Standardisert rotte koronar ring forberedelse og sanntids registrering av dynamisk spenning endres langs fartøyets diameter

Summary

Den nåværende protokollen beskriver wire myografteknikken for måling av vaskulær reaktivitet av rotte koronararterien.

Abstract

Som en viktig hendelse av kardiovaskulære systemsykdommer har koronararteriesykdom (CAD) blitt ansett som den viktigste skyldige av aterosklerose, hjerteinfarkt og angina pectoris, som alvorlig truer menneskers liv og helse over hele verden. Men hvordan du registrerer de dynamiske biomekaniske egenskapene til isolerte blodkar har lenge forvirret folk. I mellomtiden har presis posisjonering og isolering av koronararteriene for å måle dynamiske vaskulære spenningsendringer i in vitro blitt en trend i UTVIKLINGEN av CAD-legemidler. Den nåværende protokollen beskriver makroskopisk identifikasjon og mikroskopisk separasjon av rotte koronararteri. Sammentreknings- og dilatasjonsfunksjonen til koronararterieringen langs kardiameteren ble overvåket ved hjelp av det etablerte multi-myografisystemet. De standardiserte og programmerte protokollene for koronar ringspenningsmåling, fra prøvetaking til datainnsamling, forbedrer drastisk repeterbarheten av eksperimentelle data, noe som sikrer ektheten av vaskulære spenningsposter etter fysiologisk, patologisk og narkotikaintervensjon.

Introduction

Koronararteriesykdom (CAD) har blitt anerkjent og bekymret som en typisk og representativ kardiovaskulær sykdom, som er den ledende dødsårsaken i både utviklede og utviklingsland ^1,2. Som en blod- og oksygenforsyningsrute for normal hjertefysiologisk funksjon, kommer sirkulerende blod inn og nærer hjertet gjennom to hoved koronararterier og et blodvaskulært nettverk på overflaten av myokardiet ^3,4. Kolesterol og fettavsetninger i koronararteriene kuttet av hjertets blodtilførsel og den voldelige inflammatoriske responsen til det vaskulære systemet, forårsaker aterosklerose, stabil angina, ustabil angina, hjerteinfarkt eller plutselig hjertedød ^5,6. Som svar på patologisk stenose i koronararteriene tilfredsstiller kompenserende akselerert fysiologisk hjerterytme blodtilførselen av hjertet selv eller vitale organer i kroppen ved å øke utgangen av venstre ventrikel⁷. Hvis langvarig koronarstenose ikke lindres i tide, kan det utvikle seg omfattende nye blodkar i visse områder av hjertet⁸. For tiden vedtar den kliniske behandlingen av CAD ofte legemiddeltrombolyse eller kirurgisk mekanisk trombolyse og en eksogen bionisk vaskulær bypass med hyppig medisinering og stor kirurgisk funksjonshemming⁹. Derfor er den funksjonelle undersøkelsen av koronararteriefysiologisk aktivitet fortsatt et presserende gjennombrudd for kardiovaskulære sykdommer¹⁰.

Det finnes ingen tilgjengelige tekniske metoder for å oppdage koronarfysiologisk aktivitet, bortsett fra trådløse telemetrisystemer, som dynamisk kan registrere in vivo koronartrykk, vaskulær spenning, oksygenmetning i blodet og pH-verdier¹¹. Derfor, med tanke på koronararterienes tekstlige hemmelighold og kompleksitet, er nøyaktig identifisering og isolering av koronararteri utvilsomt de beste valgene for å utforske flere mekanismer for CAD in vitro⁴.

En serie multi myografi system, spesielt en wire mikrograf mikrograf mikrovaskulær spenningsdetektor (se Tabell over materialer), er en svært moden markedsførbar enhet for registrering av in vitro vev spenningsendringer av små vaskulære, lymfatiske og bronkial rør med egenskapene til høy presisjon og kontinuerlig dynamisk opptak¹². Nevnte system har blitt mye brukt til å registrere in vitro vev spenning egenskaper av hulrom strukturer med diametre på 60 μm til 10 mm. De kontinuerlige varmefunksjonene til plattformen til trådmikrografen oppveide i stor grad stimuleringen av det ugunstige ytre miljøet. I mellomtiden tillater de konstante inngangene til gassblandingen og pH-verdiene oss å oppnå mer nøyaktige vaskulære spenningsdata i en lignende fysiologisk tilstand¹³. Men med tanke på kompleksiteten i anatomisk lokalisering av rotte koronararteri (figur 1), har isolasjonen vært forvirrende og begrenser mekanismens utforskning av diversifisert kardiovaskulær sykdom og narkotikautvikling. Derfor introduserer den nåværende protokollen den anatomiske plasseringen og separasjonsprosessen til rotte koronararterien i detalj, etterfulgt av spenningsmåling på plattformen til wiremikrografen¹⁴.

Protocol

Dyreprotokollen ble gjennomgått og godkjent av styringskomiteen fra Chengdu University of Traditional Chinese Medicine (Record No. 2021-11). Mannlige Sprague Dawley (SD) rotter (260-300 g, 8-10 uker gamle) ble brukt til denne studien. Rottene ble holdt i et dyrekammer og var frie til å drikke og spise under eksperimentet. 1. Klargjøring av oppløsning Forbered fysiologisk saltoppløsning (PSS) ved å oppløse 118 mM NaCl, 4,7 mM K+, 2,5 mM CaCl2</s…

Representative Results

Anatomisk plassert, rotte koronar arterier distribuert og skjult dypt i myokardvev ble ikke lett gjenkjennelig. Ved å sammenligne koronararteriene til mennesker (figur 1A) og rotter (figur 1B) ble det utført rask og nøyaktig separasjon av rotte koronararteri i henhold til prøvetakingsprosessen i figur 2. Etter nøyaktig å ha funnet høyre auricle, lungearterie og apex fra forsiden under et optisk mikroskop, ble myokardiet disse…

Discussion

Forstyrrelsen av koronarmikrosirkulasjonen, som involverer et bredt spekter av pasienter med CAD, har gradvis blitt anerkjent og bekymret grunnlaget for tilstrekkelig myokardiperfusjon. Tatt i betraktning de alvorlige komplikasjonene ved plutselig koronar hjertesykdom og kardiovaskulær sykdom, er rettidig legemiddelforebygging og behandling ekstremt viktig for et klinisk individ med CAD¹⁷. Uunngåelig har hemmeligholdelsen av koronararterieanatomi og kompleksiteten i den fysiologiske strukturen s…

Materials

Apigenin	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	150731
CaCl2	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A501330
D-glucose	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A610219
HEPES	Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, China	S3872
KCl	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100395
KH2PO4	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100781
LabChart Professional version 8.3	ADInstruments, Australia	—
MgCl2·6H2O	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100288
Multi myograph system	Danish Myo Technology, Aarhus, Denmark	620M
NaCl	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100241
NaHCO3	Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China	A100865
Steel wires	Danish Myo Technology, Aarhus, Denmark	400447
U46619	Sigma, USA	D8174