Injection intrathécale de souris nouveau-née pour l’édition du génome et l’administration de médicaments

Résumé

Le présent protocole décrit les instructions étape par étape pour effectuer des injections intrathécales chez les souris néonatales pour l’édition de gènes et l’administration de médicaments.

Résumé

L’injection intrathécale est une procédure couramment utilisée dans les cliniques pédiatriques et adultes, servant de moyen efficace d’administrer des médicaments et des traitements. En administrant directement des médicaments et des traitements dans le liquide céphalo-rachidien du système nerveux central, cette méthode permet d’obtenir des concentrations localisées plus élevées de médicaments tout en réduisant les effets secondaires systémiques par rapport à d’autres voies telles que les injections intraveineuses, sous-cutanées ou intramusculaires. Son importance s’étend au-delà des paramètres cliniques, car l’injection intrathécale joue un rôle essentiel dans les études précliniques axées sur le traitement des troubles neurogénétiques chez les rongeurs et autres grands animaux, y compris les primates non humains. Cependant, malgré son application généralisée, l’injection intrathécale chez les jeunes, en particulier les nouveau-nés, pose des défis techniques importants en raison de leur petite taille et de leur nature fragile. L’administration réussie et fiable d’injections intrathécales chez les souris nouveau-nées nécessite une attention méticuleuse aux détails et un examen minutieux de divers facteurs. Il est donc crucial de disposer d’un protocole normalisé qui non seulement fournit des instructions, mais met également en évidence les principales considérations techniques et les bonnes pratiques de laboratoire afin d’assurer la cohérence des procédures, ainsi que la sécurité et le bien-être des animaux.

Pour répondre à ce besoin non satisfait, nous présentons un protocole détaillé et complet pour effectuer des injections intrathécales spécifiquement chez les nouveau-nés au jour 1 postnatal (P1). En suivant les instructions étape par étape, les chercheurs peuvent effectuer en toute confiance des injections intrathécales chez les chiots nouveau-nés, permettant l’administration précise de médicaments, d’oligos antisens et de virus pour le remplacement de gènes ou les traitements basés sur l’édition du génome. De plus, l’importance d’adhérer aux bonnes pratiques de laboratoire est soulignée pour maintenir le bien-être des animaux et garantir des résultats expérimentaux fiables. Ce protocole vise à relever les défis techniques associés aux injections intrathécales chez la souris néonatale, facilitant ainsi les avancées dans le domaine de la recherche neurogénétique qui vise à développer des interventions thérapeutiques potentielles.

Introduction

L’injection intrathécale (IT) est une procédure clinique courante utilisée pour administrer des médicaments, recueillir du liquide céphalo-rachidien et maintenir la pression intracrânienne chez les patients pédiatriques et adultes dans les cliniques ^1,2. L’administration de médicaments par injection intrathécale est une approche efficace pour augmenter les concentrations de médicaments dans le système nerveux central (SNC) tout en minimisant l’exposition systémique. Par conséquent, cette méthode améliore l’efficacité thérapeutique et réduit les effets secondaires, en particulier pour les médicaments s....

Protocole

Les procédures et protocoles décrits étaient conformes aux lignes directrices énoncées dans le Guide des National Institutes of Health pour les soins et l’utilisation des animaux de laboratoire. De plus, les procédures ont reçu l’approbation du comité de soin et d’utilisation des animaux de la faculté de médecine de l’Université Yale. Des souris mâles et femelles C57BL/6J de type sauvage nouveau-né (WT) ont été utilisées pour l’étude présentée. Les animaux ont été obtenus d’une source commerciale (voir la Table des matières).

1. Préparation de l’espace de travail

1. Préparez d’abord les éléments suiv....

Résultats

L’injection intrathécale réussie a immédiatement entraîné la distribution généralisée de la solution administrée, bien que la pénétration cellulaire réelle dépende de la nature des médicaments et des matériaux délivrés. Dans cette étude, nous avons utilisé Fast Green pour visualiser les résultats immédiats après injection intrathécale (IT) chez les nouveau-nés de type sauvage (Figure 1A-K) et l’avons comparée à l’injection intraventriculaire conventionnelle .......

Discussion

Il s’agit d’une procédure étape par étape pour l’injection intrathécale chez les souris nouveau-nées (P1), entraînant une distribution généralisée de médicaments dans leur cerveau. Par rapport à la méthode d’injection intra-ventriculaire courante pour administrer des médicaments aux souris nouveau-nées, qui consiste à percer le cortex cérébral¹¹, l’injection intrathécale évite les lésions directes au cerveau de la souris néonatale dues à la pénétration de l’aiguille. En raison de son caractère peu.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Balance	Ohaus Corporation	30253017
souris C57BL/6J	The Jackson Laboratory	000664
Microscope numérique	RWD	DOM-1001
DPBS	ThermoFisher	14190144
Fast Green	Sigma	F7252-5G
Coussin chauffant	RWD	69020
Aiguilles	Hamilton	6PK (34/0.375"/4/12DEG)S
Seringue	Hamilton	1702RN
Seringue Filtres	Sigma	SLGVM33RS