Isolement et caractérisation des ligaments utéro-sacrés murins et des organes du plancher pelvien

Résumé

Cet article présente un protocole détaillé pour disséquer les ligaments utéro-sacrés et d’autres tissus du plancher pelvien, y compris le col de l’utérus, le rectum et la vessie chez la souris, afin d’élargir l’étude des tissus reproducteurs féminins.

Résumé

Le prolapsus des organes pelviens (POP) est une affection qui affecte l’intégrité, la structure et le soutien mécanique du plancher pelvien. Les organes du plancher pelvien sont soutenus par différentes structures anatomiques, y compris les muscles, les ligaments et le fascia pelvien. Le ligament utéro-sacré (LSU) est une structure portante critique, et une lésion de la LSU entraîne un risque plus élevé de développer un POP. Le présent protocole décrit la dissection des LSU murins et des organes du plancher pelvien, ainsi que l’acquisition de données uniques sur la composition et la fonction biochimiques de la LSU à l’aide de la spectroscopie Raman et de l’évaluation du comportement mécanique. Les souris sont un modèle inestimable pour la recherche préclinique, mais disséquer la LSU murine est un processus difficile et complexe. Cette procédure présente une approche pour guider la dissection des tissus du plancher pelvien murin, y compris la LSU, afin de permettre de multiples évaluations et caractérisations. Ce travail vise à faciliter la dissection des tissus du plancher pelvien par les scientifiques fondamentaux et les ingénieurs, élargissant ainsi l’accessibilité de la recherche sur la LSU et les conditions du plancher pelvien et l’étude préclinique de la santé des femmes à l’aide de modèles murins.

Introduction

Environ 50 % des femmes sont touchées par le prolapsus des organes pelviens (POP)^1,2. Environ 11 % de ces femmes répondent aux critères pour subir une réparation chirurgicale, ce qui a un faible taux de réussite (~30 %)^3,4. Les POP se caractérisent par la descente de tout ou partie des organes pelviens (c.-à-d. vessie, utérus, col de l’utérus et rectum) de leur position naturelle en raison de l’incapacité de la LSU et des muscles du plancher pelvien à fournir un soutien adéquat⁵. Cette condition implique un dysfonctionnement ana....

Protocole

Toutes les expériences et procédures sur les animaux ont été effectuées conformément au protocole #2705, approuvé par le Comité de soin et d’utilisation des animaux de l’Université du Colorado à Boulder. Des souris C57BL/6J femelles âgées de six semaines ont été utilisées pour la présente étude. Les animaux ont été obtenus d’une source commerciale (voir le tableau des matériaux).

1. Préparation des animaux

1. Euthanasier l’animal selon la méthode approuvée par l’établissement.
   REMARQUE : La présente étude a utilisé l’inhalation de CO 2 conformément aux lignes directrices de l’American Veterinary M....

Résultats

Chaque étape de la dissection d’une souris de type sauvage est détaillée dans la vidéo associée et les figures liées au protocole. Pour cette étude, des souris C57BL/6J femelles âgées de 6 semaines ont été utilisées (tableau supplémentaire 1). Trois groupes d’échantillons avec des LSU traitées avec différentes enzymes ont été analysés: les groupes témoins (aucun traitement), les groupes traités à la collagénase et les groupes traités à la chondroïtinase. Le muscle lisse, les nerfs et les lymphatiques de .......

Discussion

L’effet des dommages structurels sur les tissus reproducteurs féminins est sous-étudié, et un modèle animal facilement accessible pour la recherche sur les POP est nécessaire. La souris est un modèle rentable qui peut imiter les études sur la reproduction humaine¹⁶. En raison de l’intérêt croissant pour l’étude du système reproducteur féminin, il existe un besoin de méthodes qui facilitent l’étude de ces tissus. Pour répondre à ce besoin, dans ce travail, une méthode est établie pour disséquer et .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
11 Lame	Fisher	3120030	Lame amovible
1x PBS	Fisher	BP399-1	Dilué à partir de 10x concentration
Chondroïtinase ABC	Sigma	C3667-10UN	Enzyme  ;
Collagénase de type I	Enzyme biochimique	LS004194	Worthington  ;
Microscope confocal	Leica	STELLARIS 5	Configuration verticale
Microscope de dissection	Leica	S9E	Avec caméra
Dumont #5 Pince	Fisher	NC9626652	Pointe fine
Femelle C57BL/6J	Jackson Laboratory	# : 000664
FemtoTools Micromanipulateur	FemtoTools	FT-RS1002	100 mN capteur de charge
FST Pince incurvée	Fisher	NC9639443	Pointe incurvée
FST Sharp 9 mm Ciseaux  ;	Fisher	NC9639443	Ciseaux de dissection
Ghost Dye 780  ;	Tonbo	13-0865-T500	Colorant aux amines libres
Kimwipes	Fisher	06-666	Boîte de 50 lingettes
OCT	Tissue Tek	4583	Utilisé pour la préservation des tissus
PDMS	Thermo Fisher	044764.AK	Suivez les instructions du fabricant
Boîtes de Pétri 35 mm	Fisher	FB0875711A	Utilisé pour les tissus disséqués
Polyglactin 5-0 Suture	Veter.Sut	VS385VL	Avec aiguille
Renishaw InVia Microscope Raman	Renishaw	PN192(FR)-02-A	Avec objectifs confocaux
Plate-forme basculante	VWR	10127-876	Plate-forme à 2 niveaux
Gants chirurgicaux	Fisher	52818	Pour la dissection  ;
Sytox	Thermo Fisher	S11381	Coloration nucléaire  ;
Goupilles en T	Fisher	S99385	Pour la dissection  ;
Pipettes de transfert	Fisher	13-711-7M	Pour la dissection  ;
Coussinets	Fisher	22037950	Pour couvrir le tampon de dissection

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