Une procédure pour la cryosection du ganglion de la racine dorsale de la souris
Summary
Nous présentons ici le développement permettant d’acquérir systématiquement des coupes de cryostat ganglionnaire de racine dorsale de haute qualité.
Abstract
Des coupes de cryostat de ganglion de la racine dorsale (DRG) de souris de haute qualité sont cruciales pour une coloration immunochimique appropriée et des études RNAscopique dans la recherche de douleurs inflammatoires et neuropathiques, de démangeaisons, ainsi que d’autres affections neurologiques périphériques. Cependant, il reste difficile d’obtenir systématiquement des coupes de cryostat de haute qualité, intactes et plates sur des lames de verre en raison de la petite taille de l’échantillon du tissu DRG. Jusqu’à présent, il n’existe pas d’article décrivant un protocole optimal pour la cryosection DRG. Ce protocole présente une méthode étape par étape pour résoudre les difficultés fréquemment rencontrées associées à la cryosection DRG. L’article présenté explique comment retirer le liquide environnant des échantillons de tissus DRG, placer les sections DRG sur la lame orientées dans la même orientation et aplatir les sections sur la lame de verre sans se courber. Bien que ce protocole ait été développé pour la cryosection des échantillons DRG, il peut être appliqué pour la cryosection de nombreux autres tissus avec une petite taille d’échantillon.
Introduction
Le ganglion de la racine dorsale (DRG) contient les neurones sensoriels primaires, les macrophages tissulaires et les cellules satellites qui entourent les neurones sensoriels primaires 1,2,3,4. Il s’agit d’une structure anatomique clé dans le traitement des signaux inoffensifs et nocifs, et joue un rôle essentiel dans la douleur, les démangeaisons et divers troubles des nerfs périphériques 5,6,7,8,9,10,11,12,13. Bien que plusieurs méthodes aient été mises au point pour disséquer le tissu DRG de la moelle épinière de souris14,15,16, la cryosection du tissu DRG reste difficile car le tissu DRG est assez petit et les sections cryostat des échantillons DRG ont tendance à se courber en rouleaux, ce qui rend difficile le transfert correct des sections du cryostat sur des lames de verre. Cependant, une cryosection correcte du tissu DRG est cruciale pour les études d’immunohistochimie et la structure des neurones sensoriels DRG 17,18,19,20,21,22,23. De plus, comme les résultats du séquençage de l’ARN unicellulaire ont révélé l’hétérogénéité remarquable des neurones sensoriels DRG chez l’homme24 et la souris25, une cryosection appropriée du tissu DRG est essentielle pour étudier le rôle fonctionnel de différentes cellules DRG dans diverses conditions physiologiques et pathologiques.
Bien que la technique d’élimination des tissus ait été appliquée pour étudier la reconstruction 3D du DRG26 en tant que technique alternative de cryosection du DRG, la technique d’élimination des tissus prend du temps et de la main-d’œuvre. En comparaison, la cryosection du DRG est rapide et relativement facile à réaliser, et reste donc une technique clé pour l’immunohistochimie et l’étude de la structure du DRG et d’autres régions du système nerveux central. Cependant, l’obtention de coupes de cryostat de haute qualité, intactes et plates sur des lames de verre reste un défi dans la recherche en neurosciences en raison de la petite taille de l’échantillon de tissus, comme le DRG et certaines régions du cerveau, et il n’y a pas d’article décrivant le protocole optimal à ce stade pour la cryosection d’échantillons de tissus de petite taille, tels que les DRG de souris.
Ce protocole fournit une technique simple, étape par étape, pour la section cryostatique du DRG de souris afin d’obtenir de manière fiable autant de sections DRG de haute qualité sur les lames pour les études DRG ultérieures. Bien qu’elle soit spécialement conçue pour la cryosection d’échantillons DRG, cette technique peut potentiellement être utilisée pour cryosectionner divers autres tissus avec une petite taille d’échantillon.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ce protocole fournit une procédure simple, étape par étape, pour la section cryostatique du DRG de souris afin d’obtenir des sections DRG de haute qualité sur des lames de manière fiable. Il y a quatre étapes critiques dans ce protocole. Tout d’abord, l’échantillon DRG et la pince à épiler doivent être secs avant de placer l’échantillon DRG sur l’OCT de base. Tout liquide entourant l’échantillon DRG formera une coquille de glace autour de celui-ci, ce qui entraînera la séparation des sections DR…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Aucun.
Materials
| Avertin | Sigma-Aldrich | T48402-25G | Anesthetize animal |
| Epredia Cryotome Cryostat Cryocassettes, 25 mm dia. Crosshatched | Fisherbrand | 1910 | Hold the OCT section at the bottom |
| Ergo Tweezers | Fisherbrand | S95310 | Using the end of a tweezer to gently touch the bottom (6 o’clock) of the section so that it sticks to the platform surface to prevent the section from curving back in a roll |
| Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides | Fisherbrand | 1255015 | To collect the DRG section |
| Marking pens | Fisherbrand | 133794 | Mark the orientation of base OCT |
| Scigen Tissue-Plus O.C.T. Compound | Fisherbrand | 23730571 | Embedding medium for frozen tissue specimens to ensure optimal cutting temperature (O.C.T.). |
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