Détection des anticorps antirabiques IgG et IgM à l’aide du test d’anticorps fluorescents indirects contre la rage

Résumé

L’objectif de ce manuscrit est d’examiner l’utilisation du test d’anticorps fluorescents indirects contre la rage pour la détection des anticorps IgG et IgM spécifiques de la rage.

Résumé

Le test d’anticorps fluorescents indirects (IFA) contre la rage a été mis au point pour détecter divers isotypes d’anticorps spécifiques de la rage dans les sérums ou le liquide céphalo-rachidien. Ce test fournit des résultats rapides et peut être utilisé pour détecter les anticorps antirabiques dans plusieurs scénarios différents. Le test IFA de la rage est particulièrement utile pour la détection rapide et précoce des anticorps afin d’évaluer la réponse immunitaire chez un patient qui a développé la rage. Bien que d’autres méthodes de diagnostic de la rage ante-mortem aient la priorité, ce test peut être utilisé pour démontrer l’exposition récente au virus de la rage par la détection d’anticorps. Le test IFA ne fournit pas de titre d’anticorps neutralisant le virus (VNA), mais la réponse à la prophylaxie pré-exposition (PrEP) peut être évaluée par la présence d’anticorps positifs ou négatifs. Ce test peut être utilisé dans diverses situations et peut fournir des résultats pour un certain nombre de cibles différentes. Dans cette étude, nous avons utilisé plusieurs échantillons de sérum appariés provenant de personnes ayant reçu la PrEP et démontré leur présence d’anticorps antirabiques au fil du temps à l’aide du test IFA.

Introduction

Le test d’anticorps fluorescents indirects (IFA) antirabiques est utilisé pour détecter divers isotypes d’anticorps spécifiques de la rage dans le sérum ou le liquide céphalo-rachidien. Il fait partie d’un arsenal de tests disponibles pour le suivi d’un patient ante mortem de la rage. Il est particulièrement utile pour la détection précoce des anticorps afin d’évaluer la réponse immunitaire d’un patient à l’infection par la rage. Lorsqu’il est utilisé en conjonction avec d’autres tests, les antécédents et le statut vaccinal du patient, le test IFA peut aider à déterminer l’exposition au virus de la rage ou à un vaccin¹. Comme le test IFA mesure....

Protocole

Le protocole suivant a été approuvé pour l’utilisation éthique d’échantillons humains par le Wadsworth Center du Département de la santé de l’État de New York pour le développement de tests, numéro d’approbation du protocole #03-019.

1. Sécurité

1. Enfilez un équipement de protection individuelle (EPI), au moins une protection oculaire (lunettes ou écran facial), un masque chirurgical et des gants sans latex.
2. S’assurer que le personnel est vacciné contre la rage et qu’un titre de ≥0,5 UI/mL a été démontré au cours des 6 derniers mois.

2. Préparation des lames antigéni....

Résultats

Tous les échantillons de sérum ont été prélevés sur les patients à peu près au même moment après la PrEP. Les échantillons ont été testés sur cinq patients différents aux moments suivants : 2 semaines après l’inoculation finale du vaccin antirabique, 6 mois après la série de vaccins antirabiques et 18 mois après la série de vaccins antirabiques. Chaque échantillon de sérum a été dilué en série et classé en fonction de la présence d’IgM et d’IgG, comme décrit dans les étapes 5.2 et 5.3 du protocole. La valeur d’anticorps .......

Discussion

Le test IFA tire parti d’un complexe antigène-anticorps, ce qui permet à un site de marquage de visualiser les anticorps spécifiques de la rage. Les cellules de neuroblastome ou BHK sont ensemencées sur des lames de microscope à plusieurs puits recouvertes de PTFE et inoculées avec la souche de laboratoire CVS-11 du virus de la rage. Une fois que la monocouche est confluente et que les cellules atteignent l’infectivité souhaitée d’environ 50 %, les lames sont stockées jusqu’à ce qu’elles soient prêtes à l’emploi

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
25x55mm Couvercle en verre	N’importe quelle
acétone	Tout
conjugué étiqueté	Igma-Aldrich	F9512
IgM anti-humain Conjugué	SeraCare	5230-0286
Pointe de pipette aspirante	N’importe quelle
cellule BHK-21 ATCC		CCL-10
BION IFA Diluant	MBL BION	DIL-9993
Eau de culture cellulaire	Sigma-Aldrich	W3500	EGM
Coplin Jars	N’importe quel
sérum de veau fœtal  ;	Sigma-Aldrich	F2442	EGM
Microscope fluorescent avec filtre FITC	Tout
glycérol	Sigma-Aldrich	G7893	Mountant
Gullsorb Réactif d’inactivation IgM	Fisher Scientific	23-043-158	Réactif d’inactivation IgG
L-Glutamine	Sigma-Aldrich	G-7513	EGM
Média minimum essentiel Eagle &ndash ; avec Earle' sels s, L-glutamine et acides aminés non essentiels, sans bicarbonate de sodium	Sigma-Aldrich	M0643	EGM
Cellules de neuroblastome de souris	ATCC	CCL-131
Lames de verre à revêtement PTFE multi-puits	N’importe quel
			pH 7,6  ;
Pénicilline	Sigma	P-3032	EGM
Rage Fluorescent Direct Anticorps Conjugué	Millipore Sigma	5100, 5500, 6500, RU5100 ou RU5500
Bicarbonate de sodium	Sigma-Aldrich	S-5761	EGM
Cristaux de chlorure de sodium	Sigma-Aldrich	S5886	Mountant
Compte-gouttes stérile	N’importe quel
Sel de sulfate de streptomycine	Sigma	S9137	EGM
Trizma cristaux préréglés pH 9.0	Sigma-Aldrich	S9693	Mountant
Tryptose Phosphate Broth	BD	260300	EGM
Mélange de vitamines	Sigma-Aldrich	M6895	EGM

PBS N’importe quel