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Article de méthode

Transplantation cardiaque cervicale hétérotopique de souris utilisant des brassards vasculaires

2.8K vues

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DOI :

10.3791/64089

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23 juin 2022

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Dans cet article

Résumé

Les modèles de transplantation cardiaque de souris représentent des outils de recherche précieux pour étudier l’immunologie de la transplantation. Le présent protocole détaille la transplantation cardiaque cervicale hétérotopique chez la souris qui implique la mise en place de brassards sur l’artère carotide commune du receveur et le tronc de l’artère pulmonaire du donneur pour permettre le flux sanguin laminaire.

Résumé

Les modèles murins de transplantation cardiaque sont fréquemment utilisés pour étudier les lésions d’ischémie-reperfusion, les réponses immunitaires innées et adaptatives après la transplantation, et l’impact des thérapies immunomodulatrices sur le rejet du greffon. La transplantation cardiaque cervicale hétérotopique chez la souris a été décrite pour la première fois en 1991 à l’aide d’anastomoses suturées, puis modifiée pour inclure des techniques de brassard. Cette modification a permis d’améliorer les taux de réussite et, depuis lors, de nombreux rapports ont proposé d’autres améliorations techniques. Cependant, la traduction en utilisation plus répandue reste limitée en raison de la difficulté technique associée aux anastomoses du greffon, qui nécessite une précision pour atteindre une longueur et un calibre adéquats des brassards afin d’éviter une torsion anastomotique vasculaire ou une tension excessive, ce qui peut endommager le greffon. Le présent protocole décrit une technique modifiée pour effectuer une transplantation cardiaque cervicale hétérotopique chez la souris qui implique la mise en place du brassard sur l’artère carotide commune du receveur et l’artère pulmonaire du donneur en alignement avec la direction du flux sanguin.

Introduction

Abbott et al. ont publié1 la première description de la transplantation cardiaque abdominale hétérotopique chez le rat en 1964. Ces techniques chirurgicales ont été affinées et simplifiées par Ono et al. en 19692. Corry et al. ont décrit pour la première fois une méthode de transplantation cardiaque abdominale hétérotopique chez la souris en 1973; Semblable aux modèles de rats précédemment rapportés, cela impliquait une greffe dans l’abdomen de l’hôte avec revascularisation par anastomoses de bout en bout de l’artère pulmonaire du donneur et de l’aorte ascendante à la veine cave inférieure et à l’aorte abdominale du rece....

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Protocole

Toutes les procédures de manipulation des animaux ont été menées conformément aux directives des NIH sur les soins et l’utilisation des animaux de laboratoire et approuvées par le Comité des études animales de la faculté de médecine de l’Université de Washington. Des cœurs de souris C57BL/6 (B6) et BALB/c (pesant 20 à 25 g) ont été transplantés chez des receveurs B6 appariés (âgés de 6 à 8 semaines). Les souris ont été obtenues de sources commerciales (voir le tableau des matériaux). Des greffes syngéniques ont été effectuées pour évaluer les réponses cellulaires liées aux lésions d’ischémie-reperfusion, et des greffes allogéniques ont été effectuées ....

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Résultats

Ce modèle de transplantation cardiaque hétérotopique cervicale de souris a été utilisé pour effectuer plus de 1 000 greffes dans notre laboratoire, avec un taux de survie d’environ 97%. Le taux de réussite est légèrement supérieur à celui des rapports précédents utilisant d’autres techniques de transplantation cardiaque hétérotopique cervicale chez la souris10,11,20. Cela pourrait être attribué au brassard plus grand de 20 G pla.......

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Discussion

En utilisant cette technique, la transplantation cardiaque cervicale hétérotopique de souris peut être réalisée en moins de 40 minutes par un microchirurgien expérimenté et en environ 60 minutes par un microchirurgien débutant. Alors que la transplantation cardiaque cervicale a été étudiée dans de nombreux modèles animaux, un modèle murin reste l’étalon-or en raison de multiples souches génétiques bien définies, des capacités d’altération génétique et de la disponibilité de nombreux réactifs, y compris des anticorps mono.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

DK est soutenu par les subventions 1P01AI116501, R01HL094601, R01HL151078 des National Institutes of Health, la subvention 1I01BX002730 de l’Administration des anciens combattants et la Fondation pour l’hôpital Barnes-Juif.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
6-0 cravates en soie tresséeHenry Schein Inc7718729
0,75 % Providone iosine gommagePriority Care IncNDC 57319-327-0
10-0 suture en nylonSurgical Specialties CorporationAK-0106
655-nm non ciblé Q-dotsInvitrogenQ21021MP
70 % EthanolPharmco Products Inc111000140
8-0 cravates en soie tresséeHenry Schein Inc1005597
Pince AdsonFine Science Tools Inc91127-12
BALB/c et C57BL/6 souris (6-8 semaines)Jackson Laboratories
Coagulateur bipolaireValleylab IncSurgII-20, E6008/E6008B
Carprofène (Rimadyl) injectionTranspharm35844
Carprofène (Rimadyl) comprimé oral à croquerTranspharm38995/37919
Microscope 2P sur mesure exécutant le logiciel d’acquisition ImageWarpA& B Software
Dumont no. 5 pincesFine Science Tools Inc11251-20
Ciseaux à ressort fins de style vannasFine Science Tools Inc15000-03
GraphPad Prism 5.0Sun Microsystems Inc.
Porte-aiguille HalseyFine Science Tools Inc91201-13
Halsted-Mosquito clamp pointe incurvéeFine Science Tools Inc91309-12
Harvard Apparatus ventilateur de souris modèle 687Harvard ApparatusMA1 55-0001
Solution d’héparine (100 U/mL)Abraxis Pharmaceutical Products504031
ImarisBitplane
Kétamine (50 mg/kg)Wyeth206205-01
Microscope&mdash ; Leica Wild M651 & fois ; 6&ndash ; Grossissement 40Leica Microsystems
Ciseaux à ressort extra fins MoriaFine Science Tools Inc15396-00
Vaporisateur isoflurane OhioParkland ScientificV3000i
QdotsThermoFisher1604036
S& Pince T SuperGrip pointe coudéeFine Science Tools Inc00649-11
S& Pince T SuperGrip à pointe droiteFine Science Tools Inc00632-11
Solution saline normale stérile (0,9 % (poids/vol) chlorure de sodiumHospira IncNDC 0409-4888-20
Embouts Q stériles (mini applicateurs coniques en coton de 3 pouces)Puritan Medical Company LLC823-WC
Surflow Angiocathéter en téflon de calibre 20 1/4 pouceTerumo Medical CorporationSR-OX2032CA
Angiocathéter en téflon de calibre 24 de 3/4 poTerumo Medical CorporationR-OX2419CA
Système de soins intensifs pour petits animaux (réglages de récupération 3 L/min, O2, 80 ° ; C, 40 % d’humidité)Thermocare Inc
VetBondSanta Cruz Biotechnology SC361931NC0846393
Xylazine (10 mg/kg)Lloyd Laboratories139-236

Références

  1. Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. A technique for heart transplantation in the rat. The Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).
  2. Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. The Journal of Thoracic and Card....

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Réimpressions et autorisations

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