Techniques et pratiques de culture cellulaire pour éviter la contamination par des champignons et des bactéries dans le laboratoire de culture cellulaire de recherche

Résumé

Ce protocole présente les techniques et pratiques essentielles de culture cellulaire à utiliser dans le laboratoire de culture cellulaire de recherche pour éviter la contamination par des champignons et des bactéries. Dans la catégorie des bactéries, un accent particulier sera mis sur la prévention de la contamination par les mycoplasmes.

Résumé

La culture cellulaire est une compétence délicate nécessaire à la culture de cellules humaines, animales et d’insectes, ou d’autres tissus, dans un environnement contrôlé. L’objectif du protocole est de mettre l’accent sur les techniques correctes utilisées dans un laboratoire de recherche pour prévenir la contamination par des champignons et des bactéries. Un accent particulier est mis sur l’évitement de la contamination par les mycoplasmes, une préoccupation majeure dans la salle de culture cellulaire en raison de sa petite taille et de sa résistance à la plupart des antibiotiques utilisés pour la culture cellulaire. Ces mêmes techniques assurent une croissance continue et maintiennent des cellules saines. Pour les utilisateurs de cultures cellulaires débutants et expérimentés, il est important d’adhérer systématiquement à ces meilleures pratiques pour atténuer le risque de contamination. Une fois par année, les laboratoires devraient examiner les pratiques exemplaires en matière de culture cellulaire et faire un suivi avec une discussion ou une formation supplémentaire au besoin. Prendre des mesures précoces pour prévenir la contamination en premier lieu permettra d’économiser du temps et de l’argent, par rapport au nettoyage après la contamination. Les meilleures pratiques universelles maintiennent les cultures cellulaires en bonne santé, réduisant ainsi le besoin de décongeler constamment de nouvelles cellules, d’acheter des milieux de culture cellulaire coûteux et de réduire la quantité de décontamination et de temps d’arrêt de l’incubateur.

Introduction

La culture cellulaire a de nombreuses utilisations dans le laboratoire de recherche. Depuis les origines de la culture cellulaire au début du 20e siècle, les lignées cellulaires ont contribué à faire progresser la science. Les lignées cellulaires présentent plusieurs avantages; Diverses lignées cellulaires peuvent aider les chercheurs à étudier la biologie cellulaire, à produire des baculovirus pour des études plus approfondies ou à produire de grandes quantités d’une protéine d’intérêt, pour n’en nommer que^{quelques-unes 1}. Parmi les autres utilisations, mentionnons l’étude de la croissance tissulaire, l’aide à l’avancement de la mise au point ....

Protocole

1. Préparatifs

1. Généralités
   1. Portez une blouse de laboratoire propre conçue pour être portée uniquement dans la salle de culture cellulaire et dans aucune autre partie du laboratoire.
      REMARQUE: La blouse de laboratoire n’a pas besoin d’être stérile.
   2. Portez des gants neufs qui n’ont touché aucune autre surface. Assurez-vous que les gants sont bien ajustés. Les gants en nitrile sans poudre sont les meilleurs.
      REMARQUE: Les gants n’ont pas besoin d’être stériles.
   3. Pour vous préparer au travail, vaporisez les gants, les manches de la blouse de laboratoire et l’intérieur de l’enceinte de sécurité biologique avec 7....

Résultats

Si les techniques et les pratiques de culture cellulaire décrites dans le présent document ne sont pas suivies, la contamination par des champignons et des bactéries peut se produire dans le laboratoire de culture cellulaire de recherche. La figure 2 montre les flacons contaminés à la fois dans les cultures en suspension et adhérentes.

Lorsqu’il ne suit pas les techniques d’asepsie, la contamination par les moisissures peut survenir 2 à 3 jours plus tard. Les boul.......

Discussion

Bien que la contamination soit l’une des principales préoccupations lors de l’exécution de travaux de culture cellulaire, les pratiques et les techniques décrites dans ce manuscrit aideront à atténuer les risques. Les étapes critiques comprennent le port d’une blouse de laboratoire propre, qui n’est utilisée que dans la salle de culture cellulaire, l’utilisation de gants propres et sans poudre qui sont souvent pulvérisés avec 70% d’EtOH et qui sont changés lors du passage d’une lignée cellulaire à l’autre, encourager cha.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
DPBS	Gibco	14-190-144
DMEM F-12 Media	ATCC	30-2006
Fiole à chicanes en verre	Pyrex  ;	09-552-40
Pipettes en verre	Fisher  ;	13-678-6B
Aide à la pipette	Drummond	13-681-15A  ;
Pipette sérologique	Corning	07-200-573
Fiole T75	Corning	07-202-004
Trypsine	Gibco	25-300-054
*Les articles peuvent varier car cette vidéo traite des techniques

générales de culture cellulaire