Het huidige protocol beschrijft een gedetailleerd chirurgisch protocol voor het isoleren van stromende darmlymfe als reactie op intraduodenale voedingsinfusies bij muizen. Dit maakt de fysiologische bepaling van de totale intestinale lipideabsorptie en chylomicronsynthese en -secretie mogelijk als reactie op verschillende experimentele voedingsstoffen.
Intestinale lipoproteïnen, vooral triglyceride-rijke chylomicronen, zijn een belangrijke aanjager van metabolisme, ontsteking en hart- en vaatziekten. Het isoleren van intestinale lipoproteïnen is echter erg moeilijk in vivo omdat ze eerst vanuit de dunne darm worden uitgescheiden in de mesenteriale lymfevaten. Chylomicron-bevattende lymfe leegt vervolgens in de subclavia-ader van het thoracale kanaal om componenten van de maaltijd af te leveren aan het hart, de longen en uiteindelijk de bloedsomloop van het hele lichaam. Het isoleren van naïeve chylomicronen is onmogelijk uit het bloed, omdat chylomicron triglyceride onmiddellijk hydrolyse ondergaat na interactie met lipoproteïnelipase en andere lipoproteïnereceptoren in omloop. Daarom is de oorspronkelijke 2-daagse lymfefistelprocedure, beschreven door Bollman et al. bij ratten, historisch gebruikt om verse mesenteriale lymfe te isoleren voordat deze in de thoracale ader terechtkomt. Dat protocol is de afgelopen 45 jaar verbeterd en geprofessionaliseerd door het laboratorium van Patrick Tso, waardoor de analyse van deze kritische lipoproteïnen en afscheidingen uit de darm mogelijk is. De Tso lymfe fistel procedure is nu bijgewerkt en wordt hier voor het eerst visueel gepresenteerd. Deze herziene procedure is een eendaagse chirurgische techniek voor het installeren van een voedingssonde voor de twaalfvingerige darm, het cannuleren van het mesenteriale lymfekanaal en het verzamelen van lymfe na een maaltijd bij bewuste muizen. De belangrijkste voordelen van deze nieuwe technieken zijn het vermogen om reproduceerbaar lymfe van muizen te verzamelen (wat gebruik maakt van de kracht van genetische muismodellen); de verminderde anesthesietijd voor muizen tijdens de implantatie van de darminfuusbuis en de lymfecanule; het vermogen om continu lymfe te bemonsteren gedurende de voedings- en postprandiale periode; het vermogen om hormonen en cytokines kwantitatief te meten vóór hun verdunning en enzymatische hydrolyse in het bloed; en het vermogen om grote hoeveelheden lymfe te verzamelen voor het isoleren van intestinale lipoproteïnen. Deze techniek is een krachtig hulpmiddel voor het direct en kwantitatief meten van de opname van voedingsstoffen in de voeding, intestinale lipoproteïnesynthese en chylomicronsecretie.
Het fysiologische belang van het mesenteriale lymfestelsel
De mesenteriale lymfevaten zijn in een of andere vorm beschreven sinds ~ 300 voor Christus toen Herophilos het hepatische poortsysteem en alle “absorberende aderen in de darmen” beschreef1,2,3,4,5. Gedurende meer dan 1.700 jaar na deze eerste beschrijving was een bepalend kenmerk van darmlymfevaten de aanwezigheid van melkachtig vocht in de mesenteriale lymfe kort na een maaltijd3. Het is nu bekend dat melkachtige, chylomicron-bevattende lymfe (“chylous” lymfe) niet in de poortader en lever terechtkomt, maar in plaats daarvan door de cisterna chyli naar de thoracale ductus reist en uiteindelijk het bloed bij de linker subclaviaader6 verbindt. Door deze anatomische opstelling reist chylous lymfe eerst door het hart en de longen voordat het door de rest van het lichaam circuleert. Dit betekent dat het hart en de longen een “first-pass” krijgen bij de afscheidingen in de mesenteriale lymfe7.
Een belangrijke rol van mesenteriale lymfevaten is hun transport van voedingslipiden uit de dunne darm 8,9,10. Anatomisch, chylomicronen, intestinale immuuncellen 11,12,13,14, darmhormonen 15,16,17,18, antigenen 19,20,21, niet-chylomicron lipofiele verbindingen22,23 , en overtollig vocht komt de lactealen binnen die ten grondslag liggen aan het enterocytenkeldermembraan en worden vervolgens geconcentreerd door de lymfecapillairen naar de mesenteriale lymfeklieren. Er zijn waarschijnlijk veel onbekende mesenteriale lymfatische componenten, waaronder metabolieten, antigenen, milieuverontreinigende stoffen, voedingsstoffen en signaalmoleculen.
De componenten van mesenteriale lymfe zijn niet systematisch geïdentificeerd, grotendeels vanwege de moeilijkheid om mesenteriale lymfe te isoleren. Toegang tot de mesenteriale lymfe is altijd een serieuze uitdaging geweest omdat lymfekanalen kleurloos zijn, en behalve na een vette maaltijd wanneer ze chylous en melkachtig worden, bevatten de mesenteriale lymfevaten kleurloze lymfevocht 6,8,9,10.
Huidige en gebruikelijke methoden voor het isoleren van darmlymfe
Mesenteriale lymfe is niet toegankelijk bij mensen (behalve in zeldzame en extreme omstandigheden waarin ernstig GI-trauma is opgetreden)24. In vivo lymfeverzameling is chirurgisch complex en veeleisend. De oorspronkelijke 2-daagse lymfefistelprocedure werd beschreven door Bollman et al.25 en is de afgelopen 45 jaar verbeterd en geprofessionaliseerd door het laboratorium van Patrick Tso26,27. De lymfefistelprocedure stelt onderzoekers in staat om vloeiende lymfe van bewuste dieren te verzamelen tijdens een 6 uur durende duodenale lipide-infusieperiode.
Het lymfefistelmodel is voornamelijk gebruikt bij ratten om de lymfestroomsnelheid, de output van triglyceriden en cholesterol (of andere duodenale geïnfundeerde verbindingen), chylomicronsamenstelling en intestinale hormoonconcentraties te meten. In mindere mate kan deze techniek ook bij muizen worden gebruikt, hoewel de chirurgische overleving en het lymfevolume eronder lijden. Vanwege de moeilijkheden bij het zien van mesenteriale lymfekanalen, hebben historische methoden het cannuleren van mesenteriale lymfe bij grotere dieren zoals minivarkens28, schapen29, varkens30, honden31 en ratten17 opgenomen. Het werken met deze grotere modellen is arbeidsintensief en laat geen studies in knock-in of knock-out modellen toe.
Er zijn ook alternatieve benaderingen gebruikt. Chylomicronen kunnen worden geïsoleerd uit bloed in de postprandiale toestand (hoewel deze gedeeltelijk worden gehydrolyseerd door plasmalipoproteïnelipase)32,33,34,35. De thoracale ductus kan ook worden gecannuleerd, hoewel de daar verzamelde lymfe een mengsel van mesenteriale lymfe en extra-intestinale lymfedrainage26,36 bevat. In vitro scheiden Caco-2-cellen een chylomicronachtig deeltje af als reactie op vetzuurbehandeling, en deze cellen kunnen samen worden gekweekt met relevante lymfatische endotheel- of vasculaire cellen37,38. Van intestinale organoïde culturen van mens en muis is aangetoond dat ze apicale lipiden verwerken en chylomicronen afscheiden 39,40,41,42. Deze modellen zijn zeer voordelig en maken mechanistische inzichten in de dunne darmfysiologie mogelijk, maar ze kunnen de complexiteit, fysisch-chemische gradiënten of dynamische lymfestroom van in situ mesenteriale lymfevaten niet repliceren.
Voordelen van het 1 dag muis lymfe fistel model hier gepresenteerd
Met betrekking tot deze andere methoden voor het isoleren van intestinale lipoproteïnen, wordt de Tso Lab-lymfefisteltechniek traditioneel beschouwd als de gouden standaardtechniek voor het meten van de absorptie van voedingsnutriënten in mesenteriale lymfe. Deze in vivo techniek heeft het voordeel dat het de belangrijkste fysiologische aspecten van lipideabsorptie in de voeding vastlegt – het dynamische uiterlijk van verbindingen gedurende de absorptieperiode, waarvoor de herhaalde bemonstering van stromende mesenteriale lymfe in levende dieren met duodenale voedingsstoffen vereist is. Deze chirurgische techniek meet ook darmhormonen en cytokines direct in hun fysiologische compartiment in plaats van in het bloed, waar ze worden verdund en enzymatisch worden afgebroken 17,43.
Als de experimentele vraag een goed begrip vereist van lipidesecretiedynamiek of de dynamische absorptie en het metabolisme van een hydrofobe GI-verbinding of medicijn, dan is deze techniek niet alleen geschikt, maar is het ook de enige benadering die de beweging van luminale inhoud van de proximale naar de distale darm (maag naar colon) en van de apicale naar het basolaterale oppervlak interpoleert (luminale inhoud via enterocyt naar lactealen en portale circulatie). Omdat deze techniek gebruik maakt van de luminale afgifte van voedingsstoffen via de intraduodenale katheter, en omdat de stromende mesenteriale lymfe wordt omgeleid en verzameld, staat het hele absorptieapparaat onder experimentele controle en kan het worden gebruikt om de absorptieprofielen van de dunne darm kwalitatief te beoordelen.
Hier wordt voor het eerst visueel een belangrijke update van het Tso Lab-lymfefistelmodel gepresenteerd, die (1) de experimentele tijd reduceert tot een chirurgische implantatie- en experimentele verzamelperiode van 1 dag; (2) de overleving van muizen en overwegingen inzake dierenwelzijn verbetert; en (3) verhoogt de reproduceerbaarheid van de aanpak bij muizen om de kracht van genetische muismodellen te benutten. Deze techniek moet worden beschouwd als een gouden standaard voor alle experimentele vragen over intestinale secreties, lipoproteïnen of lipideabsorptie in de voeding en is de beste techniek voor de high-fidelity bepaling van lipideabsorptiekinetiek en chylomicronen.
De oorspronkelijke 2-daagse lymfefistelprocedure werd beschreven door Bollman et al.25 en de laatste 45 jaar beoefend door het laboratorium van Patrick Tso26,27. Het hier gepresenteerde protocol is een krachtige aanvulling op deze klassieke, gouden standaardmethode voor het identificeren, kwantificeren en begrijpen van de unieke chylous secreties van de dunne darm, evenals de in vivo dynamiek van de opname en het metabolisme van voedingsstoffen in de voeding, darmhormonen en darmimmuniteit.
De voordelen van dit model omvatten (1) het vermogen om continu mesenteriale lymfe te bemonsteren gedurende de voedings- en postprandiale periode in plaats van statische bemonstering op één tijdstip tijdens absorptie, spijsvertering of secretie; (2) de meting van darmhormonen en cytokines rechtstreeks in hun fysiologische compartiment in plaats van in het bloed, waar zij worden verdund en enzymatisch worden afgebroken 17,44; (3) het vermogen om de lipoproteïnen die door de dunne darm worden uitgescheiden na inname van een lipidemeel en de afwezigheid van endotheellipasen in de mesenteriale lymfe te isoleren, te kwantificeren en te karakteriseren, waardoor chylomicrontriglyceridenconcentraties en de inheemse chylomicronstructuur behouden46,47; (4) het vermogen om de lymfestroomsnelheid, de output van triglyceriden en cholesterol (of andere duodenale geïnfundeerde verbindingen), chylomicronsamenstelling en darmhormoonconcentraties direct te meten. Ten slotte maakt dit protocol het mogelijk om relatief grote hoeveelheden >50 μL lymfe per uur te verzamelen gedurende een periode van 6 uur. Naarmate de vloeistof wordt aangevuld met intra-duodenale zoutoplossing en glucose-infusie, is het lymfefistelmodel aanzienlijk verbeterd ten opzichte van andere lymfebemonsteringstechnieken en resulteert dit in stromende in plaats van statische pools van mesenteriale lymfe. Aangezien volume een belangrijke hindernis is voor lipidomische, proteomische en metabolomische benaderingen, is dit een belangrijke kracht.
Het hier beschreven 1-daagse lymfefistelprotocol van de muis heeft verschillende voordelen ten opzichte van het oorspronkelijke lymfefistelprotocol, waaronder een vermindering van het totale aantal proefdieren van eerder beschreven 2-daagse lymfefistelprotocollen26,27 vanwege een hogere overlevingskans na de operatie; een verkorting van de totale experimentele tijd van 2 dagen tot één dag; en, ten slotte, een vermindering van de herstelperiode voor muizen van ‘s nachts (>18 uur), waar doorbraakpijn of slechte postoperatieve resultaten kunnen optreden, tot een meer beheersbare ~ 6 uur na de operatie.
Een kenmerk van dit 1-daagse protocol is de focus op humane overwegingen en eindpunten. Deze moeten de hoogste prioriteit hebben: (1) dieren moeten intraduodenale of IV-vervangingsvloeistoffen krijgen; (2) ze moeten warm en zo pijnvrij mogelijk worden gehouden (met postoperatieve Buprenex en/of carprofen, afhankelijk van de experimentele opzet en de noodzaak om ontstekingsremmende effecten te vermijden); (3) Bloeden, trillen, diarree of tekenen van nood zijn allemaal dwingende redenen voor een humaan eindpunt. Volgens strikte IACUC-richtlijnen is isofluraan gevolgd door cervicale dislocatie een goed eindpunt. Chirurgische overlevingspercentages zijn ~ 70% voor een enkele dag (vergeleken met ~ 40% voor de oorspronkelijke 2-daagse operatie), maar onderzoekers moeten niet aarzelen om het experiment te beëindigen bij een teken van nood. Hiermee moet rekening worden gehouden bij het plannen van het aantal dieren.
In termen van het oplossen van deze techniek is een succesvolle plaatsing van de lymfecanule het belangrijkste knelpunt in deze chirurgische procedure. Tijdens het oefenen van de operatie helpt het om de muis ongeveer 2 uur voorafgaand aan de operatie te voorzien van 0,3 ml olijfolie. Dit zal de afscheiding van chylomicronen in het mesenteriale lymfekanaal veroorzaken, waardoor het “melkachtig” en zichtbaarder lijkt. Methyleenblauw kan ook worden gebruikt, maar is vaak minder duidelijk dan het melkachtige lymfekanaal. Als na de plaatsing van de lymfecanule en de plaatsing ervan met lijm de mesenteriale lymfe met succes door de canule in een verzamelvat stroomt, kan men doorgaan met de plaatsing van een darminfuusbuis. Af en toe kan de lymfe niet continu stromen, maar kan het weer gaan stromen wanneer het dier op de draaitafel wordt geplaatst. Let kritisch op stolsels in de lymfebuis. Deze moeten uit de buizen worden gemasseerd om tegenstroomdruk op het lymfekanaal te voorkomen.
Naast triglyceridensecretie en lymfestroomsnelheid kan deze techniek worden gebruikt om de volgende lipideabsorptiekinetiek en chylomicronkenmerken te bepalen:
Chylomicron secretie45,48,49
Onmiddellijk na een maaltijd die vet bevat, is er een voorbijgaande stijging van circulerend plasmatriglyceride. Omdat triglyceriden inherent hydrofoob zijn, moeten ze eerst worden geëmulgeerd om oplosbaar te zijn in bloed50. Dunne darm enterocyten voeren deze rol uit en verpakken triglyceriden in de voeding in chylomicron-emulsiedeeltjes51. Chylomicronen bevatten cholesterol en triglyceriden in hun kern, omgeven door fosfolipiden en apolipoproteïnen, waaronder apoB-48, apoA-I, apoA-IV en apoC-III52,53,54,55. ApoB-48 is het essentiële structurele eiwit en de andere apolipoproteïnen hebben verschillende functies die nodig zijn voor chylomicronmetabolisme en klaring uit het bloed. Om de belangrijkste kenmerken van chylomicronen te bepalen, inclusief hun triglyceriden- en apolipoproteïnegehalte, moet de hier getoonde 1-daagse lymfefisteltechniek worden gebruikt. De chylomicronsecretiesnelheid is het percentage geïnfundeerd 3H-triglyceride dat wordt uitgescheiden in de lymfe en gemeten door scintillatie door het tellen van lymfemonsters per uur. Dit kan worden gecombineerd met gedetailleerde chylomicronkarakterisering 48,49,56,57,58. Uurlijkse lymfemonsters kunnen worden gecombineerd of afzonderlijk worden bewaard. Lymfe wordt overgebracht naar ultracentrifugebuizen, gemengd met 0,9% NaCl en vervolgens zorgvuldig bedekt met 300-500 μL van 0,87% NaCl. De monsters worden vervolgens ultracentrifugeren bij 110.000 x g bij 4 °C gedurende 16 uur. De bovenste fracties die geïsoleerde chylomicronen bevatten, worden verzameld en getest op triglycerideconcentraties met behulp van de triglyceridentestkit. In het kort wordt 2 μL van het chylomicron (1:10 verdunning) geïncubeerd met 200 μL enzymreagens bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten in een plaat met 96 putten. De plaat wordt gelezen door een plaatlezer bij 500 nm en de normen en spaties worden gebruikt voor de berekening van triglycerideconcentraties. De grootte van chylomicron kan vervolgens worden bepaald door negatieve kleuring en transmissie-elektronenmicroscopie (TEM)14,29. Triglyceriden en cholesterol kunnen worden gekwantificeerd door chemische assay en apolipoproteïnegehalte (apoB-48, A-I, C-II, C-III) door ELISA-kits of Western blot.
Bepaling van de primaire plaats van lipideabsorptie 48,59
Door de luminale en epitheelcelcompartimenten van de twaalfvingerige darm, jejunum en ileum te isoleren 6 h na de infusie van 3 H-triglyceride of een radioactief gelabelde gemengde maaltijd, wordt de inhoud folch geëxtraheerd om te bepalen hoeveel van de 3H-triglyceride wordt geabsorbeerd over het epitheelcelmembraan (normaal) of wordt vastgehouden in het lumen (abnormaal) langs de lengte van de dunne darm48 . Deze studies hebben vooral impact als er potentiële verschillen zijn in GI-motiliteit 60,61,62, als er een hypothese is met betrekking tot galzuren (zeer actief gedurende lipideabsorptie en zelf opnieuw geabsorbeerd in het ileum)63,64,65,66, of als er een bezorgdheid is dat voedingsstoffen worden geabsorbeerd op de verkeerde anatomische locatie (ileum of zelfs dikke darm)67 ,68,69,70.
Identificatie van mechanismen van 3H-triglyceriden die in absorberende epitheelcellen terechtkomen48
Dit wordt uitgevoerd door het percentage 3 H-triglyceriden te berekenen dat is gehydrolyseerd tot 3 H-vrij vetzuur in het darmlumen, geabsorbeerd in het slijmvlies en opnieuw veresterd tot intracellulair 3H-triglyceride voorafgaand aan secretie als chylomicronen. Dit is een krachtige marker van absorptie- / secretiedefecten, omdat het kan worden getraceerd om de beweging van triglyceriden in de voedingstriglyceriden in zijn afbraakproducten en daaropvolgende verpakking in chylomicronen te laten zien. mRNA-expressie van de vetzuurabsorptiemachinerie (CD36, FABPs, ACSLs), re-esterificatieroute (MGAT, DGAT, MTTP, apoB) en apolipoproteïnen (apoC-III, B-48, C-II, A-I, A-IV) kunnen verder worden gekwantificeerd door RT-PCR.
Toekomstige toepassingen van deze techniek worden alleen beperkt door interesse in darm-orgaanoverspraak, metabolisme, immuniteit, opname van voedingsstoffen, milieuverontreinigingen in de voeding of een andere ziekte met een rol in het GI-systeem. Het is waarschijnlijk dat veel overtuigende experimenten en hypothesen zijn vastgelopen vanwege de moeilijkheid om toegang te krijgen tot het kritieke mesenteriale lymfesysteem, en het doel van dit gevisualiseerde protocol is om deze techniek gemakkelijker beschikbaar te maken. Het isoleren van chylomicronen en de mesenteriale lymfe waarin ze zich aanvankelijk bevinden, is een cruciaal onderdeel van het begrijpen van het metabolisme van het hele lichaam; Het 1 Day Mouse Lymph Fistula Model is een krachtig fysiologisch model voor het bestuderen van deze gebeurtenissen.
The authors have nothing to disclose.
We zijn de Cystic Fibrosis Foundation (Pilot and Feasibility Award 1810, aan ABK), de Rainin Foundation (Synergy Award, aan PI GJ Randolph en Co-I ABK) en de National Institutes of Health (R01DK118239, R03DK116011 aan ABK) zeer dankbaar voor hun steun aan deze studies.
0.9% Sodium Chloride Injection, USP sterile | Hospira, Lake Forest, IL, US | NDC 0409-4888-06 | |
1.7 mL Eppendorf tubes | Fisher Scientific, Waltham, MA, US | 7200184 | |
14C-cholesterol: Cholesterol-[4-14C] (0.1mCi/ mL) | American Radiolabeled Chemicals Inc., St. Louis, MO, US | ARC 0857 | |
18 G needle | Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, US | 305199 | |
2 Dumont micro-dissecting forceps | Fine Science Tools, Foster City, CA, US | 11251-35 | |
2 Forceps | ROBOZ Surgical Instrument Co., Gaithersburg, MD, US | RS-5130 | |
3H-TAG: Triolein [9,10-3H(N)] (3H-TG) (1mCi/ mL) | American Radiolabeled Chemicals Inc., St. Louis, MO, US | ART0199 | |
3H-TG Triolein [9,10-3H(N)] (3H-TG) | American Radiolabeled Chemicals, INC. St. Louis | MO 63146 | |
50% Dextrode Injection, USP 25grams/50 mL sterile | Hospira, Lake Forest, IL, US | NDC-0409-6648-16 | |
Analtech TLC Uniplates: silica gel matrix Z265500-1PAK | Fisher Scientific, Waltham, MA, US | 11-101-0007 | |
BD CareFusion ChloraPrep Swabstick | Fisher Scientific, Waltham, MA, US | 14-910-501 | |
Betadine surgical scrub | Dynarex Corp., Orangeburg, NY, US | 1201 | |
Bevel-cut cannula | Braintree Scientific., Braintree , MA, US | MRE025 | |
Buprenorphine HCl Injection Carpuject PFS 0.3mg/mL 10/Bx (Buprenex) | HenrySchein, Warrendale, PA, US | 1278184 | |
C57BL6/J male mice | Jackson Laboratory, Bar Harbor, Maine | ||
ChloraPrep | Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, US | 260100 | |
Cholesterol Assay Kit | FujiFilm Healthcare, Lexington, MA, US | 99902601 | |
Cholesterol-[4-14C] | American Radiolabeled Chemicals, INC. St. Louis | MO 63146 | |
Clear plexiglass box L43cm X W26 X H 21 with temperature-controlled heating pad and humidification | our own design and modifications | ||
commercially available amphibian/reptile heating pad | ShenZhen XingHongChang Electric CO., LTD. ShenZhen, China | XHC-F035D | |
Cotton tip applicators | Fisher Scientific, Waltham, MA, US | 22363156 | |
Duodenal infusion tube – canuala | Braintree Scientific, Braintree , MA, US | MRE037 | |
Ensure | Abbott Nutrition, Columbus, OH | ||
Heating pad surgical platform with circulating warm water pump combination | Patterson Scientific, Waukesha, WI, US | Gaymar T/Pump Classic | |
Hetarin Sodium Injection, USP 1,000 units/mL sterile | Mylan, Morgantown, WV, US | NDC-67457-384-31 | |
Image J Software | National Institute of Health, Bethesda, Maryland, | ||
Iris scissors | ROBOZ Surgical Instrument Co., Gaithersburg, MD, US | RS-5602 | |
Isoflurane | Piramal Pharma Solutions, Riverview, MI, US | NDC 66794-017-25 | |
Isoflurane induction apparatus and Anesthesia Apparatus | Patterson Scientific, Waukesha, WI, US | mouse induction chamber | |
Krazy glue | Elmer's products Inc., Columbus, OH, US | KG484 | |
Liposyn III 20% lipid injectable | Hospira Inc. Lake Forest, Illinois, USA | ||
LS 6500 Multi-Purpose Scintillation Counter | Beckman Coulter, Brea, CA | ||
Micro-dissecting Spring Scissors | ROBOZ Surgical Instrument Co., Gaithersburg, MD, US | RS-5602 | |
Mouse apoB ELISA Kit | ABCAM Inc., Waltham, MA, US | ab230932-1 | |
Needle Holder | Fine Science Tools, Foster City, CA, US | 12002-12 | |
Retractors | Kent Scientific Co., Torrington, CT, US | SURGI-5001 | |
Rimadyl (Carprofen) | Zoetis Inc., Kalamazoo MI, US | 4019449 | |
Rotating table Barnstead Thermolyne | Labquake, Zürich, Switzerland | Barnstead Thermolyne | |
SMOFlipid 20% lipid injectable emulsion, USP | Fresenius Kabi, Warrendale, PA, US | NDC-63323-820-01 | |
Snuggle | Lomir Biomedical Inc., Notre-Dame-de-l'Île-Perrot, QC J7V 7M4, Canada | MS 02.5PM | |
Surgical Scissors | ROBOZ Surgical Instrument Co., Gaithersburg, MD, US | RS-5912SC | |
Suture (5-0 silk with needle) | DemeTECH, Miami Lakes, FL, US | DT-719 | |
Transmission Electron Microscope (JEOL 1400-FLASH 120KV ) | JEOL, Peabody, MA | ||
Triglyceride Assay Kit | Randox Laboratories, Crumlin, United Kingdom | TR210 | |
ULTIMA GOLD XR Scintillation Fluid | Perkin Elmer, Hebron, KY, US | 6013119 | |
Ultracentrifuge, rotor S100AT4-497 | SORVALL RC M120 GX |