Summary

Dosejustert motstandstrening hos mus med redusert risiko for muskelskade

Published: August 31, 2022
doi:

Summary

Denne protokollen beskriver en unik teknikk som kalles doseringsjustert motstandstrening (DART), som kan inkorporeres i presisjonsrehabiliteringsstudier utført på små dyr, for eksempel mus.

Abstract

Progressiv motstandstrening (PRT), som innebærer å utføre muskelkontraksjoner mot gradvis større ytre belastninger, kan øke muskelmassen og styrken hos friske individer og i pasientpopulasjoner. Det er behov for presisjonsrehabiliteringsverktøy for å teste sikkerheten og effektiviteten av PRT for å opprettholde og/eller gjenopprette muskelmasse og styrke i prekliniske studier på små og store dyremodeller. PRT-metoden og enheten beskrevet i denne artikkelen kan brukes til å utføre dosejustert motstandstrening (DART). DART-enheten kan brukes som et frittstående dynamometer for objektivt å vurdere det konsentriske kontraktile dreiemomentet som genereres av ankeldorsiflexorene hos mus, eller kan legges til et eksisterende isokinetisk dynamometrisystem. DART-enheten kan fremstilles med en standard 3D-skriver basert på instruksjonene og open source 3D-utskriftsfiler som er gitt i dette arbeidet. Artikkelen beskriver også arbeidsflyten for en studie for å sammenligne sammentrekningsindusert muskelskade forårsaket av et enkelt anfall av DART med muskelskade forårsaket av et sammenlignbart anfall av isometriske sammentrekninger (ISOM) i en musemodell av limb-girdle muskeldystrofi type 2B / R2 (BLAJ mus). Dataene fra åtte BLAJ-mus (fire dyr for hver tilstand) antyder at mindre enn 10% av tibialis anterior (TA) muskelen ble skadet fra et enkelt utbrudd av DART eller ISOM, med DART som mindre skadelig enn ISOM.

Introduction

Trening gir mange helsemessige fordeler på skjelettmuskulatur (omtalt i Vina et al.1). Spesielt er progressiv motstandstrening (PRT), som innebærer å utføre muskelkontraksjoner mot gradvis større eksterne belastninger (f.eks. Vektstenger, manualer, kabel-trinsevektkretser), kjent for å bidra til å øke muskelmasse og styrke hos både friske individer og pasientpopulasjoner (gjennomgått i tidligere publikasjoner 2,3 ). PRT er basert på overbelastningsprinsippet, som sier at når muskelen trekker seg sammen mot gradvis større ytre belastninger, tilpasser den seg ved å øke sitt fysiologiske tverrsnittsareal samt kraftproduserende kapasitet4. Eksisterende modeller av PRT hos gnagere inkluderer stigeklatring med motstand påført halen, sammentrekning av agonistmuskler mot motstand fra antagonister, løping med vektet sele, en hukøvelse fremkalt av et elektrisk støt og motståtthjulkjøring 5,6,7,8,9,10 (gjennomgått i tidligere publikasjoner 11,12 ). Imidlertid er det for tiden ingen forskningsverktøy for å utføre nøyaktig muskelmålrettet, doseringsjustert PRT hos mus som ligner PRT-metodene og enhetene som brukes i menneskelig klinisk forskning og praksis12,13. Dette begrenser utprøvernes evne til å studere sikkerheten og effektiviteten av nøyaktig dosert PRT i grunnleggende og prekliniske studier på mus.

For å overvinne denne barrieren utvikles en PRT-metodikk og enhet i denne studien basert på kabel-trinse-vektkretsdesignene som brukes i motstandstreningsutstyr i moderne gymsaler14,15,16. Denne metoden for PRT kalles doseringsjustert motstandstrening (DART), og enheten kalles DART-enheten. I tillegg til funksjonaliteten som et presisjonsrehabiliteringstreningsverktøy, kan DART-enheten også brukes som et frittstående instrument for objektivt å vurdere det maksimale konsentriske kontraktile dreiemomentet som kan genereres av tibialis anterior (TA) muskelen i en mus, på samme måte som maksimumet for en repetisjon (1RM, den maksimale belastningen som kan løftes / flyttes / presses / knebøyes bare en gang mens du opprettholder god form) vurderes hos mennesker17, 18. DART-enheten kan også kobles til et spesialbygd eller kommersielt isokinetisk dynamometer for å måle den høyeste isometriske tetaniske kraften produsert av TA-muskelen i en mus (sammenlignbar med maksimal frivillig sammentrekning [MVC] hos mennesker) og deretter utføre doseringsjustert PRT med en motstand som er basert på topp tetanisk kraft (f.eks. 50% av toppkraften).

Denne artikkelen beskriver konstruksjonen av DART-enheten og forklarer hvordan den kan kobles til et spesialbygd dynamometer, som er beskrevet i tidligere publikasjoner 19,20,21,22, for å vurdere kontraktilt dreiemoment og utføre DART. Studien beskriver også hvordan DART-enheten ble brukt til å sammenligne treningsindusert muskelskade forårsaket av en enkelt DART (4 sett med 10 konsentrisk forspent sammentrekninger med 50% 1RM) til skade forårsaket av en sammenlignbar kamp av isometriske sammentrekninger (4 sett med 10 isometriske sammentrekninger) i en musemodell av limb-girdle muskeldystrofi type 2B (LGMD2B, eller LGMDR2)23,24. Musemodellen som ble studert mangler et protein kalt dysferlin, som spiller en viktig rolle i å beskytte skjelettmuskulaturen mot forsinket muskelskade etter skadelige eksentriske sammentrekninger 22,25,26,27,28,29,30 . Det har også blitt demonstrert hos dysferlin-mangelfulle hannmus at konsentrisk partisk tvungen trening ikke er like skadelig som eksentrisk partisk tvungen trening, og at tidligere eksponering for konsentrisk partisk trening gir beskyttelse mot skade fra et påfølgende anfall av eksentrisk partiske sammentrekninger22. Siden den nåværende studien ble utført for å teste muligheten for den nåværende DART-metoden og enheten ved å utføre dosejustert, konsentrisk partisk motstandstrening, ble mannlige dysferlinfattige mus valgt for undersøkelsen for å sammenligne nye data fra DART-enheten med tidligere data. I fremtidige studier vil kvinnelige BLAJ-mus bli inkludert for å studere effekten av kjønn som en biologisk variabel i forhold til responsen på DART. Mus som var ~ 1,5 år gamle ble studert siden de allerede har dystrofiske forandringer i mange muskelgrupper og derfor modellerer den patofysiologiske tilstanden der muskler kan være hos pasienter som allerede har muskelsvakhet og sløsing og søker rehabiliterende behandling for å opprettholde muskelmasse og styrke26.

Protocol

Eksperimentene beskrevet i denne artikkelen ble godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Wayne State University, Detroit, Michigan, USA, i samsvar med Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (1996, utgitt av National Academy Press, 2101 Constitution Ave. NW, Washington, DC 20055, USA). B6. A-Dysfprmd/GeneJ-mus (aka BLAJ-mus, hanner, ~1,5 år) som modellerer LGMD2B/R2 ble brukt til denne studien. Musene ble hentet fra en kommersiell kilde (se materialtabell</…

Representative Results

BLAJ hannmus, som var ~ 1,5 år gammel, ble studert. BLAJ-mus modellerer den menneskelige muskelsykdommen, LGMD2B/R2. Disse musene er spesielt utsatt for forsinket innsettende muskelskade fra et enkelt anfall av eksentriske muskelkontraksjoner22,29. BLAJ-mus ble derfor valgt for disse studiene for å lære om DART kunne utføres på en ikke-skadelig måte ved nøyaktig å justere motstanden som TA-muskelen må jobbe mot på en konsentrisk partisk måte. Hvis det …

Discussion

Denne artikkelen presenterer trinnvise instruksjoner om hvordan du konstruerer en enhet for å utføre en type presisjonsrehabiliteringstrening kalt doseringsjustert motstandstrening (DART). Arbeidet beskriver også anvendelsen av DART-enheten og metodikken i en treningsstudie for å sammenligne muskelskade 3 dager etter et enkelt anfall av DART (DART-gruppe) med skade 3 dager etter en sammenlignbar kamp med isometrisk trening (ISOM-gruppen).

De kritiske trinnene i protokollen er riktig konstr…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Denne studien ble finansiert av tilskudd fra Jain Foundation Inc., R03HD091648 fra NICHD, et pilotstipend fra AR3T under NIH P2CHD086843, en FRAP-pris fra EACPHS ved Wayne State University, en fakultetsoppstartspakke fra Wayne State University, og en underkontrakt fra 1R01AR079884-01 (Peter L. Jones PI) til JAR. Denne studien ble også finansiert av et amerikansk fysioterapiforening – Michigan (APTA-MI) forskningsstipend til JMB, MEP og JAR. Forfatterne anerkjenner Dr. Renuka Roche (lektor, Eastern Michigan University, MI) for kritisk å lese manuskriptet og gi tilbakemelding. Forfatterne anerkjenner Mr. Anselm D. Motha for råd om 3D-utskrift. Forfatterne takker pasientene med dysferlinopatier som har delt sine historier på Jain Foundation nettside på https://www.jain-foundation.org/patient-physician-resources/patient-stories, spesielt deres erfaringer med trening.

Materials

AnMiao Star 608 Ceramic Ball Bearing Anmiao Star (N/A) AMS127 High precision, low friction wheel bearing.  If make and model is not commercially available, an alternative version of a 608 low-friction wheel bearing, 8 mm bore diameter,  22 mm outside diameter, with silicon nitride ceramic balls in 420 stainless steel housing should suffice.  Excess friction in the wheel bearing will adversely impact performance of the DART device and will increase overall resistance to muscle contractions.
Axio Scope.A1 microscope Carl Zeiss (Peabody, MA) Product #Axio Scope.A1 Light and fluorescence microscope
B6.A-Dysfprmd/GeneJ (a.k.a. BLAJ mice) The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME).  Special colony maintained by The Jain Foundation Inc. for collaborators who study dysferlin. Stock #012767 Dysferlin deficient mice that model human limb girdle muscular dystrophy type 2B/R2.
Bipolar, transcutaneous, neuromuscular electrical stimulation (NMES) electrode Harvard Apparatus, Holliston, MA BS4 50–6824 Electrode for NMES.  If this electrode is not commercially available, please contact corresponding author for alternatives.
Coplin Staining Dish ThermoFisher (Waltham, MA) Catalog No. S17495 Staining dish/jar for hematoxylin and eosin (H&E) staining of sections
Cura 4.4.1. Software Ultimaker, Utrecht, Netherlands Ultimaker Cura 4.4.1. Slicing software to convert stereolithography files into G-CODE files
Deltaphase isothermal gel heating pad Braintree Scientific (Braintree, MA) Item #39DP Heating pad to provide thermal support to animals while under anesthesia
Eosin Y Millipore Sigma (Burlington, MA) HT110132-1L Pink cytoplasmic stain
Gorilla Super Glue The Gorilla Glue Company (Cincinnati, OH) Gorilla Super Glue Micro Precise Cyanoacrylate adhesive to bond PLA components
Hematoxylin solution, Gill No.3 Millipore Sigma (Burlington, MA) GHS332-1L Dark blue stain for nuclei
HM525NX cryostat ThermoFisher (Waltham, MA) Catalog #HM525NX Cryostat to make frozen sections of muscle
Lab Wipes.  Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipers, 1-Ply ThermoFisher (Waltham, MA) Catalog No. 06-666.  Manufacturer #34120 Laboratory wipes to blot mineral oil from muscle tissue before snap freezing and for other purposes.
Labview 2014 National Instruments, Austin, Texas, USA Labview 2014 Software for custom-written programs/routines that operate the dynamometer and trigger the NMES stimulator.
Liquid nitrogen HDPE Dewar Flasks ThermoFisher (Waltham, MA) S34074B.  Thermo Scientific 41502000/EMD Flask to hold liquid nitrogen for snap freezing muscle or other tissue
Magic depilatory cream Softsheen Carson (New York, NY) N/A Razorless hair removal cream
Metal alligator clip JINSHANGTOPK (web-based business) 24Pcs 51mm Metal Alligator Clip Spring Clamps Spring clamp to hold tibial pin
Micrscope slides Globe Scientific (Mahwah, NJ) 1354W. Diamond White Glass Slides Charged microscope slides
Mineral Oil ThermoFisher (Waltham, MA) BP26291 Mineral oil to cryoprotect muscle tissue before snap freezing
Monoprice Premium 3D Printer Filament PLA Monoprice (Rancho Cucamonga, CA) #11778 Premium 3D Printer Filament PLA 1.75mm 1 kg/spool, Gray.  This is the material used to 3D print device components.
Monoprice Select Mini V2 3D printer Monoprice (Rancho Cucamonga, CA) Mini V2 3D 3D printer for computer-aided fabrication of device components.
NIH Image software National Instritues of Health (NIH, Bethesda, MD) NIH Image for Windows Image processing and analysis software used to quantify area of muscle damage.  NIH Image is also known as Image J.
Photoshop CS4 Adobe (San Jose, CA) Creative Suite (CS4). 64 bit version for Windows Image processing and analysis software used to generate tiled/stiched images of entire muscle cross-section from images of indvidual overlapping fields
PSIU6 stimulation isolation unit Grass Instruments (West Warwick, RI) PSIU6 isolation unit Isolation unit for NMES.  Stimulators, such as Model 4100 from A-M come with a built in stimulation isoloation unit
Roboz 4-0 silk black braided suture material Roboz Surgical (Gaithersburg, MD) Roboz Surgical SUT152 Suture material to connect DART device footplate to dynamometer footplate or resistance for resistance training
S48 square pulse stimulator Grass Instruments (West Warwick, RI) S48 Stimulator Laboratory electrical stimulator for NMES .  If this stimulator is not commercially available, Model 4100 Isolated High Power Stimulator from A-M systems could be an alternative.  Please contact co-author Jones for more information.
Scott’s bluing reagent Ricca Chemical Company (Arlington, TX) 6697-32 Bluing solution that intensifies hematoxylin nuclear staining
SigmaStat version 3.5 Systat Software (San Jose, CA) SigmaStat version 3.5 Statistical software package for statistical analyses
Tabletop isoflurane vaporizer VetEquip (Livermore, CA) Item #901801 Inhaled tabletop anesthesia system
Triple antibiotic first aid ointment Global Health Products (wed-based business) Globe Triple Antibiotic First Aid Ointment, 1 oz (2-Pack) First Aid Antibiotic Ointment Antibiotic ointment applied on tibial pin as part of post-procedural care

References

  1. Vina, J., Sanchis-Gomar, F., Martinez-Bello, V., Gomez-Cabrera, M. C. Exercise acts as a drug; The pharmacological benefits of exercise. British Journal of Pharmacology. 167 (1), 1-12 (2012).
  2. Murton, A. J., Greenhaff, P. L. Resistance exercise and the mechanisms of muscle mass regulation in humans: Acute effects on muscle protein turnover and the gaps in our understanding of chronic resistance exercise training adaptation. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 45 (10), 2209-2214 (2013).
  3. Pepin, M. E., Roche, J. A., Malek, M. H., Chandler, T. J., Brown, L. E. Strength Training for Special Populations. Conditioning for Strength and Human Performance. , 547-570 (2019).
  4. Helland, C., et al. Training strategies to improve muscle power: Is Olympic-style weightlifting relevant. Medicine and Science in Sports and Exercise. 49 (4), 736-745 (2017).
  5. Souza, M. K., et al. l-Arginine supplementation blunts resistance exercise improvement in rats with chronic kidney disease. Life Sciences. 232, 116604 (2019).
  6. Schmoll, M., et al. SpillOver stimulation: A novel hypertrophy model using co-contraction of the plantar-flexors to load the tibial anterior muscle in rats. PloS One. 13 (11), 0207886 (2018).
  7. Adams, G. R., Haddad, F., Bodell, P. W., Tran, P. D., Baldwin, K. M. Combined isometric, concentric, and eccentric resistance exercise prevents unloading-induced muscle atrophy in rats. Journal of Applied Physiology. 103 (5), 1644-1654 (2007).
  8. Guedes, J. M., et al. Muscular resistance, hypertrophy and strength training equally reduce adiposity, inflammation and insulin resistance in mice with diet-induced obesity. Einstein. 18, (2019).
  9. Zhu, W. G., et al. Weight pulling: A novel mouse model of human progressive resistance exercise. Cells. 10 (9), 2459 (2021).
  10. Call, J. A., McKeehen, J. N., Novotny, S. A., Lowe, D. A. Progressive resistance voluntary wheel running in the mdx mouse. Muscle & Nerve. 42 (6), 871-880 (2010).
  11. Strickland, J. C., Smith, M. A. Animal models of resistance exercise and their application to neuroscience research. Journal of Neuroscience Methods. 273, 191-200 (2016).
  12. Greising, S. M., Basten, A. M., Schifino, A. G., Call, J. A., Greising, S. M., Call, J. A. Considerations for Small Animal Physical Rehabilitation. Regenerative Rehabilitation: From Basic Science to the Clinic. , 39-59 (2022).
  13. Roche, J. A., Greising, S. M., Call, J. A. Regenerative Rehabilitation for Nonlethal Muscular Dystrophies. Regenerative Rehabilitation: From Basic Science to the Clinic. , 61-84 (2022).
  14. Schott, N., Johnen, B., Holfelder, B. Effects of free weights and machine training on muscular strength in high-functioning older adults. Experimental Gerontology. 122, 15-24 (2019).
  15. . Dr. Gustav Zander’s Victorian-Era Exercise Machines Made the Bowflex Look Like Child’s Play Available from: https://www.smithsonianmag.com/smithsonian-institution/gustav-zander-victorian-era-exercise-machines-bowflex-180957758/ (2016)
  16. Hansson, N., Ottosson, A. Nobel prize for physical therapy? Rise, fall, and revival of medico-mechanical institutes. Physical Therapy. 95 (8), 1184-1194 (2015).
  17. ACSM. American College of Sports Medicine position stand. Progression models in resistance training for healthy adults. Medicine and Science in Sports and Exercise. 41 (3), 687-708 (2009).
  18. Suchomel, T. J., Nimphius, S., Bellon, C. R., Hornsby, W. G., Stone, M. H. Training for muscular strength: Methods for monitoring and adjusting training intensity. Sports Medicine. 51 (10), 2051-2066 (2021).
  19. Bloch, R. J., et al. Small-Animal Unit for Muscle Injury, Muscle Testing and Muscle Training in Vivo. US Patent. , (2012).
  20. Lovering, R. M., Roche, J. A., Goodall, M. H., Clark, B. B., McMillan, A. An in vivo rodent model of contraction-induced injury and non-invasive monitoring of recovery. Journal of Visualized Experiments. (51), e2782 (2011).
  21. Begam, M., et al. Diltiazem improves contractile properties of skeletal muscle in dysferlin-deficient BLAJ mice, but does not reduce contraction-induced muscle damage. Physiological Reports. 6 (11), 13727 (2018).
  22. Begam, M., et al. The effects of concentric and eccentric training in murine models of dysferlin-associated muscular dystrophy. Muscle and Nerve. 62 (3), 393-403 (2020).
  23. Straub, V., Murphy, A., Udd, B. 229th ENMC international workshop: Limb girdle muscular dystrophies – Nomenclature and reformed classification Naarden, the Netherlands. Neuromuscular Disorders. 28 (8), 702-710 (2018).
  24. . DYSFERLIN Available from: https://www.omim.org/entry/603009 (2021)
  25. Millay, D. P., et al. Genetic manipulation of dysferlin expression in skeletal muscle: Novel insights into muscular dystrophy. American Journal of Pathology. 175 (5), 1817-1823 (2009).
  26. Nagy, N., et al. Hip region muscular dystrophy and emergence of motor deficits in dysferlin-deficient Bla/J mice. Physiological Reports. 5 (6), 13173 (2017).
  27. Roche, J. A., Lovering, R. M., Bloch, R. J. Impaired recovery of dysferlin-null skeletal muscle after contraction-induced injury in vivo. Neuroreport. 19 (16), 1579-1584 (2008).
  28. Roche, J. A., et al. Extensive mononuclear infiltration and myogenesis characterize recovery of dysferlin-null skeletal muscle from contraction-induced injuries. American Journal of Physiology: Cell Physiology. 298 (2), 298-312 (2010).
  29. Roche, J. A., Ru, L. W., Bloch, R. J. Distinct effects of contraction-induced injury in vivo on four different murine models of dysferlinopathy. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 134031 (2012).
  30. Roche, J. A., et al. Myofiber damage precedes macrophage infiltration after in vivo injury in dysferlin-deficient A/J mouse skeletal muscle. American Journal of Pathology. 185 (6), 1686-1698 (2015).
  31. Ingalls, C. P., Warren, G. L., Zhang, J. Z., Hamilton, S. L., Armstrong, R. B. Dihydropyridine and ryanodine receptor binding after eccentric contractions in mouse skeletal muscle. Journal of Applied Physiology. 96 (5), 1619-1625 (2004).
  32. Dutton, M. . Orthopaedics for the Physical Therapist Assistant. , 238 (2011).
  33. Begam, M., Abro, V. M., Mueller, A. L., Roche, J. A. Sodium 4-phenylbutyrate reduces myofiber damage in a mouse model of Duchenne muscular dystrophy. Applied Physiology, Nutrition, and Metabolism. Physiologie Appliquée, Nutrition et Métabolisme. 41 (10), 1108-1111 (2016).
  34. Tully, J. J., Meloni, G. N. A scientist’s guide to buying a 3D printer: How to choose the right printer for your laboratory. Analytical Chemistry. 92 (22), 14853-14860 (2020).
  35. Schwiening, C. 3D printing primer for physiologists. Physiology News. (101), (2015).
  36. Begam, M., Roche, J. A. Damaged muscle fibers might masquerade as hybrid fibers – A cautionary note on immunophenotyping mouse muscle with mouse monoclonal antibodies. European Journal of Histochemistry. 62 (3), 2896 (2018).
  37. Lott, D. J., et al. Safety, feasibility, and efficacy of strengthening exercise in Duchenne muscular dystrophy. Muscle & Nerve. 63 (3), 320-326 (2021).
  38. Lindsay, A., Larson, A. A., Verma, M., Ervasti, J. M., Lowe, D. A. Isometric resistance training increases strength and alters histopathology of dystrophin-deficient mouse skeletal muscle. Journal of Applied Physiology. 126 (2), 363-375 (2019).
  39. Dalkin, W., Taetzsch, T., Valdez, G. The fibular nerve Injury method: A reliable assay to identify and test factors that repair neuromuscular junctions. Journal of Visualized Experiments. (114), e54186 (2016).
  40. Amend, S. R., Valkenburg, K. C., Pienta, K. J. Murine hind limb long bone dissection and bone marrow isolation. Journal of Visualized Experiments. (110), e53936 (2016).
  41. Gerlinger-Romero, F., et al. Non-invasive assessment of dorsiflexor muscle function in mice. Journal of Visualized Experiments. (143), e58696 (2019).
  42. Brightwell, C. R., et al. In vivo measurement of knee extensor muscle function in mice. Journal of Visualized Experiments. (169), e62211 (2021).
  43. Pratt, S. J. P., Lawlor, M. W., Shah, S. B., Lovering, R. M. An in vivo rodent model of contraction-induced injury in the quadriceps muscle. Injury. 43 (6), 788-793 (2012).
  44. Shields, R. K. Precision rehabilitation: How lifelong healthy behaviors modulate biology, determine health, and affect populations. Physical Therapy. 102 (1), 248 (2022).
  45. . Medical Rehabilitation Research Resource Network (MR3N). Precision Rehabilitation – Inaugural Scientific Retreat Available from: https://ncmrr.org/education-training/archived-presentations/precision-rehab-archive (2021)
  46. Roche, J. A., et al. Minimally invasive muscle embedding generates donor-cell-derived muscle fibers that express desmin and dystrophin. Military Medicine. 185, 423-429 (2020).
  47. Roche, J. A., et al. Minimally invasive muscle embedding (MIME), facilitates the development of functional muscle fibers of human cadaveric origin, in host mice. The FASEB Journal. 33, 602 (2019).
check_url/fr/64000?article_type=t

Play Video

Citer Cet Article
Begam, M., Narayan, N., Mankowski, D., Camaj, R., Murphy, N., Roseni, K., Pepin, M. E., Blackmer, J. M., Jones, T. I., Roche, J. A. Dosage-Adjusted Resistance Training in Mice with a Reduced Risk of Muscle Damage. J. Vis. Exp. (186), e64000, doi:10.3791/64000 (2022).

View Video