Un modello di orecchio di topo per la valutazione della dermatite allergica da contatto
Summary
Qui, descriviamo i metodi per indurre la dermatite allergica da contatto nelle orecchie di topo da 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) e come valutare la gravità della dermatite allergica da contatto.
Abstract
La pelle è la prima linea di difesa del corpo umano e uno degli organi più esposti alle sostanze chimiche ambientali. La dermatite allergica da contatto (ACD) è una malattia della pelle comune che si manifesta come eruzione cutanea locale, arrossamento e lesioni cutanee. La presenza e lo sviluppo di ACD sono influenzati da fattori sia genetici che ambientali. Sebbene molti studiosi abbiano costruito una serie di modelli di ACD negli ultimi anni, i protocolli sperimentali di questi modelli sono tutti diversi, il che rende difficile per i lettori stabilirli bene. Pertanto, un modello animale stabile ed efficiente è di grande importanza per studiare ulteriormente la patogenesi della dermatite atopica. In questo studio, descriviamo in dettaglio un metodo di modellazione che utilizza 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) per indurre sintomi simili ad ACD nelle orecchie dei topi e descriviamo diversi metodi per valutare la gravità della dermatite durante la modellazione. Questo protocollo sperimentale è stato applicato con successo in alcuni esperimenti e ha un certo ruolo promozionale nel campo della ricerca ACD.
Introduction
La dermatite allergica da contatto (ACD) è una malattia della pelle comune caratterizzata da sintomi simili all’eczema nel sito di contatto, edema ed eritema nei casi moderati e papule, erosione, essudazione o anche cicatrici massicce nei casi più gravi1. Colpisce fino al 20% della popolazione e può colpire persone di qualsiasi età2. L’ACD si verifica spesso in individui che sono stati esposti ripetutamente agli allergeni e può essere causata dalla risposta immunitaria dell’individuo a uno o più allergeni nella loro casa o sul posto di lavoro3. L’ipersensibilità ritardata di tipo IV è considerata il principale tipo di risposta immunitaria nell’ACD4. Nelle aree della pelle che sono state ripetutamente esposte agli allergeni, le cellule T della memoria circolante si accumulano in gran numero e inducono risposte immunitarie e infiammatorie 3,5,6. Lo scopo di questo lavoro è quello di proporre una tecnica di laboratorio affidabile per ulteriori indagini sulle risposte immunologiche e infiammatorie nello sviluppo di ACD.
L’insorgenza di ACD è solitamente dovuta all’ipersensibilità da contatto causata da ripetute esposizioni a sostanze chimiche. Numerosi ricercatori hanno sviluppato vari modelli animali ACD in topi domestici7,8, porcellini d’India9,10 e altri animali nel corso degli ultimi decenni, al fine di simulare l’insorgenza della malattia. La maggior parte dei metodi sperimentali consiste in due fasi: sensibilizzazione addominale (induzione) e fornitura di stimoli sulla schiena o sul lobo dell’orecchio (stimolazione). Le sostanze chimiche comunemente usate includono principalmente 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) / 1-cloro-2,4-dinitrobenzene (DNCB) 8,9,11, ossazolone12, urushiol13, ecc. Tra questi, DNFB e DNCB sono i più utilizzati, segnalati per la prima volta nell’ottobre 195810. Anche la sensibilizzazione al nichel modello14 e la dermatite fotoallergica da contatto modello15 sono frequentemente utilizzate.
Presentiamo un metodo sperimentale per la costruzione del modello ACD. Questo metodo è riassunto e ottimizzato sulla base di studi precedenti e sul confronto con più esperimenti. Rispetto ad altri modelli ACD, questo modello presenta alcuni vantaggi, come piccole differenze individuali, brevi periodi sperimentali, una piccola quantità di stimolazione chimica, ecc. Inoltre, questo studio è applicabile ai topi, che non sono solo economici, ma hanno anche più opzioni per il knockout genico o la preparazione di topi transgenici16. Descriviamo anche i vari metodi utilizzati per monitorare i progressi dell’ACD nell’esperimento, come la misurazione dello spessore dell’orecchio, l’uso del colorante blu di Evans per misurare l’essudazione infiammatoria, ecc. Questo modello non solo può analizzare orecchie di topo, sangue, milza e altri campioni con mezzi di laboratorio per esplorare la patogenesi dell’ACD, ma è anche applicabile per la valutazione preclinica di nuovi metodi terapeutici, che ha un certo significato promozionale.
Protocol
Representative Results
Discussion
Il protocollo qui descritto per indurre sintomi simili all’ACD nelle orecchie dei topi può essere utilizzato per studiare la fisiopatologia dell’ACD e come strumento di screening per lo sviluppo di nuovi farmaci.
Ci sono due passaggi chiave per stabilire un modello ACD: sensibilizzazione iniziale e successiva stimolazione. L’addome è di solito il sito di sensibilizzazione iniziale, ma il sito di stimolazione successivo è stato scelto in modo leggermente diverso. Studi precedenti hanno dimos…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (NSFC) a N.-N. Y. (81904212); Progetto di scienza e tecnologia della medicina tradizionale cinese di Jiangsu (YB201995); e il progetto di finanziamento speciale per i ricercatori post-dottorato in Cina (2020T130562).
Materials
| 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) | Merck | 200-734-3 | 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99% |
| Acetone | Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD | 10000418 | ≥99.5% |
| Aluminum foil | Cleanwrap | CF-2 | |
| Evans blue dye | Solarbio | 314-13-6 | Dye content approx. 80% |
| Mouse fixator | ZHUYANBANG | GEGD-SM1830 | |
| Olive oil | Solarbio | 8001-25-0 | 500 ml |
| Pipet tip | Biofount | FT-200 | 10 – 200 μl |
| Pipettor | Eppendorf AG | 3123000250 | 20 – 200 μl |
| Razor blade | Shanghai Gillette Co. LTD | 74-S | |
| Vernier calipers | Delixi Electric | DECHOTVCS1200 |
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