जीनोम संपादन और दवा वितरण के लिए नवजात माउस का इंट्राथेकल इंजेक्शन
Summary
वर्तमान प्रोटोकॉल जीन संपादन और दवा वितरण के लिए नवजात चूहों में intrathecal इंजेक्शन प्रदर्शन के लिए कदम दर कदम निर्देश रूपरेखा.
Abstract
इंट्राथेकल इंजेक्शन बाल चिकित्सा और वयस्क क्लीनिक दोनों में आमतौर पर नियोजित प्रक्रिया है, जो दवाओं और उपचारों को प्रशासित करने के लिए एक प्रभावी साधन के रूप में कार्य करता है। केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के मस्तिष्कमेरु द्रव में सीधे दवाओं और उपचारों को वितरित करके, यह विधि अन्य मार्गों जैसे अंतःशिरा, चमड़े के नीचे या इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन की तुलना में प्रणालीगत दुष्प्रभावों को कम करते हुए उच्च स्थानीयकृत दवा सांद्रता प्राप्त करती है। इसका महत्व नैदानिक सेटिंग्स से परे फैली हुई है, क्योंकि इंट्राथेकल इंजेक्शन गैर-मानव प्राइमेट्स सहित कृन्तकों और अन्य बड़े जानवरों में न्यूरोजेनेटिक विकारों के इलाज पर केंद्रित प्रीक्लिनिकल अध्ययनों में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। हालांकि, इसके व्यापक अनुप्रयोग के बावजूद, युवा, विशेष रूप से नवजात पिल्ले में इंट्राथेकल इंजेक्शन, उनके छोटे आकार और नाजुक प्रकृति के कारण महत्वपूर्ण तकनीकी चुनौतियां पैदा करता है। नवजात चूहों में intrathecal इंजेक्शन के सफल और विश्वसनीय प्रशासन विस्तार और विभिन्न कारकों की सावधान विचार करने के लिए सावधानीपूर्वक ध्यान देने की आवश्यकता है. इस प्रकार, वहाँ एक मानकीकृत प्रोटोकॉल है कि न केवल निर्देश प्रदान करता है, लेकिन यह भी प्रक्रियात्मक स्थिरता सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण तकनीकी विचारों और अच्छी प्रयोगशाला प्रथाओं पर प्रकाश डाला गया के लिए एक महत्वपूर्ण आवश्यकता है, साथ ही सुरक्षा और पशुओं के कल्याण.
इस अपूर्ण आवश्यकता को पूरा करने के लिए, हम विशेष रूप से प्रसवोत्तर दिन 1 (पी 1) पर नवजात पिल्ले में इंट्राथेकल इंजेक्शन करने के लिए एक विस्तृत और व्यापक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। चरण-दर-चरण निर्देशों का पालन करके, शोधकर्ता आत्मविश्वास से नवजात पिल्लों में इंट्राथेकल इंजेक्शन कर सकते हैं, जिससे जीन प्रतिस्थापन या जीनोम संपादन-आधारित उपचार के लिए दवाओं, एंटीसेंस ओलिगोस और वायरस की सटीक डिलीवरी सक्षम हो सकती है। इसके अलावा, जानवरों की भलाई को बनाए रखने और विश्वसनीय प्रयोगात्मक परिणामों को सुनिश्चित करने के लिए अच्छी प्रयोगशाला प्रथाओं का पालन करने के महत्व पर जोर दिया जाता है। इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य नवजात चूहों में इंट्राथेकल इंजेक्शन से जुड़ी तकनीकी चुनौतियों का समाधान करना है, अंततः न्यूरोजेनेटिक अनुसंधान के क्षेत्र में प्रगति की सुविधा प्रदान करना है जिसका उद्देश्य संभावित चिकित्सीय हस्तक्षेप विकसित करना है।
Introduction
Intrathecal (आईटी) इंजेक्शन दवाओं प्रशासन के लिए प्रयोग किया जाता है एक आम नैदानिक प्रक्रिया है, मस्तिष्कमेरु द्रव इकट्ठा, और क्लीनिक 1,2 में बाल चिकित्सा और वयस्क रोगियों दोनों में intracranial दबाव बनाए रखने. इंट्राथेकल इंजेक्शन के माध्यम से दवाओं का प्रशासन प्रणालीगत जोखिम को कम करते हुए केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) में दवा सांद्रता बढ़ाने के लिए एक प्रभावी दृष्टिकोण है। नतीजतन, इस विधि चिकित्सीय प्रभावकारिता को बढ़ाता है और साइड इफेक्ट कम कर देता है, विशेष रूप से तापमान के प्रति संवेदनशील और कम आधा जीवन दवाओंके लिए 3.
कृंतक मॉडल का उपयोग कर नई दवाओं और उपचार का परीक्षण preclinical अध्ययन में, यह अधिक से अधिक परिशुद्धता और परिणाम प्रजनन क्षमता 4,5प्रदान करता है कि दवा प्रशासन का एक विश्वसनीय तरीका नियोजित करने के लिए जरूरी है. न्यूरोजेनेटिक और न्यूरोडेवलपमेंटल विकारों के लिए नए उपचारों का मूल्यांकन करने वाले प्रीक्लिनिकल अध्ययनों के लिए, प्रारंभिक उपचार प्रारंभिक प्रमाण-अवधारणा अध्ययनों के लिए महत्वपूर्ण है क्योंकि पहले के हस्तक्षेपों को आमतौर पर अधिक अनुकूल परिणाम 6,7,8प्राप्त करने की भविष्यवाणी की जाती है।
पारंपरिक इंट्रासेरेब्रोवेंट्रिकुलर (आईसीवी) इंजेक्शन की तुलना में, आईटी इंजेक्शन काफी कम जोखिम उठाते हैं क्योंकि वे सेरेब्रल कॉर्टेक्स के माध्यम से सीधे प्रवेश की आवश्यकता को कम करते हैं। यह लाभ क्षेत्रीय कॉर्टिकल ऊतक और आसपास की नसों को संभावित नुकसान को काफी हद तक कम कर देता है। इसके अलावा, आईटी इंजेक्शन एक इंजेक्शन के माध्यम से दवाओं की प्रशासनिक मात्रा में कम से कम पांच गुना वृद्धि की अनुमति देते हैं, जिससे बार-बार प्रशासन की व्यवहार्यता बढ़ जाती है। हालांकि, नवजात चूहों के छोटे आकार और नाजुक प्रकृति के कारण, नवजात पिल्लों में इंट्राथेकल इंजेक्शन करना तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है और इसके लिए विशेष तकनीकों, उपकरणों और सावधानीपूर्वक हैंडलिंग की आवश्यकता होती है।
यह आलेख P1 नवजात पिल्ले में intrathecal इंजेक्शन प्रदर्शन करने के लिए कदम दर कदम निर्देश के साथ एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करता है. प्रक्रिया के दौरान प्रशासन की स्थिरता और जानवरों की सुरक्षा और कल्याण सुनिश्चित करने के लिए यहां महत्वपूर्ण विचारों और अच्छी प्रयोगशाला प्रथाओं पर जोर दिया गया है। इस प्रोटोकॉल का पालन करके, शोधकर्ताओं आत्मविश्वास से सटीक और प्रजनन क्षमता के साथ प्रयोगों का संचालन करते हुए जानवरों के लिए किसी भी संभावित जोखिम या असुविधा को कम कर सकते हैं.
Protocol
Representative Results
Discussion
वर्णित नवजात चूहों (पी 1) में इंट्राथेकल इंजेक्शन के लिए एक कदम-दर-चरण प्रक्रिया है, जिसके परिणामस्वरूप उनके दिमाग में व्यापक दवा वितरण होता है। नवजात चूहों को दवा देने के लिए आम इंट्रासेरेब्रोवेंट्रि?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
एक्सएनएल फाउंडेशन फॉर एंजेलमैन सिंड्रोम चिकित्सीय (फास्ट) पोस्टडॉक्टोरल फैलोशिप द्वारा समर्थित है। YHJ FAST और NIH ग्रांट R01HD110195 और R01MH117289 द्वारा भी समर्थित है।
Materials
| Balance | Ohaus Corporation | 30253017 | |
| C57BL/6J mice | The Jackson Laboratory | 000664 | |
| Digital Microscope | RWD | DOM-1001 | |
| DPBS | ThermoFisher | 14190144 | |
| Fast Green | Sigma | F7252-5G | |
| Heating pad | RWD | 69020 | |
| Needles | Hamilton | 6PK (34/0.375”/4/12DEG)S | |
| Syringe | Hamilton | 1702RN | |
| Syringe Filters | Sigma | SLGVM33RS |
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