Caractérisation comportementale d’un modèle murin du syndrome d’Angelman

Résumé

Ce manuscrit présente un ensemble de tests comportementaux hautement reproductibles pour valider un modèle murin du syndrome d’Angelman.

Résumé

Ce manuscrit décrit une batterie de tests comportementaux disponibles pour caractériser les phénotypes de type syndrome d’Angelman (SA) dans un modèle murin établi de SA. Nous utilisons le paradigme d’apprentissage du rotarod, l’analyse détaillée de la démarche et le test de construction du nid pour détecter et caractériser les déficiences motrices des animaux. Nous testons l’émotivité de l’animal en plein champ et dans les tests de labyrinthe surélevé, ainsi que l’effet dans le test de suspension de la queue. Lorsque des souris AS sont testées dans le cadre du test en champ libre, les résultats doivent être interprétés avec prudence, car les dysfonctionnements moteurs influencent le comportement de la souris dans le labyrinthe et modifient les scores d’activité.

La reproductibilité et l’efficacité des tests comportementaux présentés ont déjà été validées dans plusieurs lignées de souris Uba3a indépendantes avec différentes variantes knock-out, faisant de cet ensemble de tests un excellent outil de validation dans la recherche sur la SA. Les modèles avec la construction pertinente et la validité apparente justifieront des recherches plus approfondies pour élucider la physiopathologie de la maladie et permettre le développement de traitements causaux.

Introduction

Le syndrome d’Angelman (SA) est une maladie neurodéveloppementale rare. L’origine génétique la plus fréquente de la SA est une délétion importante de la région 15q11-q13 du chromosome d’origine maternelle, qui se retrouve chez près de 74 % des patients¹. La délétion de cette région entraîne la perte d’UBE3A, le principal gène responsable de la SA qui code pour une ubiquitine ligase E3. L’allèle paternel du gène UBE3A dans les neurones est réduit au silence dans un processus connu sous le nom d’empreinte. En conséquence, l’empreinte paternelle du gène ne permet que l’expression maternelle dans le système nerveux central (SNC)

Protocole

Tous les animaux et les expériences utilisés dans cette étude ont fait l’objet d’un examen éthique et ont été menés conformément à la directive européenne 2010/63/UE. L’étude a été approuvée par la Commission centrale tchèque pour le bien-être des animaux. Les souris ont été logées dans des cages ventilées individuellement et maintenues à une température constante de 22 ± 2 °C avec un cycle lumière/obscurité de 12 h. Les souris ont reçu de la nourriture de souris et de l’eau ad libitum. Les souris étaient logées en groupes de trois à six animaux par cage. Aucune manipulation autre que la pesée n’a été effectuée avant les essais. Voir le tableau des

Résultats

Tests en hauteur, en labyrinthe et en champ libre
Les tests EPM et OF utilisent la tendance naturelle des rongeurs à explorer de nouveaux environnements^18,19. L’exploration est régie par un conflit d’approche-évitement, où les rongeurs choisissent entre l’exploration d’un nouvel environnement et l’évitement d’un éventuel danger. Les animaux explorent des endroits inconnus à la recherche d’un abri, de contacts sociaux ou de recherche de nourrit.......

Discussion

Les modèles SA créés dans différentes souches murines sont généralement validés par des tests de l’état émotionnel, des fonctions motrices et des capacités cognitives de l’animal pour faciliter la comparaison avec les symptômes humains^31,32. Un déficit moteur dans les modèles SA est la constatation la plus constante dans tous les laboratoires, suivi d’un état d’émotivité inchangé des mutants et de difficultés à construire des nids^31,32,33<.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Cages, ventilées individuellement	Techniplast
DigiGait	Mouse Specifics, Inc., 2 Central Street Level Unit 110 Framingham, MA 01701, USA	L’équipement a été remis, aucun numéro de catalogue n’a été fourni ni ne peut être trouvé sur le site Web de l’entreprise	Analyse détaillée de la démarche de la souris, du matériel et des logiciels fournis.  ;
FDA Nestlet squares	Datesand Ltd., 7 Horsfield Way, Bredbury, Stockport SK6, Royaume-Uni	Le matériel a été acheté auprès du fournisseur de Velaz via une demande directe par e-mail. Velaz ne fournit pas de n° de catalogue.	Nids en coton pour le test de construction de nid. Répartition du nid : 2-3 g chacun, d’un diamètre d’environ 5 x 5 x 0,5 cm.
Mouse chow	Altramion
Rotarod	TSE Systems GmbH, Barbara-McClintock-Str.4 12489 Berlin, Allemagne	L’équipement a été admis, aucun numéro de catalogue n’a été fourni, ni n’a pu être trouvé sur le site Web de la société	Rotarod pour 5 souris, matériel et logiciel fournis. Dimensions du tambour : Diamètre : 30 mm, largeur par voie : 50 mm, distance de chute 147 mm.
Test de suspension de queue	Bioseb, In Vivo Research Instruments, 13845 Vitrolles FRANCE	Référence : BIO-TST5	Équipement entièrement automatisé pour l’évaluation du temps d’immobilité de 3 souris suspendues par la queue, matériel et logiciel fournis
Bande médicale Transpore	Medical M, Ltd.	P-AIRO1291	Le ruban utilisé pour attacher un animal à l’hameçon par sa queue.
Visionneuse - Système de suivi vidéo	Biobserve GmbH, Wilhelmstr. 23 A 53111 Bonn, Allemagne	Des équipements avec logiciel ont été proposés, aucun numéro de catalogue n’a été fourni, ni n’a pu être trouvé sur le site Web de l’entreprise	Logiciel avec du matériel sur mesure : labyrinthe, base IR, caméras sensibles aux IR. Dimensions OF sur mesure : surface de 42 x 42 cm, mur de 49 cm de haut, zone centrale : 39 cm2. Un EPM sur mesure a été élevé à 50 cm au-dessus du sol, avec un bras ouvert de 79 cm de long,  ; 9 cm de large et bras fermé de 77 cm de long, 7,6 cm de large.