन ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल (चरण 4) के अनुसार किया जाता है। सी 57बीएल / 6 जे चूहों में एमओजी पेप्टाइड के सा?…

Discussion

एमएस सीएनएस की एक डिमाइलेटिंग भड़काऊ बीमारी है और युवा लोगों में पुरानी विकलांगता का कारण बनने वाले सबसे आम न्यूरोलॉजिकल विकारों में से एक है, जो परिवारों और समाज^पर भारी बोझ ^{डालता ?…}

Materials

1 mL syringe(with 26 G needle)	Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd	60017031
2 mL microcentrifuge tube	HAIKELASI	KY-LXG2A
22 G needle	Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd	60017208
Complete Freund’s Adjuvant	Sigma	F5881	Stored at 4 °C, 1 mg of heat-inactivated MTB (H37Ra) per mL
Conditioned place preference system	Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd		Animal behavior
Ethanol	Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd	10009218	Stored at RT
Locomotion activity (open field) video analysis system	Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd	DigBehv-002	Animal behavior
MOG35-55 peptide	Gill Biochemical Co., Ltd	GLS-Y-M-03590	Stored at -20 °C
Mycobacterium tuberculosis H37Ra	BD	231141	Stored at 4 °C
Open field reaction chamber	Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd		Animal behavior
Pertussis toxin	Calbiochem	516560	Stored at 4 °C
Phosphate Buffered Saline			Made in our laboratory
Scissor	Shanghai Medical Instrument (group) Co., Ltd	J21010
Sealing film	Heathrow Scientific	HS 234526B
Sorvall Legend Micro 21R Microcentrifuge	Thermo Scientific	75002447
Steel ball	QIAGEN	69975
TissueLyser II	QIAGEN	85300
Tweezer	Shanghai Medical Instrument (group) Co., Ltd	JD1060
μCT 35 desktop microCT scanner	Scanco Medical AG, Bassersdorf, Switzerland