Neste trabalho, propomos um protocolo para a administração intratraqueal de lipopolissacarídeo (LPS) via intubação endotraqueal orofaríngea não invasiva. Este método minimiza o trauma do procedimento cirúrgico para o animal e entrega com precisão LPS para a traqueia e, em seguida, para os pulmões.
O modelo de lesão pulmonar aguda (LPA) em camundongos induzida por lipopolissacarídeo (LPS) ou endotoxina ainda está entre os modelos mais comumente utilizados em estudos animais de lesão pulmonar aguda ou inflamação aguda. Os métodos atualmente mais utilizados em modelos de lesão pulmonar aguda em camundongos são a injeção intraperitoneal de LPS e a traqueostomia para a infusão traqueal de LPS. No entanto, o primeiro método não tem como alvo o pulmão e danifica outros órgãos, e o segundo método induz trauma operatório, risco de infecção e baixa taxa de sobrevida. Aqui, recomendamos um método não invasivo de intubação orofaríngea endotraqueal para instilação de LPS em camundongos. Nesse método, o LPS é introduzido de forma não invasiva na traqueia através da cavidade orofaríngea para ser instilado no pulmão com o auxílio de um aparelho para intubação endotraqueal. Este método não só garante a segmentação pulmonar, mas também evita danos e o risco de morte nos animais. Esperamos que essa abordagem se torne amplamente utilizada no campo da lesão pulmonar aguda.
A lesão pulmonar aguda (LPA) é uma síndrome clínica comum. Sob uma variedade de fatores patogênicos, a ruptura da barreira fisiológica das células epiteliais pulmonares e das células endoteliais vasculares leva ao aumento da permeabilidade alveolar, causando diminuição da complacência pulmonar, edema pulmonar e hipoxemia grave1. A síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA) é a forma mais grave de LPA. A inflamação não controlada e os danos causados pelo estresse oxidativo são considerados as principais causas de LPA e de SDRA mais grave2. Quando as células epiteliais alveolares são diretamente lesadas devido ao trauma, a cadeia de resposta inflamatória dos macrófagos alveolares é ativada, levando à inflamação nopulmão3. Globalmente, há mais de 3 milhões de pacientes com SDRA aguda por ano, e eles respondem por aproximadamente 10% das admissões em unidades de terapia intensiva; Além disso, a taxa de mortalidade nos casos graves chega a 46%4,5,6. Portanto, há necessidade de se estabelecer um modelo animal adequado de LPA para estudar sua patogênese. O camundongo é o animal experimental mais comumente usado no estudo da LPA, uma vez que seu trato respiratório pode simular bem o trato respiratório humano para estudos de LPA. Além disso, a LPA manifesta-se como infiltrado maciço de células inflamatórias, aumento da permeabilidade vascular pulmonar e edema pulmonar. As alterações nas citocinas inflamatórias no soro e na relação peso seco-úmido do pulmão refletem o grau de LPA7.
Atualmente, os principais métodos para modelagem da LPA induzida por LPS em camundongos incluem a intubação traqueal intranasal e cirúrgica 8,9. Aqui, propomos um novo método para liberar LPS na traqueia via intubação orofaríngea não invasiva. Este método usa um intubador iluminado para encontrar a traqueia do rato e, em seguida, entrega LPS na traqueia e pulmão. Este método entrega LPS aos pulmões com mais precisão do que o método intranasal de entrega. Comparado à intubação traqueal cirúrgica, esse método não requer cirurgia, evita ferimentos e reduz a dor em camundongos10. Portanto, esse método pode ser usado para estabelecer um modelo de LPA em camundongos mais convincente.
Inicialmente, foi realizada uma busca no interior da cavidade oral para encontrar a localização datraqueia19. No entanto, durante esse processo, descobrimos que a traqueia de camundongos C57/BL é estreita, o que dificulta encontrar a localização correta por esse método sem o auxílio de equipamentos como um endoscópio20. Após uma exploração mais aprofundada, verificou-se que a luz da lâmpada do intubador poderia penetrar na superfície do corpo, permitindo ao ope…
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (No.: 81903902), pela China Postdoctoral Science Foundation (No.: 2019M663457), pelo Programa de Ciência e Tecnologia de Sichuan (No.: 2020YJ0172) e pelo Xinglin Scholar Research Premotion Project da Universidade de Chengdu da TCM (No.: QJRC2022053).
Lipopolysaccharide | MERK | L4130 | LPS |
Microliter Syringes | SHANGHAI GAOGE INDUSTRY AND TRADE CO., LTD | 10028505008124 | To deliver LPS |
Mouse cannula | RWD Life Science | 803-03008-00 | Mouse cannula |
Mouse intubation kit | RWD Life Science | 903-03027-00 | Including a base, a riser, a intubator, a surgical forceps and some strings |
Pasteur pipette | Biosharp life science | BS-XG-03 | To verify the success of intubation |
Pentobarbital sodium | Beijing Chemical Co., China | 20220918 | To anesthetize mice |