2-Foton Mikroskop kullanarak Fare Thymus in situ Görüntüleme
Summary
Yenidoğan kimeralar üretimi yanı sıra 2-Foton Mikroskopi diseksiyonu ve ex vivo görüntüleme için timus hazırlanması için adım adım talimatlar sunuyoruz.
Abstract
İki foton Mikroskobu (TPM) timus derinliklerine görüntü sağlar ve timosit gelişimi için önemli olan olayları belgelemek. Timositleri bir kalabalığın içinde bireylerin göç takip etmek, biz timositleri yüzde birinden daha az yayg ifade floresan protein transgenik bir donörden elde edilen yenidoğan kimeralar üretir. Bu kısmi hematopoetik kimeralar oluşturmak için, yenidoğan alıcılar yaş 3-7 gün arasında kemik iliği ile enjekte edilir. 4-6 hafta sonra, fare kurban ve timus dikkatle diseke ve görüntülü olacak doku mimarisi korunarak bissected. Timus TPM tarafından ex vivo görüntüleme için hazırlık lamel üzerine yapıştırılır. Görüntüleme sırasında timus,% 95 oksijen ve% 5 karbon dioksit ile perfüze ve 37 ısındı fenol kırmızısı ° C olmadan DMEM tutulur Bu yaklaşımı kullanarak, biz, farklı T hücre repertuarının üretimi için gerekli olan olayları incelemek.
Protocol
Discussion
Timus İki foton görüntüleme, yaşam, sağlam organları etkileşimleri ve timus içinde seçim olayların altında yatan göçler incelemek için bize sağlar.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz, teknik yardım için Matt Paul ve Jimmy Wu teşekkür ederim.
References
- Kyewski, Seeding of thymic microenvironments defined by distinct thymocyte-stromal cell interactions is developmentally controlled. J Exp Med. 166, 520-538 (1987).
- Ladi, E., Yin, X., Chtanova, T., Robey, E. A. Thymic microenvironments for T cell differentiation and selection. Nat Immunol. 7, 338-343 (2006).
- Witt, C. M., Raychaudhuri, S., Schaefer, B., Chakraborty, A. K., Robey, E. A. Directed Migration of Positively Selected Thymocytes Visualized in Real Time. PLoS Biol. 3, (2005).
