प्रस्तुत गर्भाशय ग्रीवा हेरफेर विधि चूहों में छद्म गर्भावस्था को प्रेरित कर सकती है, बिना प्रजनन मादाओं को वैसक्टोमाइज्ड पुरुषों के साथ प्रजनन की आवश्यकता के बिना। गैर-सर्जिकल भ्रूण हस्तांतरण और गैर-सर्जिकल कृत्रिम गर्भाधान की सफलता के लिए छद्म गर्भावस्था का प्रेरण आवश्यक है, दोनों भी प्रस्तुत किए गए हैं।
भ्रूण हस्तांतरण या कृत्रिम गर्भाधान के साथ गर्भावस्था को सफलतापूर्वक बनाए रखने के लिए, महिला प्राप्तकर्ता चूहों को एक छद्म गर्भवती अवस्था में प्रेरित किया जाना चाहिए। मादा चूहों को पारंपरिक रूप से रात भर वैसक्टोमाइज्ड पुरुषों के साथ जोड़ा जाता है, और अगली सुबह, एक कॉपुलेशन प्लग की उपस्थिति का आकलन किया जाता है। छद्म गर्भवती महिलाओं के उत्पादन की दक्षता बढ़ाने के लिए, चूहों में गैर-सर्जिकल भ्रूण हस्तांतरण या कृत्रिम गर्भाधान तकनीकों के संयोजन में उपयोग करने के लिए एक ग्रीवा हेरफेर तकनीक को मानकीकृत किया गया है। एक छोटी प्लास्टिक रॉड के कुंद सिरे को गर्भाशय ग्रीवा से संपर्क करने के लिए योनि से डाला जाता है और ट्रिमर के संपर्क से 30 सेकंड तक कंपन होता है। प्रक्रिया त्वरित है और संज्ञाहरण या एनाल्जेसिया की आवश्यकता नहीं है। यह तकनीक छद्म गर्भवती महिलाओं के उत्पादन की विश्वसनीयता और पूर्वानुमान को बढ़ाती है और पूरी तरह से वैसक्टोमाइज्ड पुरुषों की आवश्यकता को समाप्त करती है। सीडी 1 चूहों के लिए, गर्भाशय ग्रीवा हेरफेर का उपयोग करके स्यूडोप्रेग्नेंसी प्रेरण की दक्षता एस्ट्रस (एन = 76) में महिलाओं के लिए 83% थी, लेकिन एस्ट्रस में केवल 38% महिलाओं को वैसक्टोमाइज्ड पुरुषों (एन = 24) द्वारा प्लग किया गया था। सीडी 1 चूहों में कृत्रिम गर्भाधान हार्मोन, गर्भाशय ग्रीवा हेरफेर और शुक्राणु के गर्भाशय हस्तांतरण के साथ एस्ट्रस सिंक्रनाइज़ेशन द्वारा किया गया था। गर्भाशय ग्रीवा हेरफेर (एन = 76) प्राप्त करने वाले कृत्रिम गर्भाधान प्राप्तकर्ताओं की गर्भावस्था दर 72% थी और औसत कूड़े का आकार 8.3 पिल्ले था। इस विधि का उपयोग गैर-सर्जिकल भ्रूण हस्तांतरण के लिए छद्म गर्भवती महिलाओं का उत्पादन करने के लिए भी किया जा सकता है। इसलिए, गर्भाशय ग्रीवा के हेरफेर द्वारा छद्म गर्भावस्था को प्रेरित करना गैर-शल्य चिकित्सा सहायता प्राप्त प्रजनन तकनीकों का प्रदर्शन करते समय एक वैसक्टोमाइज्ड पुरुष के साथ संभोग करने का एक सुविधाजनक और कुशल विकल्प है। गर्भाशय ग्रीवा हेरफेर का उपयोग करने से आवश्यक जानवरों की संख्या को कम करके और शल्य चिकित्सा से परिवर्तित पुरुषों की आवश्यकता को समाप्त करके सहायक प्रजनन तकनीकों के लिए 3आर (प्रतिस्थापन, कमी और शोधन) लाभ प्रदान करता है।
सहायक प्रजनन प्रौद्योगिकियों का उपयोग आनुवंशिक रूप से संशोधित माउस मॉडल के उत्पादन के साथ-साथ क्रायोप्रिजर्वेशन से उपभेदों की वसूली, एक समझौता स्वास्थ्य स्थिति से उपभेदों की व्युत्पत्ति और रणनीतिक विवेरियम प्रबंधन के लिए किया जाता है, जिसमें आयु-मिलान वाले समूहों का उत्पादन भी शामिल है। चूहों में सभी सहायक प्रजनन तकनीकों को भ्रूण के विकास के लिए छद्म गर्भवती महिला प्राप्तकर्ताओं के उपयोग की आवश्यकता होती है। ऐतिहासिक रूप से, छद्म गर्भवती प्राप्तकर्ता बाँझ पुरुषों के साथ संभोग करके उत्पन्न होते हैं, जो या तो शल्य चिकित्सा से वासेक्टोमाइज्ड या आनुवंशिक रूप से होते हैं, और अगली सुबह1 बजे एक कॉपुलेशन प्लग की उपस्थिति का आकलन किया जाता है। हाल ही में, चूहों में सोनिक उत्तेजना के लिए एक प्रोटोकॉल प्रोन्यूक्लियर या दो-सेल माउस भ्रूण2 के सर्जिकल हस्तांतरण के लिए विकसित किया गया है। हमने कृत्रिम गर्भाधान और ब्लास्टोसिस्ट के गैर-सर्जिकल भ्रूण हस्तांतरण के साथ उपयोग के लिए एक ग्रीवा हेरफेर (सीएम) प्रोटोकॉल भी विकसित किया है। प्रक्रिया के उपयोग के लिए तर्क आवश्यक जानवरों की संख्या में 3आर की कमी प्रदान करना है (अब नर चूहों की आवश्यकता नहीं है) और उपयोग की जाने वाली तकनीकों का शोधन (अब पुरुष चूहों के लिए सर्जिकल पुरुष नसबंदी प्रक्रिया की आवश्यकता नहीं है)। इस प्रोटोकॉल के विवरण में सामान्य वर्कफ़्लो ज़ में सीएम के एकीकरण में सहायता के लिए संबद्ध सहायक प्रजनन तकनीक शामिल है। सीएम विधि का समग्र लक्ष्य कृत्रिम गर्भाधान और भ्रूण हस्तांतरण सहित सहायक प्रजनन तकनीकों के लिए छद्म गर्भवती महिलाओं की पीढ़ी में नर चूहों के उपयोग को प्रतिस्थापित करना है।
यहां वर्णित सीएम प्रोटोकॉल को पहली बार चूहों में कृत्रिम गर्भाधान के साथ सहायता के लिए विकसित किया गया था। कृत्रिम गर्भाधान प्रोटोकॉल, जैसा कि मूल रूप से वर्णित है, ने 50% की गर्भावस्था दर हासिल की, जिसमें 7 पिल्ले3 के औसत कूड़े का आकार था। सीडी 1 प्राप्तकर्ता चूहों को गर्भाधान से पहले 47 घंटे के अंतराल पर गर्भवती घोड़ी सीरम गोनाडोट्रोपिन (पीएमएसजी) और मानव कोरियोनिक गोनाडोट्रोपिन (एचसीजी) सहित हार्मोन की कम खुराक के साथ सिंक्रनाइज़ किया गया था। एस्ट्रस सिंक्रनाइज़ेशन का एक लाभ यह था कि इसने सामान्य कामकाजी घंटों के दौरान प्रोटोकॉल के उपयोग की अनुमति दी। कृत्रिम गर्भाधान के तुरंत बाद मादाओं को वैसक्टोमाइज्ड पुरुषों के साथ जोड़ा गया था, और संभोग की पुष्टि एक कॉपुलेशन प्लग की उपस्थिति से की गई थी। प्राप्तकर्ताओं के साथ संभोग दर में असंगति को प्रक्रिया में कठिनाई के रूप में रिपोर्ट किया गया था। इसलिए, छद्म गर्भावस्था के प्रेरण के लिए संभोग के विकल्प मांगे गए थे।
वर्तमान अध्ययन छद्म गर्भवती महिलाओं के उत्पादन की दक्षता बढ़ाने के लिए एक मानकीकृत सीएम तकनीक प्रस्तुत करता है। एस्ट्रस या प्रोस्ट्रस में महिलाओं के लिए, एक छोटी प्लास्टिक रॉड के कुंद छोर को गर्भाशय ग्रीवा से संपर्क करने के लिए योनि से डाला जाता है और ट्रिमर के संपर्क में आने से 30 सेकंड तक कंपन होता है। प्रक्रिया एक तार-शीर्ष पिंजरे पर की जाती है। कोई संज्ञाहरण या एनाल्जेसिया की आवश्यकता नहीं है। सीएम तकनीक छद्म गर्भवती महिलाओं के उत्पादन के लिए सुविधाजनक है, जो गैर-सर्जिकल कृत्रिम गर्भाधान के बाद वासटोमाइज्ड पुरुषों के साथ संभोग की आवश्यकता के बिना कूड़े का उत्पादन कर सकती है। सीएम का उपयोग भ्रूण हस्तांतरण के प्राप्तकर्ताओं के रूप में छद्म गर्भवती महिलाओं के उत्पादन के लिए भी किया जा सकता है। विशेष रूप से, सीएम तकनीक को गैर-सर्जिकल भ्रूण स्थानांतरण के साथ जोड़ा जा सकता है, जैसा कि यहां वर्णित है। चूहों 4,5 और चूहों 6,7 में ब्लास्टोसिस्ट चरण भ्रूण के भ्रूण हस्तांतरण के लिए गैर-शल्य चिकित्सा विधियों को प्रभावी दिखाया गया है। चूंकि यह गैर-शल्य चिकित्सा विधि शल्य चिकित्सा विधियों का एक प्रभावी विकल्प है, इसलिए इसे तकनीक का 3आरएस शोधन माना जाता है। पिछले शोध के आधार पर, तनाव के उपाय के रूप में फेकल कॉर्टिकोस्टेरोन का स्तर इंगित करता है कि प्रक्रिया की गैर-सर्जिकल प्रकृति कृन्तकों में तनाव के स्तर में वृद्धि नहीं करतीहै 7,8. प्रक्रियाएं सर्जिकल भ्रूण हस्तांतरण की तुलना में कम तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण हैं और प्रदर्शन करने के लिए बहुत तेज हैं। चूंकि भ्रूण को गर्भाशय में स्थानांतरित किया जाता है, इसलिए गर्भाशय के विकास के लिए सही चरण के भ्रूण को स्थानांतरित किया जाना चाहिए। चूहों के लिए, ब्लास्टोसिस्ट को 2.5 दिनों के पोस्ट कोइटम (डीपीसी) स्यूडोप्रेग्नेंट प्राप्तकर्ताओं में स्थानांतरित कर दिया जाता है।
यहां वर्णित दो गैर-शल्य चिकित्सा तकनीकों के लिए, हार्मोन प्रशासन और सीएम तकनीक का समय भिन्न होता है। एस्ट्रस के सापेक्ष सीएम प्रक्रिया का समय सफलता के लिए महत्वपूर्ण है, क्योंकि यह छद्म गर्भवती प्राप्तकर्ताओं के उत्पादन के लिए प्राकृतिक संभोग को प्रतिस्थापित करता है। छद्म गर्भावस्था को प्रेरित करने के लिए वैसक्टोमाइज्ड पुरुषों की आवश्यकता को समाप्त करके, यह प्रक्रिया आवश्यक जानवरों की संख्या को कम करने और शल्य चिकित्सा से परिवर्तित पुरुषों की आवश्यकता को समाप्त करके 3आर लाभ प्रदान करती है। प्रक्रिया स्वयं त्वरित (30 एस) है और संज्ञाहरण या एनाल्जेसिया की आवश्यकता नहीं है। तकनीक सहायक प्रजनन के लिए छद्म गर्भवती महिलाओं के उत्पादन की विश्वसनीयता और पूर्वानुमान को बढ़ाती है।
3आर अनुसंधान में पशु उपयोग के लिए एक नैतिक ढांचा है, जैसा कि 1959 में रसेल और बर्च द्वारा “मानवीय प्रायोगिक तकनीक के सिद्धांत” 15 में वर्णित है। 3आर पशु उपयोग में प्रतिस्थापन, कमी और शोधन का प्रतिनिधित्व करते हैं। यहां हाइलाइट किए गए प्रोटोकॉल 3आर के साथ संरेखण में हैं। गर्भाशय ग्रीवा हेरफेर तकनीक अब छद्म गर्भवती महिलाओं का उत्पादन करने के लिए पुरुषों के उपयोग की आवश्यकता नहीं होने से आवश्यक जानवरों की संख्या को कम करती है। तकनीक पुरुषों पर नसबंदी करने की आवश्यकता को भी समाप्त करती है, इस प्रकार दर्द और संकट को कम करके शोधन प्रदान करती है। यहां वर्णित सहायक प्रजनन तकनीक (कृत्रिम गर्भाधान और भ्रूण हस्तांतरण) गैर-शल्य चिकित्सा हैं, और इस प्रकार, दोनों अपने शल्य चिकित्सा विकल्पों के कारण दर्द और संकटकोकम करके 3आर शोधन प्रदान करते हैं।
चूहों में सहायक प्रजनन करते समय पिल्ले की वसूली के लिए छद्म गर्भवती मादाओं का उपयोग आवश्यक है। सीएम प्रक्रिया छद्म गर्भवती महिलाओं के उत्पादन के लिए एक प्रभावी तरीका है, लेकिन प्राप्तकर्ता महिलाओं के एस्ट्रस चक्र के चरण का सिंक्रनाइज़ेशन प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण पहला कदम है। एस्ट्रस सिंक्रनाइज़ेशन संभावित प्राप्तकर्ताओं को तैयार करने के लिए कॉलोनी में आवश्यक महिलाओं की संख्या को काफी कम कर सकता है और मांग पर समयबद्ध छद्म गर्भवती महिलाओं के उत्पादन में सहायता कर सकता है। हार्मोन की कम खुराक का उपयोग सीडी 1 चूहों में जीवित कूड़े की वसूली पर कोई हानिकारक प्रभाव नहीं डालता है। हार्मोन और एकाग्रता संयोजन को खोजने के लिए अन्य उपभेदों के साथ देखभाल की जानी चाहिए जो भ्रूण या शुक्राणु स्थानांतरित के लिए सबसे अच्छी गुणवत्ता वाली प्राप्तकर्ता महिलाओं का उत्पादन करती है। पीएमएसजी और एचसीजी16 का उपयोग करके सिंक्रनाइज़ेशन प्राप्त किया जा सकता है, लेकिन सुपरवुलेटेड महिलाओं का उत्पादन करने वाली खुराक निरंतर गर्भावस्थाके लिए उपयुक्त नहीं हो सकती है।
यह निर्धारित करने के लिए कि क्या एक महिला एस्ट्रस में है, इस काम में एक साइटोलॉजिकल मूल्यांकन किया गया था। योनि के उद्घाटन11,18 के अवलोकन से एस्ट्रस चरण का भी मूल्यांकन किया जा सकता है। हालांकि यह विधि बेहद उपयोगी है और इसका उपयोग स्वयं या पुष्टि के रूप में किया जा सकता है, यह कोशिका विज्ञान के उपयोग से अधिक व्यक्तिपरक है। धुंधला होने के बिना योनि कोशिका विज्ञान एस्ट्रस में महिलाओं को चुनने के लिए तेजी से और प्रभावी दोनों है क्योंकि कॉर्निफाइड उपकला कोशिकाओं को आसानी से पहचाना जा सकता है। इस प्रोटोकॉल में, संभावित प्राप्तकर्ताओं को निर्धारित करने के लिए सीएम से पहले साइटोलॉजिकल मूल्यांकन किया जाता है। सीएम से पहले कोशिका विज्ञान करना महत्वपूर्ण है, क्योंकि प्रक्रिया योनि क्षेत्र से कोशिकाओं को विभाजित करती है, इस प्रकार पहचान मुश्किल हो जाती है। स्यूडोप्रेग्नेंसी या गर्भावस्था के लिए साइटोलॉजिकल मूल्यांकन लगातार 3 दिनों के लिए सीएम (डीपीसीएम) के बाद 3.5-11.5 दिनों में किया जा सकता है। एक एस्ट्रस साइक्लिंग मादा की प्रोफ़ाइल में कॉर्निफाइड एपिथेलियल कोशिकाओं की काफी घुसपैठ के साथ कम से कम 1 दिन होना चाहिए। गर्भवती महिलाओं को लगातार 3 दिनों के लिए एक डायस्ट्रस प्रोफाइल (ज्यादातर संभावित रूप से कम सेल संख्या वाले ल्यूकोसाइट्स) प्रदर्शित करना चाहिए।
सीएम तकनीक के विकास के माध्यम से, कुछ चूहों को दूसरों की तुलना में प्रक्रिया के लिए अधिक ग्रहणशील पाया गया। सीडी 1 मादा चूहे अपने शांत स्वभाव और उत्कृष्ट पोषण प्रवृत्ति के कारण उत्कृष्ट उम्मीदवार हैं। इस तनाव को संभालना आसान है और सीएम और गैर-सर्जिकल सहायता प्राप्त प्रजनन तकनीकों के दौरान अच्छा प्रदर्शन करता है। C57Bl/6 चूहे अधिक आक्रामक और कम पोषण करने वाले होते हैं। जबकि इस प्रोटोकॉल ने प्रभावी रूप से सीएम का उपयोग करके छद्म गर्भवती सी 57बीएल / 6 महिलाओं का उत्पादन किया, उन्हें प्रक्रिया के लगातार अनुमेय होने की संभावना कम थी। यह सीएम के दौरान सबसे कठिन चरण के साथ कुछ हद तक सहसंबंधित प्रतीत होता था। जानवर के प्रवेश के लिए एक संवर्धन ट्यूब के उपयोग ने प्रक्रिया के लिए योनि तक पहुंच की अनुमति दी और मादा को शांत करने में मदद की। प्रक्रिया स्वयं मादा को पूरी तरह से नियंत्रित नहीं करती है, इसलिए जानवर किसी भी समय दूर खींच सकता है। यदि ऐसा होता है, तो जानवर को पुनर्स्थापित किया जा सकता है, और प्रक्रिया को तब जारी रखा जा सकता है। प्रक्रिया का समय बंद हो जाता है यदि महिला दूर चली जाती है और प्रक्रिया फिर से शुरू होने पर फिर से शुरू होती है। प्रक्रिया की सफलता के लिए महत्वपूर्ण एस्ट्रस चक्र (देर से प्रोस्ट्रस और एस्ट्रस) का चरण और गर्भाशय ग्रीवा के साथ रॉड का संपर्क है। ट्रिमर का कंपन मानकीकृत सीएम प्रदान करता है। गर्भाशय ग्रीवा के साथ संपर्क सुनिश्चित करने के लिए, रॉड पर कोमल दबाव लागू किया जाता है, और गर्भाशय ग्रीवा के खिलाफ रॉड की स्थिति रॉड के छोटे आगे-पीछे आंदोलनों के साथ सुनिश्चित की जाती है।
सीएम के उपयोग ने एनएसएआई प्रोटोकॉल में सुधार किया है, क्योंकि शुक्राणु स्थानांतरण से पहले एस्ट्रस चक्र के सही चरण में महिलाओं को चुना जा सकता है, और प्रोटोकॉल अब वैसक्टोमाइज्ड पुरुषों के साथ संभोग पर निर्भर नहीं है। कृत्रिम गर्भाधान एस्ट्रस चक्र सिंक्रनाइज़ेशन को इस तरह से निर्धारित किया जाता है कि अंडाणु परिपक्वता दिन 4 की सुबह शुक्राणु हस्तांतरण से मेल खाती है। प्रोटोकॉल की सफलता के लिए महत्वपूर्ण ओव्यूलेशन के समय का अनुकूलन है जैसे कि निषेचन हो सकता है। अपेक्षित शुक्राणु हस्तांतरण से पहले एचसीजी 15-17 घंटे का प्रशासन करने के लिए देखभाल की जानी चाहिए, जैसा कि इन विट्रो फर्टिलाइजेशन1 के लिए उपयोग किए जाने वाले समय के लिए सुझाया गया है। शुक्राणु के नमूने की गुणवत्ता सीधे कृत्रिम गर्भाधान के परिणाम को प्रभावित करेगी। ताजा शुक्राणु जो कैपेसिटेटेड हो चुके हैं, वे सबसे अच्छा प्रदर्शन करेंगे। अच्छी गुणवत्ता के क्रायोसंरक्षित शुक्राणु विवो में निषेचित भ्रूण का उत्पादन कर सकते हैं। हालांकि, पिघले हुए शुक्राणु के प्रत्यक्ष हस्तांतरण के साथ देखभाल की जानी चाहिए, क्योंकि गर्भाशय के सींग में स्थानांतरित अवशिष्ट क्रायोप्रोटेक्टेंट्स आरोपण (अप्रकाशित अवलोकन) को रोक सकते हैं।
भ्रूण हस्तांतरण के साथ संयोजन में सीएम का उपयोग वैचारिक रूप से एक आसान अनुकूलन है। एस्ट्रस चक्र सिंक्रनाइज़ेशन प्राप्तकर्ता पूल के उत्पादन के लिए आवश्यक महिलाओं की संख्या को कम करता है। सीएम से पहले एस्ट्रस चरण का निर्धारण करने से छद्म गर्भवती प्राप्तकर्ताओं को प्राप्त करने की संभावना बढ़ जाती है। विधि का एक दोष यह है कि भ्रूण हस्तांतरण के समय प्राप्तकर्ताओं की कोशिका विज्ञान प्रवाह के एक चरण में है। सभी सेल प्रकार मौजूद होते हैं यदि मादा एस्ट्रस से स्यूडोप्रेग्नेंसी प्रोफाइल में संक्रमण कर रही है, और स्यूडोप्रेग्नेंसी केवल तभी स्पष्ट हो जाती है जब कोशिका विज्ञान को कई दिनों तक ट्रैक किया जाता है। सीडी 1 और सी 57बीएल / 6 चूहों के लिए एस्ट्रस से स्यूडोप्रेग्नेंसी में संक्रमण की सफलता (>80%) के आधार पर, यह विधि भ्रूण हस्तांतरण प्राप्तकर्ताओं के लिए उपयुक्त होने की उम्मीद है। प्रारंभिक परिणाम सीमित गैर-सर्जिकल भ्रूण हस्तांतरण के साथ अच्छी सफलता दिखाते हैं। सामान्य तौर पर, गैर-सर्जिकल भ्रूण हस्तांतरण की दक्षता सर्जिकल तकनीक4,5 के बराबर है, और गैर-सर्जिकल स्थानांतरण ब्लास्टोसिस्ट चरण में सर्जिकल भ्रूण स्थानांतरण को प्रतिस्थापित कर सकता है। पहले चरण के भ्रूण के लिए, ब्लास्टोसिस्ट चरण के लिए भ्रूण संस्कृति की आवश्यकता होती है। हालांकि, यदि एक सर्जिकल स्थानांतरण को प्राथमिकता दी जाती है, तो सीएम तकनीक को उचित छद्म गर्भवती प्राप्तकर्ताओं के लिए आवश्यक सहीसमय के अनुकूल बनाना संभव है। सामान्य तौर पर, भ्रूण प्राप्तकर्ता भ्रूण की तुलना में 1 दिन कम उन्नत होते हैं। उदाहरण के लिए, ब्लास्टोसिस्ट को दाताओं से 3.5 डीपीसी पर काटा जाता है और 2.5 डीपीसी प्राप्तकर्ताओं को स्थानांतरित किया जाता है। इसलिए, सीएम को इस तरह से करने की आवश्यकता होगी कि प्राप्तकर्ता भ्रूण की तुलना में कम विकसित छद्म गर्भवती अवस्था में हो।
अंत में, यहां उल्लिखित सीएम तकनीक चूहों के लिए अन्य सहायक प्रजनन तकनीकों के साथ एकीकरण के लिए उत्कृष्ट वादा दिखाती है। हमने गैर-सर्जिकल तकनीकों का उपयोग करके कृत्रिम गर्भाधान और भ्रूण हस्तांतरण के लिए सफल प्रोटोकॉल प्रदान किए हैं। संयोजन में, सीएम तकनीक 3 आरएस लाभ प्रदान करती है, जिसमें (1) नसबंदी पुरुषों की आवश्यकता को समाप्त करके जानवरों की संख्या में कमी और (2) गैर-शल्य चिकित्सा विकल्पों के साथ शल्य चिकित्सा तकनीकों को बदलकर तकनीकों का शोधन शामिल है।
The authors have nothing to disclose.
इस प्रकाशन में रिपोर्ट किए गए शोध को पुरस्कार संख्या R43OD020304 के तहत राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के निदेशक कार्यालय, अनुसंधान अवसंरचना कार्यक्रम कार्यालय और पुरस्कार संख्या R44MH122117 के तहत राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के राष्ट्रीय मानसिक स्वास्थ्य संस्थान द्वारा समर्थित किया गया था। सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिम्मेदारी है और जरूरी नहीं कि राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व करती हो।
Blastocyst stage embryos | |||
CARD Fertiup Preincubation Medium (PM) | CosmoBio | KYD-002-EX | For sperm capacitation |
Embryo handling pipette | Cook Medical | K-FPIP-1120-10BS | Flexipet is available in various diameters |
Embryo handling pipette assembly | Paratechs | 90010 | |
Female mice, Crl:CD1(ICR) | Charles River Laboratories | 22 | >8 weeks old |
Forceps | Fine Science Tools | 11053-10 | Toothed, for dissection |
Forceps | Fine Science Tools | 11052-10 | Curved, for dissection |
Forceps | Fine Science Tools | Dumont #5 | Fine, for dissection |
Hemocytometer | Fisher Scientific | 267110 | Optional |
human Chorionic Gonadotropin (hCG) | Prospec | hor-250 | For estrus synchronization |
Incubator, 37 °C 5% CO2 | Thermo Scientific | ||
Incubator, 37 °C, benchtop | Cook | K-MINC-1000 | |
Kimwipes | Kimberly-Clark | 34155 | Absorbant tissues |
M2 medium | Millipore | MR-015-D | Embryo handling medium |
Male mice, Crl:CD1(ICR) | Charles River Laboratories | 22 | >8 weeks old |
mC&I device | ParaTechs | 60020 | For sperm transfer, specula included |
mCM rod | ParaTechs | 90050 | Smooth, blunt, with a diameter @3 mm |
Microscope | Olympus | SZX7 | 20x and 40x magnification with transmitted and reflected illumination source for embryo work and dissections |
Microscope | ACCU-SCOPE | 3032 | 100x magnification with bright field illumination |
Microscope slides | Fisher Scientific | 12-544-7 | |
mNSET device | ParaTechs | 60010 | For embryo transfer, specula included |
Needles, 26 G | Exel | 26402 | |
Papanicolaou Staining System | VWR | 76265-730 | Optional |
Paraffin oil | Sigma-Aldrich | 18512 | |
Pipette, P200 | Corning | 4074 | Fits the C&I device for sperm transfer |
Pipette, PR-2 | Rainin | 17008648 | Fits the NSET device for embryo transfer |
Pregnant Mare Serum Gonadotropin (PMSG) | Prospec | hor-272 | For estrus synchronization |
Scale | American Weigh Scales | LB-1000 | |
Scissors | Fine Science Tools | 14068-12 | Dissection |
Scissors | Fine Science Tools | 14081-09 | Angled, dissection |
Swabs, Constix | Contec | SC-4 | For vaginal cytology |
Syringes, 1 cc | Becton Dickenson and Company | 309659 | |
Tissue culture dishes, 35 mm | Falcon | 353001 | |
Tissue culture dishes, 60 mm | Falcon | 353004 | |
Trimmer | Wahl | ChroMini T-Cut | |
Wire bar topped mouse cage |