Le présent protocole a développé une méthode pour estimer le rendement des composés sur la plaque TLC en utilisant la technique d’éclairage bleu-LED. Les avantages de cette approche sont qu’elle est sûre, efficace, peu coûteuse et permet au chercheur de mesurer plusieurs échantillons simultanément.
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Article de méthode
Estimation du rendement des composés sur la plaque TLC via la technique d’éclairage Blue-LED
Dans cet article
Résumé
Résumé
La chromatographie sur couche mince (CCM) est une technique analytique accessible qui a été largement utilisée dans la recherche en chimie organique pour quantifier le rendement d’échantillons inconnus. La présente étude a mis au point une méthode efficace, peu coûteuse et sûre pour estimer le rendement des échantillons sur une plaque TLC à l’aide de l’illuminateur bleu-LED. La lovastatine extraite d’Aspergillus terreus était l’exemple de composé utilisé dans la présente étude. Des modèles de régression basés sur la norme de lovastatine ont été utilisés pour évaluer le rendement de la lovastatine. Trois méthodes ont été comparées : le bioessai, la détection UV et l’éclairage LED bleu. Le résultat a montré que la méthode d’éclairage à LED bleue est nettement plus efficace que les méthodes de détection UV et d’essais biologiques. De plus, l’éclairage à DEL bleue était une option relativement sûre en raison des risques biologiques liés à la méthode d’essai biologique (p. ex. infection microbienne) et de l’exposition aux ultraviolets dans la méthode de détection UV. Par rapport aux méthodes coûteuses nécessitant des instruments spécialisés et une formation à long terme avant de travailler de manière indépendante, telles que GC, HPLC et HPTLC, l’utilisation de l’illuminateur bleu-LED était une option économique pour estimer le rendement des échantillons d’une plaque TLC.
Introduction
La chromatographie sur couche mince (CCM) est largement utilisée comme technique qualitative et quantitative dans le domaine de la chimie organique 1,2,3. Les principaux avantages de TLC sont qu’il fournit une détection rapide, des exigences d’échantillonnage flexibles et ne nécessite pas d’équipement spécialisé4. À ce jour, même si de nombreuses approches avancées ont été établies, la CCM reste la principale méthode d’identification des échantillons inconnus dans un mélange. Cependant, le défi de cette approche est le manque d’équipement sûr et peu co....
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Protocole
Le présent protocole est décrit en utilisant la lovastatine comme exemple. La lovastatine a été extraite d’Aspergillus terreus âgé d’une semaine.
1. Extraction de composés
REMARQUE : Pour plus de détails sur l’extraction des composés, veuillez consulter la figure 1.
- Culture d’Aspergillus terreus sur gélose au dextrose de pomme de terre (PDA, voir tableau des matières) milieu à 30 °C.
- Sécher la culture à 40 °C pendant 24 h. Transférer la culture séchée dans un tube de 50 mL à l’aide d’une pince à épiler stérilisée....
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Résultats
Cette étude a présenté la méthode d’éclairage à LED bleues pour estimer le rendement des composés, et cette méthode a été validée et comparée aux méthodes d’essai biologique et de détection UV (tableau 1). Les modèles de régression ont été élaborés en fonction des dimensions des bandes et de la concentration des étalons pour trois méthodes, respectivement, afin de prédire le rendement des échantillons. Premièrement, dans les résultats de la méthode des essais biologiques, le R-carré entre les dimensions .......
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Discussion
La présente étude décrivait une nouvelle approche, l’illuminateur à LED bleues, pour quantifier les composés sans utiliser d’équipement coûteux et spécialisé, tel que la méthode HPTLC, HPLC et GC, et la méthode a été comparée aux méthodes d’essai biologique et de détection UV pour évaluer la performance de quantification. En conséquence, il a été conclu que la méthode d’éclairage à LED bleues est un protocole relativement sûr et efficace utilisé pour quantifier le rendement des composés ciblés sur la plaque TLC.
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Déclarations de divulgation
Tous les auteurs déclarent n’avoir aucun conflit d’intérêts.
Remerciements
Cette étude a été financée par le ministère de la Science et de la Technologie de Taïwan (MOST 108-2320-B-110-007-MY3).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Gélose bactériologique américaine Agar | Condalab | 1802.00 | |
| Aspergillus terreus ; | ATCC 20542 | ||
| Illuminateur LED bleu | MICROTEK | Bio-1000F | |
| Centrifugeuse | Thermo Scientific ; | HERAEUS Megafuge 8 | |
| Lampe UV compacte | UVP | UVGL-25 | |
| Acétate d’éthyle | MACRON | MA-H078-10 | |
| Papier filtre 125mm | ADVANTEC | 60311102 | |
| ImageJ | NIH | Freeware | https://imagej.nih.gov/ij/download.html |
| Lovastatine standard | ACROS | A0404262 | |
| MiBio Fluo ; | MICROTEK | V1.04 | |
| n-Hexane | C-ECHO | HH3102-000000-72EC | |
| OriginPro | OriginLab | 9.1 | https://www.originlab.com/origin |
| Bouillon de dextrose de pomme de terre H | STBIO MEDIA | ||
| Évaporateur rotatif | EYELA | SB-1000 | |
| Acide sulfurique | Fluka | 30743-2.5L-GL | |
| TLC gel de silice 60 F254 | MERCK | 1.05554.0001 | |
| Acide trifluoroacétique | Alfa Aesar | 10229873 | |
| Vibration à ultrasons | DELTA | DC600 |
Références
- Pyka, A. Detection progress of selected drugs in TLC. BioMed Research International. 2014, 732078(2014).
- Hess, A. V. I. Digitally enhanced thin-layer chromatography: An inexpensive, new technique for qualitative and qua....
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Réimpressions et autorisations
