Méthodes d’étude des contributions utérines à l’établissement de la grossesse dans un modèle murin ovariectomisé

Summary

L’établissement de la grossesse est un processus dynamique impliquant une diaphonie embryonnaire et utérine complexe. Les contributions précises de l’environnement utérin maternel à ces processus restent un domaine de recherche actif. Ici, des protocoles détaillés sont fournis pour aider à concevoir des modèles animaux in vivo pour répondre à ces questions de recherche.

Abstract

Pour qu’une grossesse soit établie, un blastocyste viable doit interagir avec succès avec une muqueuse utérine réceptive (endomètre) pour faciliter l’implantation et la formation de placenta et permettre la poursuite de la grossesse. Les limites au succès de la grossesse causées par des anomalies embryonnaires sont bien connues et ont été largement surmontées au cours des dernières décennies avec l’essor de la fécondation in vitro (FIV) et des technologies de procréation assistée. Jusqu’à présent, cependant, le domaine n’a pas surmonté les limitations causées par un endomètre insuffisamment réceptif, ce qui entraîne une stagnation des taux de réussite de la FIV. Les fonctions ovarienne et endométriale sont étroitement liées, car les hormones produites par l’ovaire sont responsables de la cyclicité menstruelle de l’endomètre. En tant que tel, lors de l’utilisation de modèles de grossesse chez les rongeurs, il peut être difficile de déterminer si un résultat observé est dû à un déficit ovarien ou utérin. Pour surmonter cela, un modèle murin ovariectomisé a été développé avec transfert d’embryons ou décidualisation artificielle pour permettre l’étude des contributions spécifiques utérines à la grossesse. Cet article fournira des instructions sur la façon d’effectuer une ovariectomie et offrira un aperçu de diverses techniques pour fournir des hormones exogènes afin de soutenir une décidualisation artificielle ou une grossesse réussie après le transfert d’embryons de donneurs sains. Ces techniques comprennent l’injection sous-cutanée, les pastilles à libération lente et les mini-pompes osmotiques. Les principaux avantages et inconvénients de chaque méthode seront discutés, ce qui permettra aux chercheurs de choisir le meilleur plan d’étude pour leur question de recherche spécifique.

Introduction

Avec l’utilisation croissante des technologies de procréation assistée au cours des dernières décennies, de nombreux obstacles à la conception ont été surmontés, permettant à de nombreux couples de fonder une famille malgré les problèmes de fertilité¹. Les déficits ovocytaires ou spermatozoïdes peuvent souvent être contournés par fécondation in vitro ou injection intracytoplasmique de spermatozoïdes; Cependant, les problèmes liés à la réceptivité de l’utérus et de l’endomètre restent une « boîte noire » insaisissable du potentiel reproducteur².

La grossesse est établie lorsqu’un embry....

Protocol

Tous les animaux ont été logés dans des installations à haute barrière à température contrôlée (laboratoire de recherche animale de l’Université Monash) avec un accès gratuit à la nourriture et à l’eau et un cycle lumière-obscurité de 12 heures. Toutes les procédures ont été effectuées conformément à l’approbation du comité d’éthique de la plate-forme de recherche animale Monash (# 21908, 17971) et conformément au code de pratique du Conseil national de la santé et de la recherche médicale pour le soin et l’utilisation des animaux.

1. Préparation chirurgicale

1. Autoclaver tous les instruments chirurgicaux, gaze et e....

Results

Un modèle bien caractérisé de décidualisation artificielle est décrit dans ce document de protocole (figure 1A). Ici, les jeunes souris femelles adultes (âgées de 8 semaines) ont subi une ovariectomie chirurgicale comme décrit aux rubriques 1 et 2. Les souris ont ensuite été reposées pendant 2 semaines pour s’assurer que les hormones ovariennes endogènes se dissipaient avant d’être soutenues par des hormones exogènes comme décrit dans les sections 3-7 et 9. La déciduali.......

Discussion

Cet article fournit des instructions étape par étape sur la façon d’effectuer OVX et de fournir des hormones exogènes pour les études axées sur la compréhension des contributions utérines à la grossesse et à la fertilité. Deux protocoles détaillés sont fournis sur deux applications expérimentales de ces méthodes, y compris la réalisation du transfert d’embryons et l’induction artificielle de la décidualisation.

Bien que la réalisation d’OVX puisse être difficile au début - en particulier pour .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
ALZET 1002 mini pompes osmotiques	BioScientific	1002	Fournit 0,25 & micro ; L/h pendant 14 jours. À utiliser pour la section 7 (Procédure expérimentale - Transfert d’embryons).
ALZET 1003D mini pompes osmotiques	BioScientific	1003D	Fournit 1 & micro ; L/h pendant 14 jours. À utiliser pour la section 8 (Procédure expérimentale - Décidualisation artificielle).
Clips ALZET Reflex 7 mm	BioScientific	0009971	Des clips Reflex ou des clips Michel peuvent être utilisés pour la fermeture des plaies, selon la préférence
Application de clips ALZET Reflex	BioScientific	0009974	Des clips Reflex ou des clips Michel peuvent être utilisés pour la fermeture des plaies, selon la préférence
Extracteur de clips ALZET Reflex	BioScientific	0009976	Les clips Reflex ou les clips Michel peuvent être utilisés pour la fermeture de la plaie, selon la préférence
Bupivicaïne injection	Pfizer	NA	Stock 0,5 %. Utilisation à 0,05 % dans une solution saline
: Estradiol	Sigma	E8875
Meloxicam	Ilium	NA	: Constituant actif : 0,5 mg/mL. Utilisez une bouteille d’eau de cage de 3,5 ml par 400 ml, ou selon les prescriptions du vétérinaire de votre établissement.
Michel clips	Daniels	NS-000242
Scellant multi-usages	Dow Corning	732
Dispositif de transfert d’embryons non chirurgical (NSET)	ParaTechs	60010	Contient du spéculum de 6 mm. À usage unique uniquement.
Progestérone	Sigma	P0130	Soluble dans l’éthanol. Utiliser pour  ; section 3 (Préparation hormonale - injection sous-cutanée) et  ; section 4 (Préparation hormonale - granulés à libération lente)
Progestérone	Sigma	P7556	Soluble dans l’eau. Utiliser pour la rubrique 5 (Préparation hormonale - mini-pompes osmotiques)
Pommade oculaire rafraîchissante	Allergan	NA	42,5 % p/v paraffine liquide, 57,3 % p/v paraffine blanche douce
Rimadyl Carprofène	Zoetis	NA	Stock 50 mg/mL. Utilisation à 1 mg/ml (pour une dose de 5 mg/kg)
Tube en caoutchouc	Dow Corning	508-008	Lavé à 100 % d’éthanol et coupé en morceaux de 1 cm. Diamètre intérieur 1,57 mm ± ;   ; 0,23 millimètre ; diamètre extérieur 3,18 mm ± ; 0,23 millimètre ; Paroi 0,81 mm.
Huile de sésame	Sigma	S3547
Sofsilk Sutures en soie taille 3-0	Covidien	GS-832