Les méthodes immunohistochimiques sont utiles dans la recherche sur les abeilles mellifères pour détecter et évaluer le niveau d’apoptose et de nécrose dans l’intestin moyen et les glandes hypopharyngées des abeilles adultes.
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Article de méthode
Principes de base de l’histologie et détection de la mort cellulaire dans les tissus d’abeilles mellifères
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les abeilles mellifères (Apis mellifera L.) à l’intérieur de la ruche (ouvrières nourricières et autres abeilles de la ruche) et à l’extérieur de la ruche (butineuses) sont exposées aux changements climatiques et météorologiques, à divers pesticides, agents pathogènes et à la malnutrition, pénétrant principalement par la bouche et affectant principalement le tube digestif des abeilles adultes. Pour comprendre et prévenir les effets de ces facteurs de stress externes et internes sur les abeilles, une méthode de recherche utile est la méthode immunohistochimique. Un protocole de base est décrit pour préparer l’intestin moyen (ventriculus) et les glandes hypopharyngées (HPG) des abeilles adultes pour l’analyse histologique. Une méthodologie détaillée est décrite pour évaluer le niveau de dommages cellulaires et distinguer la nécrose de la mort cellulaire programmée (apoptose) en tant que processus naturel de régénération tissulaire. Les résultats du traitement des abeilles adultes avec de l’acide oxalique et des pesticides (insecticide et acaricide) et la détermination de la mort cellulaire dans le ventriculus et les HPG sont présentés. Les avantages et les inconvénients de la méthodologie sont également discutés.
Introduction
Les abeilles mellifères (Apis mellifera L.) sont, entre autres pollinisateurs sauvages, les pollinisateurs les plus importants des plantes agricoles. Pendant des milliers d’années, l’environnement changeant a incité les abeilles à adapter leur morphologie, leur physiologie, leur comportement et leur tolérance à plusieurs agents pathogènes et parasites. Par conséquent, les abeilles mellifères ont développé une gamme très diversifiée d’espèces et de sous-espèces dans le mondeentier 1. Ces résultats sont cohérents avec les résultats précédents, qu’il existe une variation génétique dans la structure du tube digestif de l’abeille, mais sugg....
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Protocole
1. Histologie de base pour la recherche sur les abeilles mellifères
- Dissection de tissus d’abeilles mellifères
REMARQUE : Pour la dissection des abeilles ouvrières, utilisez un microscope à dissection muni d’une source lumineuse DEL. Le grossissement le plus utile est ~20x.- Manipulation et dissection
- Prendre soigneusement une abeille ouvrière avec une pince et la mettre sur de la glace (ou au congélateur à -20 °C) pendant 2 min pour l’immobiliser22. Épinglez l’abeille sur la boîte de Petri en diagonale à travers la partie supérieure arrière du thorax deux fois, de gauche à droite et de droite à gauche....
- Manipulation et dissection
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Résultats
Détection de la mort cellulaire dans l’intestin moyen
Les abeilles ouvrières (Apis mellifera carnica) nouvellement issues du rucher expérimental de l’Institut agricole de Slovénie à Ljubljana ont été traitées individuellement avec de l’acide oxalique (OA) à 3 %23. L’arthrose est fréquemment utilisée en apiculture pour lutter contre Varroa destructor . Après le traitement, les abeilles ouvrières (trois de chaque groupe) ont été immobilisées sur de la glace. L’i.......
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Discussion
Dans les organismes vivants, la mort cellulaire est définie comme l’apoptose ou la nécrose25 et peut être accompagnée d’autophagie26. La différence entre les cellules apoptotiques et nécrotiques est que l’apoptose est une forme de mort cellulaire programmée et apparaît dans les cellules normales, alors que la nécrose se produit en raison de conditions mortelles (p. ex. accident, maladie)27,28. L’apoptose peut être d.......
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Déclarations de divulgation
L’auteur n’a pas de conflits d’intérêts.
Remerciements
Je remercie l’Agence slovène de recherche, subvention n° P4-133, pour son soutien.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 2-Propanol | |||
| ApopTag Peroxydase kit (ApopTag Peroxidase In Situ Apoptosis Detection) | Sigma-Aldrich | S7100 | Assay B, https://www.sigmaaldrich.com/SI/en/product/mm/s7100?gclid=CjwKCA jw7vuUBhBUEiwAEdu2pPanI9SE j81ZTl-nLHEoxXAv7ViKwPA_QRx H7fciMRNcYwR7lbPQbhoCqcQQA vD_BwE ; Contrôles positifs inclus dans le S7101 |
| Couvre | |||
| l’impasse Système colorimétrique TUNEL | Promega | G7360 | Assay A, https://worldwide.promega.com/products/cell-health-assays/apoptosis-assays/deadend-colorimetric-tunel-system/?catNum=G7360 |
| Microscope de dissection. (pour la dissection des abeilles) | Zeiss | ||
| Eau distillée | |||
| EnVision System Kit phosphatase alcaline | Dako | ||
| Eosin Y Solution | Sigma-Aldrich | ||
| alcoolique Éthanol | 95 % (ou moins pur), 90 %, 80 % | ||
| Dako | support de montage | ||
| Table d’aplatissement | Leica | HI1220 | |
| Forceps ; (pour la dissection des abeilles) | Outils scientifiques fins | 11294-00 | Standard #4 |
| Formol 10 % | Formaldéhyde | ||
| Hématoxyline | Sigma-Aldrich | ||
| HistoChoice Agent nettoyant | Sigma-Aldrich Agent nettoyant Sigma-Aldrich | ||
| Hydrogène peroxydase 3 % | |||
| Incubateur | BioRad | ||
| Épingles à insectes (pour la dissection des abeilles) | Entosphinx | 44594 | Épingles à insectes acier inoxydable &ndash ; blanc, taille 2 |
| ISCDDK, AP (In Situ Cell Death Detecteion Kit, Alkaline Phosphatase) | Roche | 11684809910 | Assay C, https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/362/737/11684809910b ul.pdf |
| KH2PO4 | |||
| Lab horloge | |||
| Microscope optique | Leica | ||
| Microscope Lames La | boîte contenant les lames doit être conservée dans un emballage plastique pour éviter la poussière | ||
| Microtome | Leica | ||
| Station modulaire d’enrobage de tissus | Leica | ||
| Na2HPO4 | |||
| NaCl | |||
| Paraformaldéhyde 4 % | |||
| Paraplast | Pipettes | ||
| Pasteur | 1,5 mL ; 3 mL | ||
| (pour la dissection des abeilles) | Rempli de silicium à condensation ; (Xantoprène L bleu et activateur universel liquide plus) | ||
| Protéinase K | Merck | 21627 | |
| Solution de Ringers ; (pour la dissection des abeilles) | 7,5 g de NaCL, 2,38 g de Na2HPO4, 2,72 g de KH2PO4, 1 L d’eau | ||
| distilléeCiseaux ; (pour la dissection des abeilles) | Outils scientifiques fins | 1406-09, 14061-09 | Droit et courbé, 9 cm |
| Liquide universel plus activateur ; (pour la dissection des abeilles) | Kulzer | ||
| Horloger' s pince (pour la dissection des abeilles) | Outils de science fine | 91100-12 | |
| Bain d’eau | Leica | ||
| Pinceau | 2x | ||
| Xantoprène L bleu ; (pour la dissection des abeilles) | Kulzer |
Références
- Ruttner, F. Naturgeschichte der Honigbienen. , Ehrenwirth. München. (1992).
- Jordan, R. Kleine Bienenkunde. Österreichischer Agrarverlag Wien München. , 41-45 (1964).
- Snodgrass, R. E. The Anatomy of the Honey Bee.
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Réimpressions et autorisations
